一、深低温保存角膜缘干细胞羊膜片的异体移植（论文文献综述）
杨洁,张金莎,樱峰[1]（2015）在《HLA匹配角膜缘干细胞联合羊膜移植修复翼状胬肉》文中研究指明背景:HLA匹配的角膜缘干细胞联合羊膜移植治疗翼状胬肉是眼科医生治疗的新理念,该方法治疗后并发症少、康复快、复发率低,尤其是能减少移植排斥反应等已被广泛接受。目的:探讨HLA匹配的角膜缘干细胞联合羊膜移植治疗翼状胬肉疗效。方法:选取2013年3月1日至2014年4月30日行HLA匹配的角膜缘干细胞联合羊膜移植治疗的翼状胬肉患者47例（47眼）作为试验组;回顾性分析2010年3月1日至2012年12月1日采用单纯翼状胬肉切除方法治疗的翼状胬肉患者40例（47眼）作为对照组,对两组患者治愈和复发情况进行比较。结果与结论:试验组47例,全部顺利完成治疗,无并发症,其中1例切口感染,特殊对症治疗后均已好转出院,全部患者均无移植排斥反应。试验组治愈45眼,复发2眼,复发率为4.3%。对照组47眼中治愈32眼,复发15眼,复发率31.9%。结果表明HLA匹配的角膜缘干细胞联合羊膜移植治疗翼状胬肉并发症少、复发率低,是治疗翼状胬肉一种行之有效的方法。
王君怡[2]（2012）在《以羊膜为载体的同种异体角膜缘上皮干细胞膜片移植术后供体细胞的命运变化研究》文中指出第一部分兔碱烧伤角膜缘干细胞缺乏模型的建立、评价及病理改变的研究目的：建立能够模拟临床过程的兔碱烧伤角膜缘干细胞缺乏模型,为研究碱烧伤造成的角膜缘干细胞缺乏症（limbal stem cell deficiency, LSCD）提供科学、易行的研究模型。方法：兔碱烧角膜缘干细胞缺乏模型的建立及评价：（1）模型建立：将浸有1mol/L NaOH溶液的内径10mm,外径18mm的环形滤纸片置于新西兰雌性大白兔右眼角膜表面（包括角膜缘）30s,去除滤纸,同时在结膜囊内滴入1%NaOH1滴,0.9%生理盐水500m1冲洗结膜囊,建立兔碱烧伤角膜缘干细胞缺乏模型。伤后抗生素眼膏点眼1次/晚,常规饲养,定期裂隙灯下观察、照相；（2）模型评价：伤后30天,待炎症稳定后,对兔碱烧伤角膜缘干细胞缺乏模型进行评价：裂隙灯照相、评分；②印迹细胞学检查角膜结膜化程度；③活体共聚焦显微镜检查角膜缘及角膜各层结构及病理改变；④泪液分泌试验检测碱烧伤后泪液分泌情况；（3）病理学检查：板层切除伤后30d新生血管化的角膜,进行石蜡包埋后HE染色行组织病理学检查。结果：兔碱烧伤角膜缘干细胞缺乏模型的建立及评价：（1）模型建立情况：伤后即见球结膜缺血,角膜缘苍白,中央角膜轻度混浊；伤后14d见球结膜水肿、缺血,角膜混浊、水肿,虹膜纹理欠清,角膜缘新生血管长入；伤后30d,可见角膜混浊、新生血管长入、角膜上皮结膜化。（2）模型评价情况：①裂隙灯检查：根据化学伤临床评分标准对伤后30d的模型进行评分,其中86%（43眼/50眼）临床评分在6-10分,8%（4眼/50眼）临床评分<6分,2%（1眼/50眼）>10分,2%（1眼/50眼）角膜穿孔,2%（1眼/50眼）发生眼内炎；②印记细胞学检查示：角膜结膜化,可见杯状细胞存在；③活体共聚焦显微镜检查示：角膜缘栅栏结构消失,角膜上皮缺失,纤维组织覆盖,残存的角膜上皮细胞形态不规则,大量炎症细胞浸润,角膜上皮层及基质内见大量新生血管。