一、Priority of TCM in Regulating Gene Function as a Whole Through Development of Modern Biology（论文文献综述）
李文飞[1]（2021）在《运用生物信息分析技术探讨柴胡疏肝散方证关联的现代生物学内涵》文中进行了进一步梳理“方证相关”理论不仅是方剂学的核心命题,也是中医学辨证论治的逻辑基础,方证相关的科学问题是方与证之间的关联程度及其现代生物学基础。方证相关中的“方随证设,因证而效”的逻辑决定了研究中医的方或证有必要将两个方面结合起来,可以收到一箭双雕的效果。肝郁证是中医最常见的证候之一,柴胡疏肝散是中医治疗肝郁证的代表性方剂,目前对肝郁证的现代内涵和柴胡疏肝散的药理作用已开展了大量的研究并取得一定成果,但有关肝郁证与疏肝解郁方之间关联的现代生物学基础仍不清楚。本文试图基于方证相关理论,在了解柴胡疏肝散所含化学成分和柴胡疏肝散现代临床运用所涉病种的基础上,运用现代生物信息分析技术,探查柴胡疏肝散方证关联的现代生物学内涵。论文共包括文献综述、临床调查和生物学分析三个部分。文献综述主要围绕近年来关于方证相关的研究概况,网络药理学的概念及其在中医药研究领域中的应用情况,柴胡疏肝散的临床运用和药理研究三个方面进行了叙述。正文研究一为柴胡疏肝散主治现代疾病的文献调查;研究二为柴胡疏肝散方-病证关联的现代生物学内涵的探查。研究一柴胡疏肝散现代临床主治疾病的调查方法:利用文献检索研究法,以“柴胡疏肝散”为关键词检索CNKI数据库自建库以来到2020年12月的所有文献,对柴胡疏肝散临床运用方面的文献进行搜集、整理和统计分析,确定其主治的主要病种。结果:本次研究共检索到3608条结果,其中涉及该方治疗的有明确的现代疾病诊断且基于中医辨证用方的临床文献共1163篇。经分析发现,柴胡疏肝散被广泛用于内、外、妇、儿等多科共98种疾病,涉及呼吸系统、消化系统、循环系统、内分泌系统、神经系统、运动系统、泌尿系统等多个系统。对病种频次的分析显示,主要疾病共有18种,多为消化系统疾病;其中排名前10位的是慢性胃炎、抑郁症、功能性消化不良、反流性食管炎、胆汁反流性胃炎、胆囊炎、消化性溃疡、乳腺增生、乙型肝炎、心绞痛。结论:柴胡疏肝散主治的现代疾病范围较广,涉及多个系统多种疾病,其中较常运用的有包括慢性胃炎在内的消化系统疾病、抑郁症、乳腺增生、乙型肝炎、心绞痛5种疾病,可被视为柴胡疏肝散主治的主要病种。这5种疾病虽然病理及表现各有不同,但中医辨证选方以柴胡疏肝散一方治疗多种病证的现象,反映了中医“异病同治”,即“同证同治”的经验特色,同时提示该方主治的各种不同疾病可能拥有与肝郁证相关的共同的现代生物学基础。研究二柴胡疏肝散方-病证关联的现代生物学内涵探查方法:（1）选择柴胡疏肝散现代临床运用涉及的5个主要病种,即慢性胃炎、抑郁症、乳腺增生、乙型肝炎、心绞痛,应用生物信息分析手段,通过检索多种疾病基因靶点数据库,构建疾病的分子生物学网络。（2）调查柴胡疏肝散复方化学组成,利用复方网络药理学分析技术,获得该方的分子作用网络。（3）进一步对该方主治的疾病生物学网络和该方作用的药理学网络进行拟合分析,对二者交集部分进行GO功能和KEGG通路富集分析。（4）通过构建柴胡疏肝散成分—肝郁证靶点网络,对其进行拓扑分析,探查柴胡疏肝散—肝郁证关联的效应物质基础,并用分子模拟对接的方法予以模拟验证。结果:（1）慢性胃炎、抑郁症、乳腺增生、乙型肝炎、心绞痛的疾病基因靶点分别为1144、3902、4478、7696、1418个;5个主要病种共同的基因靶点340个;其共同的病生理机制均涉及炎症反应、免疫应答、抗病毒、抗感染、氧化应激、肿瘤转移、DNA损伤、细胞凋亡、衰老、内分泌抵抗、血液循环、腺体发育、异体移植排斥反应等机制;与Th17细胞分化,IL12、CAMs、5-HT、蛋氨酸合成,花生四烯酸合成代谢、过氧化氢代谢、受体配体活性、细胞因子-细胞因子受体相互作用、生长因子受体结合及对激酶、转移酶、蛋白质激酶、Akt活性调节,MAPK活性和级联调节,磷酸酶、激酶结合等相关;共同的通路涉及ERK1和ERK2级联、AGEs-RAGE、HIF-1、PI3K、PI3K-Akt、ErbB、fox0、NF-κB、泌乳素、T 细胞受体、NOD样受体、BNDF、Ras、细胞凋亡信号通路和癌症中的通路,与病毒感染和癌变最多关联。（2）柴胡疏肝散方中共含有256种活性成分,对应靶点有242个;药理作用涉及炎症反应、氧化应激、抗病毒、抗感染、免疫调节、细胞凋亡、血管发育、DNA复制、激酶结合、脂肪代谢、神经元凋亡和胰岛素、雌激素等激素分泌,腺苷酸环化酶调节的G蛋白偶联、DNA结合转录因子活性、转录因子结合、蛋白质激酶活性调节,细胞周期、细胞迁移调节,对机械刺激、辐射、药物的反应,肌肉细胞、上皮细胞增殖,腺体发育,肽基-丝氨酸的磷酸化、RNA聚合酶Ⅱ对pri-miRNA转录的调节、miRNA对参与基因沉默的miRNA的产生的调节、癌症中的转录错误调控、癌症中的MicroRNAs,对糖皮质激素、类固醇激素的反应,白细胞分化,细胞因子-细胞因子受体的相互作用等生物学功能和过程相关,涉及钙离子、cAMP、fox0、VEGF、NF-κB、细胞内类固醇激素受体、泌乳素、甲状腺激素、Rap1、PI3K-Akt、AGEs-RAGE、细胞凋亡信号通路及癌症中的通路等通路,与血液循环、认知、衰老、脂肪代谢、血管发育、内分泌、免疫等生理过程及乙型肝炎、丙型肝炎、HTLV-I感染、Epstein-Barr病毒感染、麻疹、弓形虫病等病毒感染性疾病和小细胞肺癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、膀胱癌、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病等肿瘤相关。（3）该方作用靶点中涉及以上5种疾病的靶点分别有127、216、228、256、172个,共同交集的靶点有96个,涉及STAT3、JUN、TP53等30个关键基因。共同靶点涉及炎症反应,细胞对化学刺激、脂多糖、辐射、药物、肽、创伤、氧含量、活性氧代谢过程、白细胞分化抗原、生长因子等细胞外刺激的反应,对细胞凋亡和离子运输的正向调节,细胞因子产生的调节,上皮细胞增殖、蛋白质分解、铂类药物耐药性、癌症中的转录错误等生物学过程;相关通路主要涉及癌症中的通路,AGEs-RAGE、IL-17、MAPK、NF-κB、VEGF、细胞凋亡信号通路;与病毒及免疫性疾病、癌症和肝脏病变密切相关。（4）柴胡疏肝散关键活性成分有22种,主要来自于方中柴胡、香附、甘草3味,其中最为关键的活性成分是槲皮素、木犀草素、葛根素、氯化矮牵牛素4种,源于方中柴胡、香附两味,尤以柴胡为主,基本与方剂学对该方君臣佐使的定位相吻合。4种成分作用的关键靶点有8个,依次为PTGS2、AR、NOS2、GSK3B、PPARG、HSP90AA1、MAPK14、PTGS1。分子模拟对接显示这4种关键成分与其作用的关键靶点结合活性较好,其作用靶点涉及的生物学机制与方-证关联的生物学内涵相符。结论:1.柴胡疏肝散与肝郁证关联的生物学基础包括:1)炎症反应,涉及细胞因子介导的细胞因子-细胞因子受体的相互作用,尤其是与炎症反应相关的病理生理学环节,其中白介素（包括IL-6、IL-2、IL-1β、IL-4、IL-10）和VEGFA为关键因子,涉及IL-17、NF-κB、VEGF、PI3K-Akt信号通路等通路的调控。2)细胞凋亡,涉及AKT1、TP53、BCL2等介导的细胞凋亡过程及MAPK、NF-κB及凋亡信号通路。3)内分泌调节,涉及前列素、泌乳素、AR等激素和受体的合成与释放,PTGS2、AR、PTGS1为关键靶点。4)氧化应激,涉及对NOS2、HSP90AA1的调节,AGEs-RAGE信号通路为其关键通路。5)免疫调节,涉及Th17细胞分化、异体移植排斥反应等过程,以IL-17信号通路为关键通路。6)对神经系统的调节,涉及神经元凋亡、5-HT合成等过程,BNDF信号通路为关键通路。7)肿瘤发生及其耐药性机制,涉及癌症中的蛋白多糖作用、癌症中的转录错误调控、铂类药物耐药性等生物学过程,STAT3、JUN、FOS、MYC、TP53 等癌症基因,癌症中的通路、MAPK、NF-κB、VEGF信号通路可能为关键通路。2.柴胡疏肝散与肝郁证相关的物质基础:来自于柴胡、香附、甘草3味中药的22种关键成分可能是柴胡疏肝散与肝郁证相关的物质基础,最为关键的活性成分是槲皮素、木犀草苷、葛根素、氯化矮牵牛素4种;涉及关键作用靶点 8 个,依次为 PTGS2、AR、NOS2、GSK3B、PPARG、HSP90AA1、MAPK14、PTGS1。分子对接结果表明,4种关键成分与其各自对应的关键作用靶点间结合活性较好,所对接的靶点及其通路与方-证关联的生物学内涵的主体相符,提示其作为成分配方的表征意义。本研究为柴胡疏肝散方证关联的生物学内涵,特别是为已经了解到的肝郁证和柴胡疏肝散的作用涉及神经-内分泌-免疫网络的调控机制,提供了一定的分子层面的理解,同时也为该方临床进一步拓展运用于免疫失调及癌症的防治提供一定的生物学依据,为以中医证候为主治的基于分子组合的中药新药研发提供参考。
梁学玲[2]（2021）在《喘康贴对哮喘大鼠免疫调节的分子机制研究》文中提出目的在前期研究的基础上,本课题拟运用中药复方网络药理学方法预测喘康贴治疗哮喘的作用靶标,并对其进行互作网络分析,找到发挥治疗作用的关键基因,并进行生物学过程分析及信号通路分析;通过动物实验收集肺组织标本进行全转录组测序,鉴定哮喘的长链非编码RNA（lnc RNA）、闭合环状结构的非编码RNA（circ RNA）、微小非编码RNA（mi RNA）及差异表达信使RNA（m RNA）,构建哮喘相关的竞争性内源RNA（ce RNA）网络,为哮喘的诊断和治疗提供相关的潜在靶标及信号通路;通过网络药理学和全转录组测序初步阐释喘康贴治疗哮喘的“多组分-多靶点-多通路”的作用机制,以便更好的应用于临床。方法（1）借助TCMSP数据库根据最常用的筛选规则（OB≥30%,DL≥0.18）进行筛选,并查阅相关文献初步确定喘康贴的主要化合物及相关靶标;整合Dis Ge NET、CTD、Gene Card、TTD、Drug Bank、OMIM、Pharm GKB疾病数据库筛选哮喘相关靶标;通过STRING在线网站,得到核心靶标的蛋白相互作用网络文件;采用Cytoscape 3.8.0软件构建“中药-化合物-潜在靶标-疾病”网络及蛋白相互作用网络,并利用网络分析工具,筛选出关键作用靶标并进行网络模块化分析;基于Metascape数据库筛选潜在靶标显着富集的生物学过程及信号通路。（2）将18只雄性清洁SD大鼠除正常组外,其余大鼠经过致喘后,按照随机数字表法分为模型组和给药组,每组6只,经过激发诱喘及穴位贴敷治疗后,在麻醉状态下分离右肺中叶,运用全转录组测序技术筛选哮喘差异表达的circ RNA、lnc RNA、mi RNA及m RNA,通过差异表达分析及非编码RNA靶基因预测,最终构建ce RNA调控网络,并对ce RNA调控网络中的m RNA进行GO和KEGG富集分析（对于非编码RNA,其功能注释由与其直接相连的m RNA的功能决定）,得到ce RNA调控网络中显着富集的基因功能和通路。（3）将网络药理学与全转录组测序结果进行比较、分析及验证,得到喘康贴治疗哮喘的作用靶标及相关信号通路,为分析作用机制提供依据。结果（1）网络药理学:共筛选到喘康贴主要化合物成分73个,对应相关靶标235个;收集到哮喘相关靶标484个;将两者进行映射,共得到86个核心靶标;通过STRING在线网站构建蛋白-蛋白相互作用关系共239对,经过分析发现:肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-8（CXCL8）、转录因子AP-1（JUN）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素1β（IL-1B）为网络中的关键作用靶标;GO富集分析和KEGG通路分析表明:喘康贴治疗哮喘主要通过白细胞介素-17（IL-17）信号通路、肿瘤坏死因子（TNF）信号通路、Toll样受体信号通路、辅助性T细胞17（Th17）分化调控通路、低氧诱导因子-1（HIF-1）信号通路、核转录因子（NF）-κB信号通路、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路、辅助性T细胞1（Th1）和辅助性T细胞2（Th2）细胞分化等与抗炎、调节免疫相关的通路发挥作用。（2）全转录组测序:共得到69个mi RNA、884个m RNA、173个lnc RNA、134个circ RNA。经过过滤筛选潜在存在相互作用的ce RNA,构建了lnc RNAmi RNA-m RNA、circ RNA-mi RNA-m RNA调控网络,并对网络中的m RNAs进行GO富集分析和KEGG通路分析,发现其主要参与MAPK信号通路（MAPK signaling pathway）、蛋白质消化吸收（Protein digestion and absorption）、PI3K-Akt信号通路（PI3K-Akt signaling pathway）、TNF信号通路（TNF signaling pathway）（IL-1B与IRF1均富集在此通路上,具体见图11）、P53信号通路（P53 signaling pathway）、IL-17信号通路（IL-17 signaling pathway）、哮喘（Asthma）等与抗炎、免疫调节、疾病相关的通路中发挥作用。（3）比较验证:将网络药理学潜在靶点与ce RNA网络中的m RNA取交集并进行分析,发现白细胞介素1β（IL-1B）和干扰素调节因子1（IRF1）在网络中起重要作用;并对网络药理学与ce RNA网络中的通路取交集,发现与MAPK信号通路、TNF信号通路、IL-17信号通路有关。结论（1）喘康贴干预哮喘涉及多组分、多靶点、多通路;（2）ce RNA调控机制在哮喘的发生、发展中有重要作用,为哮喘后续的靶向治疗提供新的理论基础;（3）根据研究结果分析,IL-1B、IRF1是哮喘相关的关键基因,在哮喘的发生、发展中有重要作用,可能成为治疗哮喘的潜在靶点;（4）MAPK信号通路、TNF信号通路、IL-17信号通路等与抗炎、调节免疫相关的通路与哮喘的发生、发展密切相关,有望为哮喘的治疗开辟新途径。
肖午帅[3]（2021）在《基于内质网应激通路研究五子衍宗丸对EAE的防治作用及分子机制》文中认为目的:本研究通过五子衍宗丸（WYP）干预由雌性C57BL/6小鼠构建的实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）模型,观察WYP对EAE的治疗作用及对其内质网应激（ERS）的影响,为WYP防治多发性硬化（MS）提供理论支撑。方法:雌性C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、WYP组。使用MOG35-55、TB、PTX造模。免疫后第3天起,进行药物干预,正常组和模型组给予生理盐水50m L/（kg·d）灌胃,同时对WYP组给予16g/（kg·d）的WYP药液灌胃治疗,一天2次,持续25天。每天对诸组小鼠的神经功能评分进行记录。免疫后第28天处死,采集小鼠脊髓样本。通过苏木素-伊红染色和卢卡斯快蓝染色分别观察小鼠脊髓组织炎性细胞浸润情况及髓鞘脱失程度。通过Western blot检测小鼠脊髓组织中ERS通路中GRP78、GRP94、p-PERK、p-IRE1α、p-e IF2α、ATF4、XBP1、CHOP、ASK1、p-JNK、Caspase-12、Caspase-9、Caspase-3的蛋白表达。通过荧光PCR检测小鼠脊髓组织中ERS通路上ATF6、ATF6α和ASK1的m RNA表达。结果:1.WYP对EAE小鼠的疗效影响1.1 WYP对EAE小鼠神经功能的影响模型组与正常组比较,平均起病时间、平均最高神经功能评分、平均累计神经功能评分均明显升高（P<0.01）。WYP组与模型组比较,平均起病时间、平均最高神经功能评分、平均累计神经功能评分均降低（P<0.05）。1.2 WYP对EAE小鼠脊髓组织炎性细胞浸润的影响与正常组比,模型组脊髓白质中炎性细胞浸润面积占整个脊髓面积的百分比增多（P<0.01）。与模型组比,WYP组脊髓白质中炎性细胞浸润面积占整个脊髓面积的百分比减少（P<0.05）。1.3 WYP对EAE小鼠脊髓组织髓鞘脱失的影响与正常组相比,模型组脊髓白质髓鞘脱失面积占脊髓白质总面积的百分比增多（P<0.01）。与模型组比较,WYP组脊髓白质髓鞘脱失面积占脊髓白质总面积的百分比减少（P<0.01）。2.WYP对EAE小鼠ERS的影响2.1 WYP对EAE小鼠ERS分子伴侣的影响与正常组比较,模型组中触发ERS的GRP78蛋白表达增加（P<0.01）,GRP94蛋白表达增加（P<0.05）。与模型组比较,WYP组GRP78和GRP94蛋白表达降低（P<0.05）。2.2 WYP对EAE小鼠ERS触发的UPR信号通路的影响模型组与正常组相比,p-PERK、p-IRE1α、p-e IF2α、ATF4和XBP1蛋白表达增加（P<0.05、P<0.01）,ATF6的m RNA表达没有显着变化（P>0.05）,ATF6α的m RNA表达升高（P<0.05）。WYP组与模型组相比,p-PERK、p-IRE1α、p-e IF2α、ATF4和XBP1的蛋白表达降低（P<0.05、P<0.01）,ATF6和ATF6α的m RNA表达下降（P<0.01）。2.3 WYP对EAE小鼠ERS触发的促凋亡途径的影响模型组与正常组相比,Caspase-12、CHOP、Caspase-9、p-JNK和Caspase-3蛋白表达升高（P<0.01、P<0.05）,ASK1在蛋白水平和m RNA水平上没有显着变化（P>0.05）。WYP组与模型组相比,Caspase-12、CHOP、Caspase-9、p-JNK和Caspase-3蛋白表达减少（P<0.05、P<0.01）,ASK1在蛋白水平和m RNA水平的表达下降（P<0.05、P<0.01）。结论:1.WYP能够改善EAE小鼠的神经功能,缓解临床症状,延缓发病,能够减少EAE小鼠中枢神经系统之脊髓组织内炎性细胞浸润和脊髓白质内髓鞘的脱失,减少脊髓组织损伤。2.WYP可能通过下调脊髓组织内PERK、IRE1和ATF6信号通路以降低ERS介导的JNK、CHOP和Caspase-12促凋亡途径的触发,减轻脊髓组织整体的持续的ERS反应程度,以有助减少其对脊髓组织的损伤。
冯浩欣[4]（2021）在《急性冠脉综合征气虚血瘀证和气滞血瘀证患者临床特征及炎症因子差异性研究》文中认为急性冠脉综合征（ACS）是冠状动脉粥样硬化性心脏病的危重类型。调查显示,我国45岁以上人群心肌梗死的患病率逐年升高。冠脉介入治疗挽救了大量危重心肌梗死患者的生命,但是其发病率、死亡率却并未下降。这提示冠心病危险因素尚未得到充分、全面控制,其中炎症反应在冠状动脉粥样硬化斑块失稳定中发挥了重要作用,例如炎症因子能够刺激单核细胞分化为巨噬细胞;巨噬细胞摄取氧化低密度脂蛋白形成泡沫细胞,坏死核心进一步扩大;基质金属蛋白酶类因子降解细胞外基质的胶原蛋白,斑块处纤维帽变薄而破裂等。急性冠脉综合征属于中医“胸痹心痛病”“卒心痛”范畴。研究表明,气虚血瘀证与气滞血瘀证是胸痹心痛患者最为多见的两种证型,而血瘀是这两种证型的共性病理特征。相较于慢性冠脉综合征（CCS）患者,ACS具有起病急、炎症反应剧烈、病情变化迅速等特点,研究炎症因子在ACS急性期的变化有助于对气虚血瘀证和气滞血瘀证患者中医证候病理特征深入了解,为病证结合诊治冠心病提供新视角。本研究通过比较ACS血瘀证不同类型（气虚血瘀证与气滞血瘀证）的临床特征及炎症因子表达水平差异,观察影响患者心功能、冠状动脉病变复杂程度的相关炎症因子,为规范化辨证ACS气病血瘀证提供循证证据。目的:观察ACS气虚血瘀证与气滞血瘀证患者的临床特征及炎症因子表达水平的差异,探索两组证型ACS患者的心功能、冠脉病变程度与炎症因子的相关性。方法:本研究选取2016年8月至2018年3月期间在中国中医科学院西苑医院心血管中心、首都医科大学附属北京安贞医院住院的急性冠脉综合征（ACS）患者为研究对象,所有患者入院后进行冠状动脉造影术及经皮冠状动脉介入术（PCI）治疗,共纳入244例患者,包括气虚血瘀证ACS患者为112例,气滞血瘀证ACS患者为132例。收集患者的一般临床资料、化验指标、超声心动图、血瘀证计分、征候计分及炎症相关因子 Hs-CRP、IL-6、TNF-α、Lp-PLA2、YKL-40、ICAM-1、FGF-21的血清水平,根据冠脉造影结果计算冠脉Gensini评分。对ACS气虚血瘀证与气滞血瘀证患者的化验指标、血瘀证计分、征候计分、冠脉病变特点、冠脉Gensini评分及炎症因子的水平进行统计学分析比较,分别对两组患者的心功能、冠脉Gensini评分与炎症因子的水平进行相关性分析。结果:1.