④泪液分泌实验显示碱烧伤眼泪液分泌量较正常眼显着降低（p=0.000<0.05）；（3）病理学检查：切除的板层角膜组织表面粗糙不平,由异常增生的结膜上皮细胞覆盖,基质内可大量炎细胞浸润,新生血管丛生结论：碱烧伤是构建角膜缘干细胞缺乏模型的有效途径,利用碱液烧伤角膜缘可以成功的构建角膜缘干细胞缺乏模型,其方法易行、模型稳定,可以很好的模拟临床上碱烧伤造成的角膜缘干细胞缺乏症,为进一步研究提供了良好的基础。第二部分以羊膜为载体的同种异体角膜缘上皮干细胞膜片移植术后供体细胞的命运变化目的：1.以羊膜为载体构建同种异体角膜缘上皮干细胞膜片,并移植到兔碱烧伤角膜缘干细胞缺乏模型眼表,建立兔碱烧伤眼表重建模型；2.术后不同时间点检测移植的供体细胞存活情况,并在体追踪供体细胞移植后的命运变化,为临床治疗提供参考。方法：1.以羊膜为载体的同种异体角膜缘上皮干细胞膜片的构建：（1）细胞培养：取新西兰大白兔雄兔角膜缘组织,通过消化法获取角膜缘上皮干细胞,以去上皮羊膜为载体培养角膜缘上皮干细胞膜片。待细胞长满羊膜并复层,进行CM-DiI标记。（2）细胞状态分析：①细胞增殖能力检测：将角膜缘干细胞接种至96孔板,利用MTT法检测培养1-7天的角膜缘干细胞增殖能力；②细胞标志物检测：将少部分培养好的角膜缘上皮干细胞膜片进行HE染色、免疫荧光化学检测角膜缘干细胞标志物ABCG2、p63及角膜上皮标志物CK3表达情况；PCR检测ABCG2、p63及CK3基因表达情况；③细胞衰老、凋亡及坏死检测：将培养好的角膜缘上皮干细胞膜片进行铺片,通过p-半乳糖苷酶染色法、TUNEL法及台盼蓝-茜素红染色分别检测细胞衰老、凋亡及坏死情况。2.同种异体角膜缘上皮干细胞膜片移植术及术后供体细胞变化情况：（1）兔眼表重建模型建立：对碱烧伤角膜缘干细胞缺乏的模型兔进行血管膜切除+同种异体角膜缘上皮干细胞膜片移植术,术后缝合睑裂,按照临床常规用药,建立兔碱烧伤眼表重建模型；（2）术后供体细胞存活情况检测：术后7,30,60,90d取角膜,进行冰冻切片,荧光显微镜下观察标记有CM-DiI的供体细胞的位置和数量；PCR检测Y染色体性别决定基因（SRY）表达情况,追踪供体细胞的存活情况。（3）术后供体细胞变化情况：术后1,3,7,30,60,90d通过组织病理学检测、免疫荧光化学及PCR等方法检测供体细胞分化、衰老、凋亡及坏死情况：①细胞分化检测：PCR检测ABCG2、p63、CK3的基因表达情况；②细胞衰老、凋亡及坏死情况检测：术后不同时间点通过β-半乳糖甘酶染色、TUNEL法及台盼蓝-茜素红染色分别检测移植术后供体细胞的衰老、凋亡及坏死情况。结果：1.以羊膜为载体的同种异体角膜缘上皮干细胞膜片构建：（1）细胞培养：细胞接种后可在去上皮羊膜上粘附生长,并逐渐铺满羊膜表面,气-液界面培养（air-lifting）后可复至4-5层；（2）角膜缘上皮干细胞状态分析：①细胞增殖能力检测：MTT法检测角膜缘干细胞接种后3d增殖能力显着增加,6d达到顶峰,随后增殖能力下降；②细胞标志物检测：HE染色可见细胞结构清晰,着色好,显微镜下可见羊膜胶原纤维上角膜缘上皮干细胞生长,可复至4-5层,细胞结构完整,形态正常,与羊膜连接紧密；免疫组织化学检测见ABCG2、 p63、CK3表达阳性；PCR检测ABCG2、p63、CK3基因均呈阳性表达；③细胞衰老、凋亡及坏死检测：羊膜铺片可见羊膜表面极少量衰老、凋亡及坏死细胞,细胞生存状态良好。2.