组间比较结果显示:ACS气虚血瘀证和气滞血瘀证患者的性别、年龄、身高、体重、吸烟饮酒史、高血压病史、糖尿病病史、血脂异常病史、中风史、肝肾功能、LVEF、LVEDd水平之间无明显差异（P>0.05）,气虚血瘀证患者的血清pro-BNP、cTnT水平明显高于气滞血瘀证患者（P<0.05）。2.与ACS气滞血瘀证患者比较,气虚血瘀证患者的心绞痛症状计分更高、口唇及齿龈暗、舌下脉络曲张两种征候计分更低（P<0.05）,而血瘀证计分、冠脉血管病变数量、Gensini评分在两组中比较无明显差异（P>0.05）。3.ACS气虚血瘀证患者的Hs-CRP水平明显高于气滞血瘀证,差异具有统计学意义（P=0.014）;IL-6、TNF-α、Lp-PLA2、YKL-40、ICAM-1、FGF-21 六种炎症因子的水平在两种证型患者中比较无明显差异（P>0.05）;4.通过Spearman相关性分析,结果表明:Hs-CRP的血清水平与ACS气滞血瘀证患者的LVEF呈负相关（r=-0.206,P=0.033）,ICAM-1与气滞血瘀证患者的LVEDd呈正相关（r=0.278,P=0.009）;气虚血瘀证患者的心功能与各个炎症因子之间无相关性（P>0.05）。5.对ACS患者冠脉Gensini分数与炎症因子（Hs-CRP、IL-6、TNF-α、Lp-PLA2、YKL-40、ICAM-1、FGF-21）进行相关性分析发现:在气滞血瘀证组患者中,冠脉Gensini分数与IL-6的血清水平之间呈正性相关关系（r=0.292,P=0.001）,而与其他炎症因子之间无相关性（P>0.05）;气虚血瘀证患者的冠脉Gensini分数与炎症因子之间不存在相关性（P>0.05）。结论:1.与ACS气滞血瘀证患者相比,气虚血瘀证患者心绞痛症状更重、口唇及齿龈暗的程度和舌下脉络曲张程度较轻,这三种症候可能有助于气虚血瘀证与气滞血瘀证进行诊断和鉴别;2.在ACS患者中,气虚血瘀证患者的心肌损伤程度更明显、炎症反应程度更重,以Hs-CRP升高为主;3.ACS气滞血瘀证患者的炎症因子水平与心功能呈负相关性,与冠脉Gensini评分呈正相关,即随着炎症因子的水平升高,患者的心功能不全和冠脉病变程度逐渐加重。
魏佳[5]（2021）在《从AMPK-HIF1-PKM2信号通路探讨代谢综合征痰证大鼠的生物学基础》文中指出目的:从方证对应的角度,以二陈汤为干预手段,观察代谢综合征（MS）痰证大鼠临床表现、肝病理结构改变及其能量底物、能量代谢关键酶、AMPK-HIF1-PKM2信号通路等变化情况,以方测证从能量代谢角度揭示MS痰证的生物学基础,为防治MS提供新靶点与新途径。方法:1.文献研究:收集从痰论治MS的相关文献,筛选符合标准的随机对照试验,采用Review Manager5.3软件对纳入研究进行统计分析。2.实验研究:6周龄雄性Wistar大鼠,将大鼠按体重随机分为两组,空白组（n=12）饲喂普通饲料,造模组（n=38）予高糖高盐高脂饲料,共持续12周,12周后根据模型标准筛选成模大鼠,按体重随机分为模型组和二陈汤组,空白组（n=11）和模型组（n=12）给予生理盐水灌胃,二陈汤组（n=12）予二陈汤5.3g/（kd.d）灌胃,持续4周。造模期间每4周动态测量大鼠体重、腹围、血压、乳酸、FBG、HDL、TG等,12周末和16周末补充测量FINS、ALT、AST、TC、LDL,计算Lee’s指数、HOMA-IR。利用HE染色及透射电镜观察肝组织微观结构;采用分光光度法观察血浆及肝乳酸、肝糖原、肝TG等;采用酶联免疫吸附试验测定血清及肝组织ATP、CS、CPT1、HIF-1α及LDH水平,Real-time PCR检测肝组织AMPKα2、PKM2、HIF-1α、CS、CPT1A及LDHA mRNA表达情况,免疫组化法测定肝组织AMPKα2、P-AMPKα、PKM2和P-PKM2蛋白表达。结果:1.文献研究:共纳入15篇文献,纳入1234例研究对象,涉及56味药物;按照用药频次前四依次为半夏、陈皮、茯苓、甘草。Meta分析结果显示:（1）化痰法联合常规西药治疗MS中医临床疗效明显优于常规西药;（2）化痰法联合常规西药在腰围、血糖、血脂等方面疗效明显优于常规西药。2.实验研究:（1）建立MS痰证大鼠模型,予二陈汤干预后,大鼠体重、腹围、血压、血脂及血糖等呈不同程度改善。（2）MS痰证大鼠能量代谢紊乱,与空白组相比,模型组血浆乳酸、血清ATP、LDH、CS、CPT1等含量明显升高（P<0.05）;肝组织ATP、TG、乳酸、LDH、CS、CPT1、HIF-1α等含量升高（P<0.05）;肝组织CPT1A、HIF-1α、PKM2 mRNA表达明显上调（P<0.05）,AMPKα2 mRNA表达明显下调（P<0.05）;肝组织P-PKM2蛋白表达增加,AMPKα2与P-AMPKα蛋白表达减少（P<0.05）。（3）二陈汤可纠正MS痰证能量代谢紊乱,与模型组相比,二陈汤组血浆乳酸、血清ATP、CPT1等含量明显降低（P<0.05）;肝组织ATP、TG、乳酸、LDH、CPT1、HIF-1α等含量降低（P<0.05）;肝组织CPT1A和PKM2 mRNA表达明显下调（P<0.05）,AMPKα2 mRNA表达明显上调（P<0.05）;肝组织P-PKM2蛋白表达减少,PAMPKα蛋白表达增加（P<0.05）。（4）MS痰证模型大鼠肝组织结构与功能明显损伤,血清ALT与AST明显升高,HE染色可见肝细胞核内空洞,细胞质可见大量空泡,汇管区炎细胞浸润;透射电镜结果显示胞质内见大小不等的脂滴,线粒体可见融合、消失,结构不清晰。二陈汤治疗后模型大鼠肝结构功能明显改善。结论:1.二陈汤是从痰论治MS的基础方,从痰论治MS有良好疗效。2.MS痰证早期能量过剩,脂肪酸β氧化增强,葡萄糖利用障碍,无氧糖酵解功能增强。3.肝结构功能损伤是MS痰证的形成的病理机制之一。4.MS痰证大鼠肝AMPKα2的表达和活性上调,HIF-1α表达与PKM2磷酸化水平上调,导致能量代谢关键酶过表达,从而引起MS痰证能量代谢紊乱,提示肝脏AMPK-HIF1-PKM2信号通路可能是MS痰证形成的病理机制之一。5.二陈汤可调节AMPK-HIF1-PKM2途径,可能通过抑制HIF-1与PKM2的蛋白过表达引起的能量代谢紊乱,影响能量代谢关键酶表达,纠正葡萄糖氧化与脂肪酸氧化的动态失衡,促进无氧糖酵解向有氧氧化转变,从而早期防治MS的发生发展,AMPK-HIF1-PKM2途径关键基因与蛋白可能是MS痰证的现代生物学基础。
王超群[6]（2021）在《基于PDX-1通路研究补肾经方对GDM模型孕鼠胎鼠胰腺发育及胰岛素分泌细胞形成的影响》文中研究说明目的:通过体内动物实验,研究补肾经方母代干预对妊娠糖尿病（GDM）模型孕鼠胎鼠胰腺发育的影响;通过体外细胞诱导实验,研究补肾经方含药血清对小鼠胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞诱导分化的影响及其作用机制。方法:第一部分:通过雌雄大鼠2:1同笼合腹腔注射链脲佐菌素（STZ,正常对照组（N）注射生理盐水）的方法制备GDM孕鼠模型,将模型复制成功的孕鼠分为模型对照组（M）、门冬胰岛素组（MD）、六味地黄丸组（LW）、左归丸组（ZG）、右归丸组（YG）、肾气丸组（SQ）,门冬胰岛素以20U·kg-1的剂量皮下注射;其余组分别按5g·kg-1的剂量灌胃,灌胃体积为20m L·kg-1,N组和M组以等体积的生理盐水灌胃,每日一次,灌胃至P16d。实验过程中,观察孕鼠的一般情况,并定时检测其随机血糖、体重、摄食量;实验结束后取材,ELISA法检测孕鼠血清胰岛素水平;HE染色观察孕鼠胰腺、胎盘病理结构;称取胎盘重量,免疫荧光法检测胎盘IGF2的表达;Real Time-PCR及Western-blot法分别检测胎鼠胰腺PDX-1、HNF-3β、Ngn3、Nkx6.1和Insulin的m RNA及蛋白表达;免疫荧光法检测胎鼠胰腺DNMT1、DNMT3a、USP7等甲基化酶的表达;MSP及BSP法检测胎鼠胰腺PDX-1、Ngn3甲基化情况。第二部分:按照小鼠胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞诱导分化的方法,分别用补肾经方含药血清干预诱导,分为正常组（N）、左归丸诱导组（ZG）、六味地黄丸诱导组（LW）、右归丸诱导组（YG）、肾气丸诱导组（SQ）,实验过程中每天观察细胞生长和诱导情况;分别于内胚层期、胰岛前体细胞期、胰岛内分泌前体细胞期、诱导结束后胰岛素分泌细胞期,检测各阶段标志物SOX17、FOXa2、PDX-1、Ngn3、Nkx6.1的m RNA和蛋白表达;细胞成熟后,双硫腙染色鉴定细胞诱导是否成功;检测Insulin的m RNA和蛋白表达;不同浓度葡萄糖刺激后,检测培养液中Insulin及C-肽的表达,测定细胞的分泌能力。结果:第一部分:（1）模型制备结束后,GDM模型组孕鼠出现明显的多饮、多食、多尿症状;胰腺组织出现胰岛体积缩小、胰岛细胞数量减少、空泡样改变以及炎性细胞浸润、明显出血点的病理变化;胎盘重量无变化,胎盘组织出现蜕膜区变窄、毛细血管扩张、滋养细胞溶解坏死、细胞胞质空泡样变化等病理改变;M组孕鼠随机血糖、摄食量明显高于N组（P<0.05）,体重显着降低（P<0.05）;M组胎盘IGF2、胎鼠胰腺PDX-1、HNF-3β、Ngn3、Nkx6.1及Insulin的m RNA和蛋白表达均较N组显着降低（P<0.05）;胎鼠胰腺DNMT1、DNMT3A、USP7甲基化转移酶蛋白表达均显着降低（P<0.05）;M组胎鼠胰腺PDX-1、Ngn3甲基化率较正常组均显着降低（P<0.05）,且其甲基化率与基因表达呈依赖性相关趋势。（2）补肾经方干预后,GDM孕鼠状态改善,胰腺及胎盘病理改变均有不同程度好转;与M组比较,MD与补肾经方组孕鼠血糖均显着降低,体重显着升高（P<0.05）,但与MD组比较,补肾经方组孕鼠血糖显着升高,体重显着降低（P<0.05）;与M组比较,MD组与ZG组胎盘IGF2、胎鼠胰腺PDX-1、HNF-3β、Ngn3、Nkx6.1及Insulin的m RNA及蛋白表达均显着升高（P<0.05）,LW组PDX-1、Ngn3、Nkx6.1的m RNA表达无差异,HNF-3β表达较M组升高（P<0.05）,Insulin的m RNA表达显着降低;YG组的Ngn3、Nkx6.1的m RNA表达显着升高（P<0.05）,Insulin的表达显着降低（P<0.05）,而PDX-1、HNF-3β的m RNA表达较M组无差异;SQ组的PDX-1、Ngn3、HNF-3β的m RNA表达较M组无差异,Nkx6.1的m RNA表达显着升高（P<0.05）,Insulin表达显着降低（P<0.05）;蛋白检测示,LW、SQ组各指标蛋白表达均较M组无差异,YG组HNF-3β、Ngn3蛋白表达较M组无差异,PDX-1、Nkx6.1蛋白表达显着升高（P<0.05）,Insulin的蛋白表达显着降低（P<0.05）;与M组比较,MD及补肾经方组DNMT1、DNMT3A、USP7甲基化转移酶蛋白表达均显着升高（P<0.05）,与MD组比较,ZG组DNMT1、DNMT3A、USP7表达显着升高（P<0.05）,其余组三者较MD组显着降低（P<0.05）或无差异;与M组比较,MD、ZG和LW组PDX-1、Ngn3甲基化率显着升高（P<0.05）,YG及SQ组显着降低（P<0.05）,与MD组比较,ZG组PDX-1甲基化率显着升高（P<0.05）,其余无差异。