同种异体角膜缘上皮干细胞膜片移植术及术后供体细胞变化情况：（1）兔眼表重建模型建立：对18例临床评分在6-10分之间的碱烧伤模型进行了移植手术,术毕5例（27.8%）羊膜荧光素钠染色阳性；（2）术后供体细胞存活情况：术后7,30,60d均可检测到表达红色荧光的供体细胞,SRY基因亦均有表达；术后90d时,1例移植成功的角膜中仍可检测到标记红色荧光的供体细胞,PCR可检测到角膜组织中SRY基因的表达,2例移植失败的角膜中未检测到标记红色荧光的供体细胞,亦未检测到SRY基因的表达。（3）术后供体细胞变化情况：术后1d见羊膜表面出现大量凋亡细胞,衰老及坏死细胞少见；术后3d羊膜表面凋亡、坏死及衰老细胞数量明显增加,通过DAPI复染细胞核发现,这些凋亡、衰老及坏死的细胞以炎细胞为主,仅少量为移植的供体细胞,上皮细胞数量较前增多,位于表层的细胞成团分布,有逐渐连接成片的趋势；术后7d时羊膜表面凋亡、坏死及衰老细胞均较3d时略有减少,炎细胞亦有所减少,上皮细胞数量及层数明显增加,大部分区域上皮细胞连接成片；术后30d大部分模型可形成相对完整的角膜上皮,但再生的角膜上皮与正常角膜上皮形态不同,细胞层数减少,明显变薄,基底部缺乏立方形上皮细胞,以扁平细胞为主,同时羊膜下炎细胞浸润,浅基质结构紊乱,大量凋亡、衰老细胞存在于此区；术后60d部分角膜出现再次新生血管化,荧光显微镜下仅可见少量红色荧光标记的供体细胞存在于角膜上皮基底层中,且部分发生凋亡／坏死,未血管化的角膜可见1-3层扁平的角膜上皮细胞,羊膜下仍有炎细胞浸润；术后90d时绝大部分角膜发生再次血管化,羊膜下炎细胞浸润明显,仅有1例在术后90d时仍维持角膜透明,眼表稳定,组织内无炎细胞,未见凋亡及衰老细胞。结论：以羊膜为载体的同种异体角膜缘上皮干细胞膜片可在一定程度上改善碱烧伤眼表微环境,重建眼表功能。移植后7d内是供体细胞生存的关键时期,部分供体细胞因微环境改变而发生凋亡、衰老及坏死,其中凋亡是细胞死亡的主要形式。7-30d是供体细胞的抗击打适应期,生存下来的供体细胞可逐渐在受体眼表存活并分化,形成再生上皮,再生上皮较正常上皮层数减少,抵抗力差,大部分模型在术后60d时即出现角膜再次血管化,供体细胞逐渐减少并失活,少部分至术后90d时仍维持角膜透明,供体细胞可在受体眼表稳定的存活。眼表慢性炎症微环境可能是导致供体细胞死亡的重要因素,术前及术后积极抗炎治疗是提高移植成功率的关键。第三部分以羊膜为载体的同种异体角膜缘上皮干细胞移植术后免疫排斥反应研究目的：检测培养的同种异体角膜缘上皮干细胞移植术后的免疫排斥反应的发生时间、特点,并观察抗排斥药物治疗效果方法：建立兔碱烧伤眼表重建模型,并根据手术及用药的不同分为四组：A、免疫抑制剂（环孢素眼液）点眼组；B、免疫抑制剂（环孢素缓释药）结膜下植入组；C、无免疫抑制剂组；D、自体角膜缘上皮干细胞移植组。术后裂隙灯观察各组免疫排斥反应的发生情况,并根据化学伤临床评分标准进行评分。取术后14,30,60d角膜,进行冰冻切片,利用免疫荧光化学方法检测各组角膜组织中CD4+、D8+T淋巴细胞表达情况；PCR检测CD4、CD8基因表达情况。结果：免疫排斥反应主要发生于术后30-60d,术后14d时各组均无免疫排斥发生。A、B组分别于术后30d和60d各发生1例免疫排斥,C组发生3例免疫排斥,其中2例于术后30d,1例于术后60d,D组无免疫排斥反应发生。A、B、C、D各组均可检测到角膜基质内不同程度的CD4+T淋巴细胞浸润,A、B、C组可检测到少量的CD8’T淋巴细胞,而D组未检测到CD8’T淋巴细胞。PCR显示C组术后30d时CD4及CD8基因表达量显着上调,与其他三组比较均有显着性差异。术后30d时A组CD4及CD8基因表达量均高于B组,差异有统计学意义。结论：尽管与角膜/角膜缘移植相比,体外培养的同种异体角膜缘上皮干细胞移植术引发的免疫排斥反应时间晚,症状轻,但仍是影响供体细胞存活的重要因素。免疫抑制剂的应用有利于提高手术预后,其应用的关键时期为术后14-90d。CsA缓释药结膜下植入是一种安全、有效的抗免疫排斥治疗手段,但随缓释药物的吸收,免疫排斥反应几率升高,应及时补充免疫抑制剂。
沈培清,廖荣丰[3]（2009）在《培养角膜缘上皮细胞深低温保存后异体移植实验研究》文中进行了进一步梳理目的方法结果结论深低温保存培养的角膜缘上皮细胞,复苏后进行异体移植实验,为临床应用提供实验依据。将浅层角膜基质载体上培养的角膜缘上皮细胞深低温保存,同时制作兔角膜缘干细胞损伤模型,分别用新鲜培养的角膜缘上皮细胞和冷冻复苏后培养的细胞及角膜基质进行异体移植实验。角膜缘上皮细胞能成功地培养于载体上,将培养细胞保存于-196℃的液氮罐中二月,可见深低温保存前后细胞的形态结构及生物学特性无显着差异。异体移植实验显示:新鲜培养的细胞及深低温保存后的细胞异体移植后,模型兔角膜表面逐渐正常上皮化,而角膜基质组异体移植后,角膜表面仍结膜化并可见大量新生血管生长,各项检测结果与培养细胞组相比差异显着（<0.05）。以浅层角膜基质为载体培养的角膜缘上皮细胞深低温保存后仍具有上皮细胞特性并具有高增殖能力,可用以进行异体移植治疗角膜缘干细胞缺陷的角膜病。
赵清梅[4]（2008）在《山羊角膜上皮细胞与角膜内皮细胞分离培养研究》文中指出各种角膜疾病和外科损伤都会导致角膜细胞受损,当损伤超过其生理代偿时,就会发生角膜病变,严重时会导致角膜盲。目前角膜移植是治疗此类角膜疾病比较成熟的方法,但受到了供体角膜缺乏、术后并发症、角膜供体老龄化等条件的限制。将自体或异体角膜细胞体外培养构建组织工程化人工角膜移植,既可解决临床应用供体短缺问题,又可为角膜体外药理或生理研究提供大量材料。本研究通过体外分离培养山羊角膜上皮细胞和角膜内皮细胞,并研究其体外生长特性和接种羊膜载体培养情况,为组织工程人工角膜的构建奠定理论基础。1.山羊角膜上皮细胞的体外分离培养与鉴定通过比较组织块和酶消化法培养山羊原代角膜缘上皮细胞,发现酶消化法更适合原代角膜缘上皮细胞的分离纯化培养。获取的山羊角膜缘上皮细胞形态为多角形,具有较强的增殖能力,体外培养能传20多代,细胞冻存后仍具有细胞冻存前的形态和活力。经免疫组化和RT-PCR检测,培养的角膜缘上皮细胞表达K3/K12、p63、Cx43、ABCG2和PCNA,具有角膜上皮细胞和角膜缘干细胞表型,说明分离培养的细胞为角膜缘上皮细胞和角膜缘干细胞混合物,可为组织工程化人工角膜上皮的构建提供种子细胞。2.组织工程化人工角膜上皮的构建在去上皮细胞人羊膜上接种关中奶山羊角膜缘组织块或培养的关中奶山羊角膜缘上皮细胞构建的组织工程角膜上皮,并对其进行组织形态学、超微结构观察和免疫组化检测。结果显示,角膜缘组织块和角膜上皮细胞在羊膜上培养15 d均可形成6～7层结构,细胞内含丰富的细胞器和糖原颗粒,细胞间有大量的桥粒连接,细胞与羊膜间形成半桥粒连接,构建的复合角膜上皮p63染色阳性。比较角膜缘组织块在去羊膜上皮细胞的新鲜羊膜、冻存30 d羊膜、冻存60 d羊膜和冻存180 d羊膜上生长情况发现,从角膜缘组织块脱出的细胞生长面积在冻存30 d羊膜上最大,而在新鲜羊膜上细胞生长面积最小。比较角膜缘组织块在冻存60 d去上皮羊膜和未去上皮羊膜上生长情况发现,从角膜缘组织块脱出的细胞生长面积在去上皮羊膜上显着大于未去上皮羊膜上。