第二部分:（1）内胚层阶期:与N组比较,ZG、LW组SOX17免疫组化光密度值无差异,YG及SQ组显着降低（P<0.05）,ZG组FOXa2较N组显着增高（P<0.05）;与N组比较,ZG组SOX17蛋白表达显着升高（P<0.05）,其余组显着降低（P<0.05）;补肾经方组FOXa2较N组显着降低（P<0.05）,其余补肾经方组较ZG组显着降低（P<0.05）;与N组比较,SOX17、FOXa2 m RNA表达无差异,其余组显着降低（P<0.05）。（2）胰岛前体细胞期:与N组比较,ZG组PDX-1 m RNA表达及基因甲基化率均显着升高（P<0.05）,蛋白表达显着降低（P<0.05）,其余三组PDX-1 m RNA、基因甲基化率及蛋白表达均较ZG组显着降低（P<0.05）。（3）内分泌前体细胞期:与N组比较,ZG组Ngn3 m RNA、基因甲基化率及蛋白表达均无差异,其余组Ngn3 m RNA、基因甲基化率及蛋白表达均较ZG组显着降低（P<0.05）。（4）胰岛素分泌细胞期:与N组比较,ZG组Nkx6.1、Insulin的m RNA及蛋白表达均显着升高（P<0.05）,LW组Insulin m RNA表达显着升高（P<0.05）,其余均较ZG组显着降低;各组双硫腙染色均呈红棕色阳性表达;不同浓度葡萄糖刺激下,与N组比较,ZG组Insulin及C-肽分泌量无差异或显着升高,且随着葡萄糖浓度的升高,其分泌量有升高趋势;而其余组在不同浓度葡萄糖刺激下,均较N组显着降低（P<0.05）,且三组之间比较无差异。结论:（1）通过比较补肾经方对GDM胎鼠胰腺发育的影响作用发现,左归丸可以改善母代胰腺及胎盘的病理变化,并通过提升PDX-1、Ngn3的甲基化水平提升PDX-1通路上HNF-3β、PDX-1、Ngn3、Nkx6.1及Insulin的基因表达,整体促进GDM孕鼠胎鼠胰腺的发育,六味地黄丸、右归丸、肾气丸对胎鼠胰腺发育无明显促进作用。（2）通过比较补肾经方对小鼠胚胎干细胞定向诱导的作用发现,左归丸可以通过提升PDX-1、Ngn3的甲基化水平提升诱导各阶段标志物HNF-3β、PDX-1、Ngn3、Nkx6.1及Insulin的基因表达,促进小鼠胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞方向的诱导分化,六味地黄丸、右归丸及肾气丸对小鼠胚胎干细胞的诱导分化无促进作用。（3）左归丸对胎鼠胰腺发育及小鼠胚胎干细胞定向诱导分化的促进作用可能与其填补肾精的作用有关,反映出填补先天肾精对胚胎组织器官发育的重要性,从分子生物水平为中医“元精乃无形之水”、“精者,身之本也”等理论提供了科学依据。
周玉嘉[7]（2021）在《基于GPX4通路调控铁死亡探讨活血解毒法治疗脑出血火毒证机制研究》文中提出[目的]1通过临床研究,以急性脑出血（Intracerebral Hemorrhage,ICH）火毒证患者的治疗前后血肿体积、中医证候疗效评价、相关西医量表评定及患者血清氧化应激因子（SOD、MDA、CAT、GSH-Px）水平作为检测指标,选择活血解毒的醒脑静注射液进行治疗观察,以验证活血解毒法治疗急性脑出血火毒证患者的抗氧化和治疗作用。2通过实验研究具有活血解毒作用的醒脑静注射液对脑出血SD大鼠模型神经损伤的改善及对脑组织铁代谢的调节作用,对脑出血SD大鼠模型脑组织氧化应激指标及GPX4相关基因、蛋白表达的作用,进一步探索活血解毒的醒脑静注射液通过调控细胞铁死亡（ferroptosis）治疗脑出血的作用机制,为醒脑静注射液的临床应用提供实验支撑,同时也为“活血解毒法”及“毒损脑络”理论指导临床提供现代生物学依据。[方法]1临床研究:选取北京中医药大学东方医院诊断为ICH的非手术住院患者30例,符合西医脑出血和中医中风病火毒证诊断。入组患者给予基础治疗+活血解毒法（醒脑静注射液20ml加入250ml生理盐水中静滴,每日1次）连续治疗2周。比较患者治疗前后一般资料、神经功能评分（巴氏指数、NIHSS评分）、颅内血肿体积、血清氧化应激指标（SOD、MDA、GSH-Px）、中医证候积分。2实验研究:以自体血脑组织注射法建立急性脑出血大鼠模型,随机数字表法分成模型组、假手术组、醒脑静组,10只/组;另取SD大鼠10只为正常组。按体表面积法换算给药剂量进行干预,醒脑静组分别为:6.4ml/kg/day,腹腔注射;模型组、假手术组、正常组给予等量生理盐水注射,连续干预5天。实验结束后,检测大鼠神经功能评分（Longa评分、Berderson评分、肢体对称评分、平衡木评分）;酶联免疫吸附法检测大鼠病灶脑组织Fe2+、SOD、MDA、GSH、GPX4含量;HE染色检测大鼠脑组织结构变化;透射电镜检测神经细胞内铁死亡超微结构变化;利用Real-time PCR方法检测大鼠病灶脑组织TFR、IRP-2、Fpn-1、system Xc-、GPX4、Nrf2、HO-1、NQO1 mRNA表达;利用Western blot方法检测大鼠病灶脑组织TFR、IRP-2、Fpn-1、system Xc-、Nrf2 蛋白表达。[结果]1临床研究:本研究收纳患者30例,其中男性19例,年龄58.42±8.93岁;女性11例,年龄59.91±11.18岁,两组间无统计学差异（P>0.05）。与治疗前比较,患者收缩压显着降低具有统计学差异（P<0.05）;体温、舒张压、呼吸频率、心跳、体重、体重指数无明显差异;患者巴氏指数、血清SOD、GPX水平显着升高,具有统计学差异（P<0.05）;而NIHSS评分、颅内血肿体积、血清MDA水平、中医证候积分显着降低,具有统计学差异（P<0.05）。2实验研究:①行为学检测:与模型组比较,中药组大鼠Longa评分、Berderson评分、肢体对称评分、平衡木评分显着降低,有统计学差异（P<0.05,P<0.01）。②ELISA检测:与模型组比较,中药组大鼠病灶脑组织Fe2+、MDA含量显着降低,有统计学差异（P<0.05,P<0.01）;而SOD、GSH、GPX4含量显着升高,有统计学差异（P<0.01）。③大鼠脑组织HE染色结果显示活血解毒组较模型组脑组织病理改变明显缓解;透射电镜示中药组大鼠脑组织线粒体较模型组损伤减轻,形态正常、结构完整。④Real-time PCR检测:与模型组比较,中药组大鼠病灶脑组织TFR、IRP-2 mRNA表达显着降低,Fpn-1、system Xc-、GPX4、Nrf2、HO-1、NQO1 mRNA表达显着升高,有统计学差异（P<0.01）。⑤Western blot检测结果:与模型组比较,中药组大鼠病灶脑组织TFR、IRP-2蛋白表达显着降低,Fpn-1、system Xc-、Nrf2蛋白表达显着升高,有统计学差异（P<0.01）。[结论]1、活血解毒作用的醒脑静注射液能够显着改善ICH火毒证患者氧化应激状态,促进患者神经功能恢复。2、活血解毒作用的醒脑静注射液能够改善ICH大鼠神经功能损伤,调节ICH后脑组织Fe2+代谢紊乱,其机制与醒脑静注射液调控铁代谢过程脑组织TFR、RP-2、Fpn-1基因和蛋白表达相关。3、活血解毒作用的醒脑静注射液能够改善ICH大鼠脑组织脂质过氧化,抑制铁死亡发生,可能与上调system Xc-、GPX4以及Nrf2及其启动的抗氧化分子（HO-1、NQO1）表达相关。
朱博冉[8]（2021）在《基于“心与小肠相表里”理论泽泻饮通过调节肠道微生态抗动脉粥样硬化的研究》文中指出“心与小肠相表里”理论在中医学中具有重要地位,它反映了心与小肠之间在生理病理功能上的关联与沟通。心血管类疾病基本是当代人所面临的的最大死亡威胁之一,围绕其展开更深入的研究已成当代医学发展的重要任务。心血管类疾病很多,动脉粥样硬化（AS）是最为常见的一类,具有患病人群普遍性高并且可以作为其它心血管疾病基础的特点。随着微生物组学研究的深入与发展和国人饮食习惯的变迁,肠道菌群的组成及其分解食物所产生的代谢小分子,越来越被学界所重视。其中氧化三甲胺（TMAO）作为一种高脂高油饮食的菌群代谢产物,时刻影响着人类的血管环境健康。因此,如何针对饮食所带来的肠道微生物组变化以及其产生的代谢产物对心血管健康的影响,已经成为了当前“心与小肠相表里”相关理论的焦点。目的:就中医中的重点理论“心与小肠相表里”与治疗AS的生物学基础展开系统讨论。通过具有化痰作用的《黄帝内经》泽泻饮进行AS干预的同时,利用现代生物学技术手段对形成AS的“痰浊”进行解码。最终验证肠道中的微生物组及其代谢产物与AS所具有的病理特征关联是否可以被泽泻饮所干预治疗。方法:首先对“心与小肠相表里”进行理论研究,归纳心与肠之间关系和现代生物学基础的研究方向。其次对最新的AS风险因子,即肠道菌群代谢物TMAO如何产生并经由“肠”最终影响到“心”进行文献梳理与理论总结。最后,从以下三个方面进行实验研究包括:（1）采用高效液相色谱法（HPLC）对泽泻饮水煎液进行质量控制,同时确定泽泻饮对于AS的实际治疗效果。在明确了泽泻饮水煎液的实际成分后,将ApoE-/-小鼠划分为正常饮食组、高脂饮食组、高剂量泽泻饮治疗组（6.5g/kg）、低剂量泽泻饮治疗组（3.25g/kg）、抗生素干预组（350mg/kg）、泽泻饮-抗生素联合干预组（6.5g/kg+350mg/kg）、阿托伐他汀治疗组（1.3mg/kg）。连续用药8周后观察小鼠的体重、体脂比、血脂四项、斑块病理切片的大小以及斑块管腔比等相关各组病理指标改变。（2）明确泽泻饮对AS的风险因素TMAO及炎症因子的调控机制。在上述分组的前提下,利用蛋白质印记法明确三甲胺（TMA）转变为TMAO的关键酶FMO3的活性。同时基于UHPLC-ESI-MS/MS平台对血清中的TMA与TMAO定量分析,并以Luminex高通量液相悬浮芯片技术对血清中的六种关键炎症因子进行定量分析。（3）明确泽泻饮如何调整肠道微生态以及被改变的关键核心菌群与AS的风险因子的关联。通过对小鼠肠道中菌群的16S rRNA基因V3-V4高变部分进行提取与PCR扩增后,以Illumina Miseq平台为基础进行测序并对最终的测序结果进行生物信息学分析。结果:理论研究方面:通过文献整理我们对“心与小肠相表里”的历史溯源、经络联系、生理病理联系、与理论的临床应用五个方面做了一定的总结与回顾。同时对“心与小肠相表里”理论的现代研究和泽泻饮治疗AS的关系进行了梳理和分析。其次我们从TMAO的产生和代谢、TMAO与AS的关联、TMAO促进AS形成的机制以及利用TMAO改善AS的治疗方法四个方面,对最新AS风险因子,即肠道菌群的代谢产物TMAO如何经由“肠”最终影响到“心”进行了归纳。实验研究方面:首先通过HPLC确定了泽泻饮水煎剂的实际溶出成分泽泻醇A和23-乙酰泽泻醇B的含量,并为后续实验的使用的水煎液物质成分明确了质控标准。在动物实验中,泽泻饮不论高低剂量对于AS的各项基础病理指标都有比较好的治疗作用。在循环炎症因子方面,利用Luminex高通量液相悬浮芯片技术可以确定泽泻饮有效降低了影响AS的6种关键炎症因子中的5种。其次基于UHPLC-ESI-MS/MS技术对血清中的菌群代谢物TMAO与TMA的定量分析后,可以明确泽泻饮对TMAO的有效降低作用,但对于各组TMA的改变意义不大。通过对肝脏中的关键酶FMO3的蛋白质印记法分析后发现,泽泻饮可以降低催化TMA的关键酶FMO3的活性。同时,抗生素组除了对于体脂降低有效外在泽泻饮干预有效的各个指标上均没有显着意义。但是在联合了泽泻饮后的抗生素组对AS的指标改善做出了一定的改变。在肠道菌群组成方面,泽泻饮改善了高脂饮食后损伤的菌群结构并调整了丰富度。结合菌群的相对丰度与LDA评分可以明确泽泻饮在 Lactobacillus、Turicibacter、Eubacteriumcoprostanoligenesgro up、Bifidobacterium、Ileibacterium 以及 Faecalibaculum 六种菌属之间做出对AS的有益调整。其中相对丰度改变最高的是对Lactobacillus的降低与Bifido-bacterium的升高作用。在与之前的指标进行斯皮尔曼相关性分析后,上述这两种菌属的相关范围覆盖面也较其它菌属广泛。结论:“心与小肠相表里”理论在文献记载、传统理论和现代研究上具有较好的实际价值和参考意义。同时通过实验研究证明,结合AS形成的关键因素“痰饮”而选用的《黄帝内经》泽泻饮,在对于肠道中的菌群调整、菌群代谢物的干预以及最终血管损伤的保护起到了比较好的作用效果。其对肠道菌群及其代谢物可以影响心血管的环境方面,证实了心与小肠所存在的极大关联性。因此,我们的研究为中医“心与小肠相表里”的理论建立了一定的实验基础,也为日后的临床探索开拓了视野与思路。
何林熹[9]（2020）在《中医体质分类辨识及肾阳虚体质线粒体基因SNP研究》文中指出目的:1.研究通过系统梳理古今文献,厘清中医体质内涵和外延,深入考证中医体质分类与辨识体系,构建中医体质客观化辨识体系。为中医体质临床应用奠定理论基础。2.为探索体质客观化分类与辨识诊断的有效途径,以肾阳虚体质为切入点,采用线粒体基因组全测序方法,筛选肾阳虚体质线粒体基因SNP位点。通过位点功能注释,探索肾阳虚体质辨识的分子生物学基础,为肾阳虚体质分类及辨识筛选可能的生物标志物。方法:1.文献研究（1）文献检索:古代文献检索以“体质”、“禀质”、“素质”、“禀赋”、“气禀”、“禀质”、“素禀”为关键词在《中华医典》中对两汉至明清的古籍文献进行检索。此外以“体质内涵”、“体质辨识”、“体质诊断”、“体质分类”、“体质差异”、“Constitution of Traditional Chinese Medicine”、“Constitution of TCM”为关键词在CNKI、Pub Med上检索1979年1月至2018年12月期间公开发表的文献。（2）文献摘录:按照文献纳入排除标准对文献进行摘录和整理。（3）文献整理归纳与凝练:通过文献整理、归纳古今文献,凝练中医体质的学术思想,并以此为核心,深入考证中医体质分类与辨识方法,厘清体质内涵及外延。2.肾阳虚体质受试者线粒体基因SNP研究。（1）肾阳虚体质受试者纳入:根据课题组前期制定的肾阳虚体质评判标准初步筛选肾阳虚体质受试者,采用《中医体质分类判定标准》排除受试者中阳虚体质外的其余兼夹体质。经3名中医诊断学专业人员诊断确认后,签署知情同意书纳入实验研究。（2）线粒体基因组全测序:肾阳虚体质受试者血液样本采集后,抽取样本线粒体DNA,经质检、扩增后进行线粒体基因组全测序。（3）线粒体基因SNP位点筛选:将纳入受试者DNA序列与线粒体基因标准序列进行比较,筛选肾阳虚体质受试者的共同SNP位点。（4）线粒体基因SNP位点分子生物学功能注释。结果:1.文献研究（1）检索纳入古代文献条目3997条;检索到现代中文文献2603篇,英文文献150篇。根据纳入排除标准筛选后纳入中文文献365篇,英文文献16篇。（2）体质形成:体质的形成秉承于先天得养于后天,以先天为主后天为辅。（3）体质内涵:体质是在先天禀赋和后天环境共同作用下,“身心合一”观的指导下,在外貌体态、生理特征、精神情志方面所表现的人体特质。（4）体质分类:古代体质分类以“阴阳”“五行”为纲。其中《灵枢·通天》和《灵枢·阴阳二十五人》中分类最为详尽,涵盖面最广。现代体质分类主要包括病理体质分类法和更为多元化的综合分类法14种,并对特殊群体（如儿童、妇女）的体质进行了分类。（5）体质辨识:中医古代体质辨识内涵非常丰富,其中主要包括外貌体态、生理特点及心理特点。现代中医体质辨识研究聚焦于中医体质的客观化诊断,其中中医体质量表的运用最为广泛。此外,四诊信息的客观化及现代生物学指标的引入推动了体质客观化的发展。（6）体质分类辨识体系框架:形成以“身心合一”观为核心,外貌体态特征为基础,分子生物学及客观化舌、脉诊信息数据为参考,体质问卷量表数据为辅助的中医体质客观化分类辨识体系框架。2.肾阳虚体质受试者线粒体基因SNP研究（1）通过体质量表评定和专业人员评估共纳入肾阳虚体质受试者31例。（2）基因序列比对筛选了10个肾阳虚体质共同突变位点,这些位点分别位于以下6个基因片段上:MT-RNR1（m.73A>G,m.263A>G,m.750A>G,m.1438A>G）、MT-RNR2（m.3105ACN>AC）、MT-CO1（m.7028 C>T）、MT-ATP6（m.8860A>G）、MT-ND4（m.11719 G>A）、MT-CYB（m.14766 C>T,m.15326A>G）。位点中有2个位点m.73A>G及m.263A>G位于线粒体DNA上游非编码区,其余位点均位于外显子区域。（3）肾阳虚体质线粒体基因位点注释发现突变位点与衰老进程、能量代谢、生殖功能及精神情志异常相关。结论:1.体质是在先天禀赋和后天环境共同作用下,“身心合一”观指导下,外貌体态、生理功能和精神情志方面所表现的个体特质。“身心合一”思想贯穿整个体质分类、体质辨识的全过程,是体质理论的核心思想。2.以“身心合一”观为核心,外貌体态特征为基础,分子生物学及客观化舌、脉诊信息数据为参考,体质问卷量表数据为辅助的中医体质客观化分类辨识体系的构建为中医体质诊断客观化奠定了理论基础。3.线粒体基因SNP改变所导致的线粒体功能不良可能是肾阳虚体质形成的生物学基础,这是肾阳虚体质实质研究新的切入点。4.研究筛选出的6个基因及其上的10个位点可能是肾阳虚体质辨识的潜在生物标志物。5.体质的分子生物学基础研究,是探索体质分类辨识客观化的途径之一。
教育部[10]（2020）在《教育部关于印发普通高中课程方案和语文等学科课程标准（2017年版2020年修订）的通知》文中进行了进一步梳理教材[2020]3号各省、自治区、直辖市教育厅（教委）,新疆生产建设兵团教育局:为深入贯彻党的十九届四中全会精神和全国教育大会精神,落实立德树人根本任务,完善中小学课程体系,我部组织对普通高中课程方案和语文等学科课程标准（2017年版）进行了修订。普通高中课程方案以及思想政治、语文、
二、Priority of TCM in Regulating Gene Function as a Whole Through Development of Modern Biology（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、Priority of TCM in Regulating Gene Function as a Whole Through Development of Modern Biology（论文提纲范文）
（1）运用生物信息分析技术探讨柴胡疏肝散方证关联的现代生物学内涵（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 文献综述 |
| 综述一 方证相关的研究概况 |
| 1 方证相关的文献研究 |
| 1.1 对特定方剂临床应用规律的探查 |
| 1.2 对类方的探查 |
| 1.3 基于病证结合角度对方证关联的探查 |
| 2 方证相关的临床探查 |
| 2.1 一证多方 |
| 2.2 一方多证 |
| 3 方证相关的实验研究 |
| 3.1 以方探证 |
| 3.2 方证对应 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 综述二 网络药理学方法在中医药研究中的运用 |
| 1 网络药理学的概念 |
| 2 网络药理学在中医药研究中的运用 |
| 2.1 方药药效物质基础和作用机制的研究 |
| 2.1.1 单味药的研究 |
| 2.1.2 药对的研究 |
| 2.1.3 复方的研究 |
| 2.2 中药药性理论的研究 |
| 2.3 中药毒性作用机制的研究 |
| 2.4 中医证实质的研究 |
| 2.5 方证相关的研究 |
| 3 小结 |
| 参考文献 |
| 综述三 柴胡疏肝散的临床运用与药理研究 |
| 1 柴胡疏肝散的临床应用 |
| 1.1 内科疾病 |
| 1.1.1 消化系统疾病 |
| 1.1.2 呼吸系统疾病 |
| 1.1.3 循环系统疾病 |
| 1.1.4 内分泌系统疾病 |
| 1.1.5 神经系统疾病 |
| 1.1.6 泌尿系统疾病 |
| 1.1.7 运动系统疾病 |
| 1.2 妇科疾病 |
| 1.3 儿科疾病 |
| 1.4 心理疾病 |
| 1.5 皮肤科疾病 |
| 2 柴胡疏肝散的药理研究 |
| 2.1 神经系统保护作用 |
| 2.1.1 对神经递质及受体的影响 |
| 2.1.2 对神经营养因子的影响 |
| 2.1.3 对基因及相关蛋白的影响 |
| 2.2 下丘脑-垂体-肾上腺/甲状腺/性腺轴调节作用 |
| 2.2.1 对下丘脑-垂体-肾上腺轴的影响 |
| 2.2.2 对下丘脑-垂体-甲状腺轴的影响 |
| 2.2.3 对下丘脑-垂体-性腺轴的影响 |
| 2.3 胃肠调节作用 |
| 2.4 糖脂代谢调节作用 |
| 2.5 免疫调节作用 |
| 2.6 抗氧化作用 |
| 2.7 抗纤维化作用 |
| 2.8 抗抑郁作用 |
| 2.9 抗肿瘤作用 |
| 3 小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 研究背景 |
| 立论依据 |
| 研究目标 |
| 参考文献 |
| 研究一 柴胡疏肝散现代临床主治疾病的调查 |
| 1 资料来源 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 纳入与排除标准 |
| 2.2 信息提取与规范 |
| 2.3 统计分析 |
| 3 研究结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 研究二 柴胡疏肝散方-病证关联的现代生物学内涵探查 |
| 1 数据库及软件 |
| 1.1 疾病基因数据库 |
| 1.2 网络药理学相关数据库及软件 |
| 1.3 GO和KEGG富集分析工具 |
| 1.4 数据可视化工具 |
| 1.5 分子对接工具 |
| 1.6 其他数据库及软件 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 柴胡疏肝散主治的5个主要病种的生物学网络 |
| 2.1.1 5个主要病种的基因靶点获取 |
| 2.1.2 5个主要病种共有靶点及其生物学网络构建 |
| 2.1.3 5个主要病种共有靶点的生物学网络拓扑分析 |
| 2.1.4 5个主要病种的Hub基因的生物学富集分析 |
| (1) GO功能富集分析 |
| (2) KEGG通路富集分析 |
| (3) GO功能和KEGG通路富集分析结果可视化 |
| 2.2 柴胡疏肝散的复方网络药理学研究 |
| 2.2.1 柴胡疏肝散活性成分筛选 |
| 2.2.2 柴胡疏肝散活性成分作用靶点的获取 |
| 2.2.3 柴胡疏肝散作用靶点的PPI网络构建 |
| 2.2.4 柴胡疏肝散作用靶点的PPI网络拓扑分析 |
| 2.2.5 柴胡疏肝散作用的Hub基因的生物学富集分析 |
| 2.3 柴胡疏肝散方-病证关联的生物学基础 |
| 2.3.1 柴胡疏肝散方-病证关联的共同靶点筛选 |
| 2.3.2 柴胡疏肝散方-病证关联靶点的生物学富集分析 |
| 2.4 柴胡疏肝散方-病证关联的复方物质基础探查 |
| 2.4.1 柴胡疏肝散方-病证关联的成分—靶点网络的构建 |
| 2.4.2 柴胡疏肝散方-病证关联的成分—靶点网络的拓扑分析 |
| 2.5 基于方证关联的分子对接验证 |
| 3 结果 |
| 3.1 柴胡疏肝散主治的5个主要病种的生物学网络 |
| 3.1.1 5个主要病种各自的基因靶点 |
| 3.1.2 5个主要病种共同的基因靶点 |
| 3.1.3 共同基因靶点PPI网络及其拓扑分析信息 |
| 3.2 柴胡疏肝散网络药理学研究 |
| 3.2.1 柴胡疏肝散的活性成分 |
| 3.2.2 柴胡疏肝散活性成分的作用靶点 |
| 3.2.3 柴胡疏肝散作用靶点PPI网络及其拓扑分析信息 |
| 3.3 柴胡疏肝散与其所主5个主要病种的生物关联性 |
| 3.3.1 柴胡疏肝散与5个主要病种的共同靶点 |
| 3.3.2 柴胡疏肝散与5个主要病种的共同靶点的PPI网络 |
| 3.3.3 共同靶点的PPI网络中的Hub基因及其生物信息 |
| 3.3.4 柴胡疏肝散与5个主要病种的共同靶点及其生物学富集 |
| 3.4 柴胡疏肝散—肝郁证关联的效应物质基础 |
| 3.4.1 柴胡疏肝散成分—肝郁证关联的靶点网络及其生物学信息 |
| 3.5 基于方证关联的方剂关键成分与其核心靶点的分子对接 |
| 4 讨论 |
| 4.1 基于异病同证的肝郁证生物学内涵及其解读 |
| 4.1.1 肝郁证与炎症、免疫、细胞凋亡及肿瘤 |
| 4.1.2 肝郁证与神经—内分泌系统 |
| 4.2 柴胡疏肝散作用的生物学网络及其特点 |
| 4.2.1 对神经-内分泌-免疫网络的作用 |
| 4.2.2 其他作用 |
| 4.3 柴胡疏肝散方-证关联的分子生物学基础 |
| 4.3.1 方-证关联的病理生理学机制及其分子基础 |
| 4.3.2 方药网络药理与病证生物学内涵的比较 |
| 4.4 柴胡疏肝散方-证关联的效应物质基础 |
| 4.4.1 柴胡疏肝散方-证关联的关键活性成分 |
| 4.4.2 柴胡疏肝散方-证关联的关键靶点 |
| 4.4.3 柴胡疏肝散方-证关联的成分-靶点分子对接验证 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 1 立论背景与研究思路 |
| 2 研究结果及结论 |
| 3 本研究的创新与不足 |
| 3.1 创新点 |
| 3.2 局限性 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（2）喘康贴对哮喘大鼠免疫调节的分子机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 喘康贴治疗哮喘的网络药理学研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分 喘康贴治疗哮喘的分子生物学研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结论 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 基于网络药理学的中药复方治疗小儿支气管哮喘作用机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（3）基于内质网应激通路研究五子衍宗丸对EAE的防治作用及分子机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一章 五子衍宗丸对EAE小鼠的疗效观察 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 实验仪器 |
| 1.4 实验试剂和耗材 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 实验分组及药液制备 |
| 2.2 建立EAE小鼠模型及给药 |
| 2.3 待测样品采集与制备 |
| 2.4 指标检测 |
| 2.5 试剂配制 |
| 2.6 数据处理 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 WYP对 EAE小鼠神经功能评分的影响 |
| 3.2 WYP对 EAE小鼠脊髓组织炎性细胞浸润的影响 |
| 3.3 WYP对 EAE小鼠脊髓组织髓鞘脱失的影响 |
| 4.结论 |
| 第二章 五子衍宗丸对EAE小鼠内质网应激的影响 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 实验仪器 |
| 1.4 实验试剂 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 实验分组及药液制备 |
| 2.2 造模及给药 |
| 2.3 样品采集与制备 |
| 2.4 指标检测 |
| 2.5 实验试剂配制 |
| 2.6 数据处理方法 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 WYP对 EAE小鼠ERS信号传导通路伴侣分子的影响 |
| 3.2 WYP对 EAE小鼠ERS介导的UPR信号传导通路的影响 |
| 3.3 WYP对 EAE小鼠ERS介导的促凋亡途径的影响 |
| 4.结论 |
| 讨论 |
| 1.WYP对 EAE小鼠具有良好的治疗效果 |
| 2.ER的生理特性及ERS反应的效应 |
| 3.WYP对 EAE小鼠ERS分子伴侣的影响 |
| 4.WYP对 EAE小鼠ERS介导的UPR信号传导通路的影响 |
| 5.WYP对 EAE小鼠ERS触发的促凋亡途径的影响 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 补肾方药防治中枢神经系统炎性变性疾病的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（4）急性冠脉综合征气虚血瘀证和气滞血瘀证患者临床特征及炎症因子差异性研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩写说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 炎症因子在急性冠脉综合征中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 冠心病气虚血瘀证和气滞血瘀证的生物学基础研究现状 |
| 参考文献 |
| 第二部分 临床研究 |
| 前言 |
| 资料和方法 |
| 1. 病例来源 |
| 2. 诊断标准 |
| 3. 纳入标准 |
| 4. 排除标准 |
| 5. 血液样本采集及检测 |
| 6. 观察指标 |
| 7.数据统计及分析 |
| 结果 |
| 1 气虚血瘀证与气滞血瘀证ACS患者的临床特点比较 |
| 1.1 气虚血瘀证与气滞血瘀证的一般临床资料比较 |
| 1.2 气虚血瘀证与气滞血瘀证的生化指标比较 |
| 1.3 气虚血瘀证与气滞血瘀证的血瘀征候及血瘀严重程度比较 |
| 1.4 气虚血瘀证与气滞血瘀证的冠脉血管病变数量及严重程度比较 |
| 2 经典炎症因子与ACS气虚血瘀证和气滞血瘀证的相关性研究 |
| 2.1 一般临床资料 |
| 2.2 气虚血瘀证与气滞血瘀证ACS患者的经典炎症因子比较 |
| 2.3 气虚血瘀证和气滞血瘀证患者心功能与经典炎症因子的相关性 |
| 2.4 气虚血瘀证和气滞血瘀证患者冠脉Gensini评分与经典炎症因子的相关性 |
| 3 新型炎症因子与ACS气虚血瘀证和气滞血瘀证的相关性研究 |
| 3.1 一般临床资料 |
| 3.2 气虚血瘀证与气滞血瘀证中的新型炎症因子比较 |
| 3.3 气虚血瘀证和气滞血瘀证患者的心功能与新型炎症因子的相关性 |
| 3.4 气虚血瘀证和气滞血瘀证患者冠脉Gensini评分与新型炎症因子的相关性 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 研究的局限性 |
| 参考文献 |
| 附表 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（5）从AMPK-HIF1-PKM2信号通路探讨代谢综合征痰证大鼠的生物学基础（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分 文献研究 |
| 1 资料与方法 |
| 1.1 文献来源 |
| 1.2 纳入标准 |
| 1.3 排除标准 |
| 1.4 结局指标 |
| 1.5 研究方法 |
| 1.6 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 检索结果及基本特征分析 |
| 2.2 文献质量评价 |
| 2.3 核心药物分析 |
| 2.4 临床疗效分析 |
| 2.5 不良反应 |
| 3 讨论 |
| 第二部分 实验研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 饲料配方 |
| 1.3 实验药物 |
| 1.4 主要实验试剂 |
| 1.5 主要实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 药物配制 |
| 2.2 实验动物模型制备及分组 |
| 2.3 干预方法 |
| 2.4 标本采集 |
| 2.5 指标检测 |
| 2.6 统计学处理 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 造模前两组大鼠比较结果 |
| 3.2 造模期两组大鼠变化情况 |
| 3.3 药物干预后各组大鼠变化情况 |
| 4 讨论 |
| 4.1 代谢综合征痰证大鼠模型建立与评价 |
| 4.2 代谢综合征痰证能量代谢的变化 |
| 4.3 代谢综合征痰证能量失衡的病理机制 |
| 结论 |
| 研究创新性成果 |
| 研究不足与工作展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 文献综述 代谢综合征中医药研究现状 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（6）基于PDX-1通路研究补肾经方对GDM模型孕鼠胎鼠胰腺发育及胰岛素分泌细胞形成的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 基于PDX-1 通路探究补肾经方对GDM模型孕鼠胎鼠胰腺发育的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 动物 |
| 1.2 药物 |
| 1.3 试剂 |
| 1.4 仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 主要试剂和溶液的配制 |
| 2.1.1 柠檬酸缓冲液(p H4.4)的配制 |
| 2.1.2 链脲佐菌素注射液的配制 |
| 2.2 GDM孕鼠模型的制备 |
| 2.3 孕鼠分组及给药 |
| 2.4 样本采集及指标检测 |
| 2.4.1 孕鼠一般状态观察 |
| 2.4.2 孕鼠血清胰岛素的检测 |
| 2.4.3 孕鼠胰腺组织病理结构观察 |
| 2.4.4 孕鼠胎盘组织病理结构观察 |
| 2.4.5 胎鼠胰腺组织PDX-1 通路相关因子的m RNA表达 |
| 2.4.6 胎鼠胰腺组织PDX-1 通路相关因子的蛋白表达 |
| 2.4.7 胎鼠胰腺组织甲基化转移酶的表达 |
| 2.4.8 胎鼠胰腺组织PDX-1 通路因子的甲基化表达 |
| 2.4.8.1 MSP法检测胎鼠胰腺组织PDX-1、Ngn3的甲基化情况 |
| 2.4.8.2 BSP法检测胎鼠胰腺组织PDX-1、Ngn3 的甲基化率 |
| 2.5 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 孕鼠一般状态观察 |
| 3.1.1 孕鼠一般状况观察 |
| 3.1.2 对孕鼠随机血糖的影响 |
| 3.1.3 对孕鼠体重的影响 |
| 3.1.4 对孕鼠胎盘重量的影响 |
| 3.1.5 对孕鼠平均摄食量的影响 |
| 3.2 对孕鼠胰腺病理结构的影响 |
| 3.3 对孕鼠胎盘病理结构及IGF2 表达的影响 |
| 3.3.1 对孕鼠胎盘组织病理结构的影响 |
| 3.3.2 对孕鼠胎盘组织IGF2 蛋白表达的影响 |
| 3.4 对胎鼠胰腺PDX-1 通路因子表达的影响 |
| 3.4.1 对胎鼠胰腺PDX-1、Ngn3 mRNA表达的影响 |
| 3.4.2 对胎鼠胰腺PDX-1、Ngn3 蛋白表达的影响 |
| 3.4.3 对胎鼠胰腺HNF-3β、Nkx6.1、Insulin mRNA表达的影响 |
| 3.4.4 对胎鼠胰腺HNF-3β、Nkx6.1、Insulin蛋白表达的影响 |
| 3.5 对胎鼠胰腺甲基化转移酶表达的影响 |
| 3.5.1 对胎鼠胰腺DNMT1 表达的影响 |
| 3.5.2 补肾经方对胎鼠胰腺DNMT3a表达的影响 |
| 3.5.3 补肾经方对胎鼠胰腺USP7 表达的影响 |
| 3.6 对胎鼠胰腺PDX-1 通路因子甲基化的影响 |
| 3.6.1 MSP定性检测胎鼠胰腺PDX-1、Ngn3 甲基化的影响 |
| 3.6.2 BSP法定量检测胎鼠胰腺PDX-1、Ngn3 甲基化率的表达 |
| 3.7 PDX-1、Ngn3 甲基化率与m RNA表达线性关系分析 |
| 4 讨论 |
| 4.1 对孕鼠整体状态的影响 |
| 4.1.1 对孕鼠一般状态的影响 |
| 4.1.2 对孕鼠随机血糖的影响 |
| 4.1.3 对孕鼠胰腺病理结构的影响 |
| 4.1.4 对孕鼠胎盘病理结构及IGF2 表达的影响 |
| 4.2 对胎鼠胰腺PDX-1 通路相关指标甲基化的影响 |
| 4.2.1 对胎鼠胰腺PDX-1、Ngn3 甲基化的影响 |
| 4.2.2 对胎鼠胰腺甲基化转移酶表达的影响 |
| 4.3 对胎鼠胰腺PDX-1 通路相关指标表达的影响 |
| 4.3.1 对胎鼠胰腺HNF-3β表达的影响 |
| 4.3.2 对胎鼠胰腺PDX-1 表达的影响 |
| 4.3.3 补肾经方对胎鼠胰腺Ngn3 表达的影响 |
| 4.3.4 对胎鼠胰腺Nkx6.1 表达的影响 |
| 4.3.5 补肾经方对胎鼠胰腺Insulin表达的影响 |
| 5 小结 |
| 第二部分 补肾经方含药血清干预对小鼠胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞诱导分化的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 细胞系 |
| 1.2 动物 |
| 1.3 试剂 |
| 1.4 仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 含药血清的制备 |
| 2.2 MEF细胞的培养 |
| 2.2.1 MEF细胞的复苏 |
| 2.2.2 MEF细胞的传代 |
| 2.2.3 MEF细胞的冻存 |
| 2.3 ES-E14 细胞饲养层的制备 |
| 2.4 ES-E14 细胞的培养 |
| 2.4.1 ES-E14 细胞的复苏 |
| 2.4.2 ES-E14 细胞的传代 |
| 2.4.3 ES-E14 细胞的冻存 |
| 2.5 含药血清浓度的确定 |
| 2.6 ES-E14 细胞向胰岛素分泌细胞的诱导分化 |
| 2.6.1 诱导培养基的配制 |
| 2.6.2 小鼠胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞方向的诱导过程 |
| 3 指标检测 |
| 3.1 细胞形态学观察 |
| 3.1.1 观察各阶段细胞的形态学变化 |
| 3.1.2 DTZ染色鉴定胰岛素分泌细胞的成熟 |
| 3.2 MTT法检测细胞增值率 |
| 3.3 内胚层期SOX17、Foxa2 的蛋白表达 |
| 3.4 细胞诱导分化各阶段标志物的mRNA表达 |
| 3.5 细胞诱导分化各阶段标志物蛋白的表达 |
| 3.6 不同浓度葡萄糖刺激下Insulin及 C-肽的表达 |
| 3.7 PDX-1、Ngn3 的甲基化情况检测 |
| 3.8 统计学分析 |
| 4 结果 |
| 4.1 细胞形态学观察 |
| 4.1.1 细胞一般生存状态观察 |
| 4.1.2 细胞诱导分化各阶段形态学变化 |
| 4.2 补肾经方含药血清浓度的确定 |
| 4.2.1 ES-E14 细胞在不同浓度含药血清干预24h的增殖情况 |
| 4.3 对细胞诱导分化不同阶段标志物表达的影响 |
| 4.3.1 对内胚层期SOX17、Foxa2 蛋白表达的影响 |
| 4.3.2 对胰腺前体细胞期PDX-1 表达的影响 |
| 4.3.3 对胰腺内分泌前体细胞期标志物Ngn3 表达的影响 |
| 4.3.4 对胰岛素分泌细胞期Nkx6.1及Insulin表达的影响 |
| 4.4 对PDX-1、Ngn3 甲基化率的影响 |
| 4.4.1 胰岛前体细胞期PDX-1 甲基化率的结果 |
| 4.4.2 胰岛分泌前体细胞期Ngn3 甲基化率的结果 |
| 4.5 甲基化率与其mRNA表达的线性关系分析 |
| 4.6 对胰成熟胰岛素分泌细胞Insulin、C-肽分泌量的影响 |
| 4.6.1 不同浓度葡萄糖刺激后Insulin分泌量 |
| 4.6.2 不同浓度葡萄糖刺激后C-肽分泌量 |
| 5 讨论 |
| 5.1 对细胞诱导分化形态的影响 |
| 5.2 对诱导分化各阶段标志物表达的影响 |
| 5.2.1 对内胚层期标志物SOX17、FOXa2 表达的影响 |
| 5.2.2 对胰岛素前体细胞阶段PDX-1 表达的影响 |
| 5.2.3 对胰腺内分泌细胞前期Ngn3 表达的影响 |
| 5.2.4 对胰岛素分泌细胞期Nkx6.1 表达的影响 |
| 5.3 对胰岛素分泌细胞分泌功能的影响 |
| 6 小结 |
| 结语 |
| 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 综述 娠糖尿病发病机制及治疗方法的研究进展 |
| 参考文献 |
| 在校期间公开发表的学术论文 |
| 致谢 |
（7）基于GPX4通路调控铁死亡探讨活血解毒法治疗脑出血火毒证机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一、中风病火毒证的研究概况 |
| 一、中风病的病因病机 |
| 二、“毒损脑络”学说的形成和发展 |
| 三、“火毒证”的特性 |
| 四、“毒损脑络”的生物学基础 |
| 五、中风病“火毒证”的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 急性脑出血铁死亡的研究进展 |
| 一、铁死亡是急性脑出血后脑损伤的主要形式之一 |
| 二、ICH后铁死亡的潜在机制 |
| 三、ICH后铁死亡的潜在干预措施 |
| 四、醒脑静注射液的现代机制研究探索 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第一章 醒脑静注射液对ICH非手术患者的抗氧化和治疗作用的临床研究 |
| 第一节 概述 |
| 第二节 资料与方法 |
| 第三节 研究结果 |
| 第四节 小结与讨论 |
| 参考文献 |
| 第二章 活血解毒法对ICH大鼠神经损伤及脑组织铁代谢的影响 |
| 第一节 概述 |
| 第二节 实验材料 |
| 第三节 实验方法 |
| 第四节 研究结果 |
| 第五节 小结与讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 活血解毒法对ICH大鼠脑组织神经细胞脂质过氧化的作用及机制实验研究 |
| 第一节 概述 |
| 第二节 实验材料 |
| 第三节 实验方法 |
| 第四节 研究结果 |
| 第五节 小结与讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 不足点 |
| 项目资助 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
（8）基于“心与小肠相表里”理论泽泻饮通过调节肠道微生态抗动脉粥样硬化的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 第一章 “心与小肠相表里”的理论研究 |
| 1. “心与小肠相表里”的理论源流 |
| 1.1 “心与小肠相表里”的汉语溯源 |
| 1.2 “心与小肠相表里”的经络联系 |
| 1.3 “心与小肠相表里”的生理作用关联性 |
| 1.4 “心与小肠相表里”的病理特点关联性 |
| 1.5 “心与小肠相表里”理论的临床应用 |
| 2. “心与小肠相表里”的现代研究 |
| 2.1 “肠心轴”学说 |
| 2.2 “肠脑轴”学说 |
| 3. “心与小肠相表里”与泽泻饮治疗AS的关系 |
| 4. 小结 |
| 第二章 肠道菌群代谢物TMAO对AS影响的研究进展 |
| 1. TMAO的产生和代谢 |
| 1.1 产生TMAO的饮食中的主要营养前体 |
| 1.2 产生TMAO的主要微生物群 |
| 2. TMAO与AS的关联性研究 |
| 3. TMAO促进AS形成的机制 |
| 3.1 TMAO与宏观层面的环境改变 |
| 3.2 TMAO与微观层面的血管环境改变 |
| 4. 调控TMAO改善AS的主要方法 |
| 4.1 利用肠道菌群减少TMAO |
| 4.2 针对TMA转变为TMAO过程的治疗方式 |
| 4.3 中草药及其衍生产品的治疗作用 |
| 5. 小结 |
| 第二部分 实验研究 |
| 第一章 泽泻饮对AS模型的药效学研究 |
| 第一节 泽泻饮水煎剂主要有效成分的质量控制 |
| 1. 主要材料与仪器 |
| 2. 方法与结果 |
| 3. 讨论 |
| 第二节 AS模型的建立与泽泻饮的干预效果 |
| 1. 主要材料与仪器 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 第二章 泽泻饮对TMAO及炎症因子的调控机制研究 |
| 1. 主要材料与仪器 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 第三章 泽泻饮对调整AS模型肠道微生态以及的风险因子的研究 |
| 1. 主要材料与仪器 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 全文总结 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 英文缩略词表 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（9）中医体质分类辨识及肾阳虚体质线粒体基因SNP研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 主要专业词汇缩略词表 |
| 引言 |
| 第一部分 中医体质分类辨识研究 |
| 1.研究方法 |
| 1.1 古代文献来源 |
| 1.2 检索方法 |
| 1.3 资料摘录 |
| 2.研究结果 |
| 2.1 体质形成的影响因素 |
| 2.1.1 体质秉承于先天——先天为主 |
| 2.1.2 体质得养于后天——后天为辅 |
| 2.2 中医体质内涵 |
| 2.2.1 体质古代内涵 |
| 2.2.2 体质现代内涵 |
| 2.3 中医体质分类 |
| 2.3.1 中医体质分类古代研究 |
| 2.3.2 中医体质分类现代研究 |
| 2.4 中医体质辨识 |
| 2.4.1 中医体质辨识古代研究 |
| 2.4.2 中医体质辨识现代研究 |
| 2.5 中医体质分类辨证体系框架 |
| 3.讨论 |
| 3.1 “身心合一”是中医体质的核心思想 |
| 3.2 基于体质分类辨识体系的智能化辨识设想 |
| 3.2.1 以外貌体态为基础——借鉴生物识别技术 |
| 3.2.2 以舌、脉诊信息为参考——加快仪器研发 |
| 3.2.3 以生物学指标为参考——筛选体质生物标志物 |
| 3.2.4 以体质问卷为辅助——完善体质量表 |
| 第二部分 肾阳虚体质线粒体基因SNP研究 |
| 1.研究方法 |
| 1.1 受试者纳入 |
| 1.1.1 肾阳虚体质判定 |
| 1.1.2 纳入标准 |
| 1.1.3 排除标准 |
| 1.1.4 伦理审查 |
| 1.2 样本采集 |
| 1.3 实验试剂和设备 |
| 1.3.1 实验主要试剂 |
| 1.3.2 实验主要器材 |
| 1.4 样本线粒体DNA抽提与质检 |
| 1.4.1 线粒体DNA的抽提与纯化 |
| 1.4.2 样本质检 |
| 1.5 线粒体DNA全测序 |
| 1.5.1 测序文库构建 |
| 1.5.2 文库质检 |
| 1.5.3 Cluster生成 |
| 1.5.4 上机测序 |
| 1.6 数据分析 |
| 1.6.1 数据库信息及数据分析程序 |
| 1.6.2 数据分析方法 |
| 2 研究结果 |
| 2.1 肾阳虚体质受试者体质评分 |
| 2.2 肾阳虚体质受试者样本质检 |
| 2.3 数据分析结果 |
| 2.3.1 原始数据质量评估结果 |
| 2.3.2 测序序列质量评估结果 |
| 2.3.3 Indel检测统计结果 |
| 2.3.4 SNP检测统计结果 |
| 2.3.5 突变位点注释 |
| 3 讨论 |
| 3.1 线粒体功能不良是肾阳虚体质生物学基础研究新的切入点 |
| 3.2 线粒体基因组遗传特性 |
| 3.2.1 线粒体具有独立的遗传系统且基因突变率高 |
| 3.2.2 线粒体基因非编码调控区在复制和转录中起着重要作用 |
| 3.2.3 线粒体遵循较为严格的母系遗传规律 |
| 3.3 线粒体基因突变是对肾阳虚体质临床表现产生机制的有效阐释 |
| 3.3.1 能量代谢紊乱 |
| 3.3.2 生长发育异常 |
| 3.3.3 生殖功能减退 |
| 3.3.4 异常情绪状态 |
| 3.3.5 肾阳虚体质与遗传疾病 |
| 3.4 线粒体基因SNP位点与肾阳虚体质辨识 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 问题与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附件一:综述 肾阳虚证候及体质分子生物学基础研究进展 |
| 参考文献 |
| 附件二:肾阳虚体质判定标准表 |
| 附件三:伦理审查批件 |
| 附件四:在读期间公开发表的学术论文、专着及科研成果 |
四、Priority of TCM in Regulating Gene Function as a Whole Through Development of Modern Biology（论文参考文献）
- [1]运用生物信息分析技术探讨柴胡疏肝散方证关联的现代生物学内涵[D]. 李文飞. 北京中医药大学, 2021
- [2]喘康贴对哮喘大鼠免疫调节的分子机制研究[D]. 梁学玲. 山西中医药大学, 2021(09)
- [3]基于内质网应激通路研究五子衍宗丸对EAE的防治作用及分子机制[D]. 肖午帅. 山西中医药大学, 2021
- [4]急性冠脉综合征气虚血瘀证和气滞血瘀证患者临床特征及炎症因子差异性研究[D]. 冯浩欣. 中国中医科学院, 2021(02)
- [5]从AMPK-HIF1-PKM2信号通路探讨代谢综合征痰证大鼠的生物学基础[D]. 魏佳. 福建中医药大学, 2021(01)
- [6]基于PDX-1通路研究补肾经方对GDM模型孕鼠胎鼠胰腺发育及胰岛素分泌细胞形成的影响[D]. 王超群. 湖北中医药大学, 2021(01)
- [7]基于GPX4通路调控铁死亡探讨活血解毒法治疗脑出血火毒证机制研究[D]. 周玉嘉. 北京中医药大学, 2021(01)
- [8]基于“心与小肠相表里”理论泽泻饮通过调节肠道微生态抗动脉粥样硬化的研究[D]. 朱博冉. 南京中医药大学, 2021(01)
- [9]中医体质分类辨识及肾阳虚体质线粒体基因SNP研究[D]. 何林熹. 成都中医药大学, 2020(01)
- [10]教育部关于印发普通高中课程方案和语文等学科课程标准（2017年版2020年修订）的通知[J]. 教育部. 中华人民共和国教育部公报, 2020(06)