说明用组织块法和种传代细胞法均能构建组织工程化人工角膜上皮,细胞培养载体需用冻存30 d左右去上皮细胞的羊膜,为组织工程化人工角膜上皮的构建研究奠定理论基础。3.山羊角膜内皮细胞的体外分离培养与鉴定比较组织块法、胰酶消化法、dispase酶消化法和dispase酶+胰酶消化法培养山羊原代角膜内皮细胞。dispase酶+胰酶消化法为角膜内皮细胞原代分离纯化的最适方法,分离的细胞在体外能连续传20多代,细胞冻存后解冻培养能保持冻存前细胞形态和活力。培养的细胞经扫描电镜和透射电镜观察,具有正常角膜内皮细胞特征,免疫组化染色和RT-PCR检测角膜内皮细胞表达神经元标志NSE和β3-tublin、星形胶质细胞标志GFAP、细胞间连接蛋白ZO-1和Cx43,不表达神经干细胞标志物Nestin、角膜缘干细胞标志p63和角膜上皮细胞标志K3/K12。比较细胞培养板包被物对角膜内皮细胞贴壁和增殖能力影响发现,Ⅳ胶原、多聚赖氨酸和明胶均能明显促进细胞贴壁和增殖,Ⅳ胶原和明胶组强于多聚赖氨酸组,而Ⅳ胶原组和明胶组之间差异不显着,提示可选择价格便宜的明胶作为细胞培养板用包被物。角膜内皮细胞培养液筛选发现:与NBS相比,FBS能更好的促进角膜内皮细胞增殖和维持其形态;培养液中添加bFGF能显着促进细胞增殖,但能促进细胞形态向成纤维形转变;添加EGF对细胞增殖影响不大,但能促进细胞形态改变;添加硫酸软骨素显着抑制细胞增殖,但能较好的维持细胞形态;添加Vc对细胞增殖和形态均无明显影响。将传代培养的角膜内皮细胞种羊膜上培养,经组织切片、透射和扫描电镜观察发现细胞在羊膜上具有形成单层的能力。说明分离培养的角膜内皮细胞具有正常角膜内皮细胞特征,能体外传代培养,在羊膜载体上具有形成单层的能力,可为构建组织工程化人工角膜内皮和角膜内皮细胞的体外实验研究提供种子细胞。4.山羊角膜内皮细胞人端粒酶逆转录酶基因转染将人端粒酶逆转录酶基因（hTERT）转入培养至7代的角膜内皮细胞内,通过免疫组化和RT-PCR检测证明转染的hTERT在山羊角膜内皮细胞内表达。通过传代培养观察,转染hTERT的角膜内皮细胞体外能传20多代,与未转染hTERT的角膜内皮细胞相比,并未显着提高其增殖能力。说明将人端粒酶基因转入山羊角膜内皮细胞内,未能明显延长细胞寿命。
沈培清[5]（2008）在《以兔浅层角膜基质为载体体外培养角膜缘上皮细胞深低温保存后生物学活性研究》文中指出目的通过对培养于浅层角膜基质上的角膜缘上皮细胞进行深低温保存,检测复苏后细胞的结构及活性,将细胞培养片移植到角膜缘干细胞严重损伤的异体模型兔角膜缘,并观察移植治疗效果,为角膜基质载体上培养的角膜缘上皮细胞应用于临床提供实验依据。方法实验室阶段:（1）角膜缘上皮细胞的原代培养:将切削的兔浅层角膜缘组织剪成1mm×1mm大小组织块,用含20%胎牛血清的细胞培养液培养于细胞培养瓶中,至细胞形成单层;（2）角膜缘上皮细胞种植于去上皮浅层角膜基质上传代培养:将原代培养的细胞经VTP（0.25%胰酶和0.02%EDTA V:V=1:1）消化制成单细胞悬液,滴加在去上皮浅层角膜基质载体上继续培养至细胞形成2～3层;（3）载体上培养的角膜缘上皮细胞深低温保存:将培养于角膜基质载体上的角膜缘上皮细胞放入冷冻保存液中按阶段降温保存在液氮罐中,冷冻保存液由90%胎牛血清+10%二甲基亚砜（DMSO）配成;（4）原代培养的角膜缘上皮细胞鉴定:采用倒置显微镜、电镜及免疫细胞化学染色鉴定培养的细胞的性质;（5）深低温保存前后载体上角膜缘上皮细胞形态比较及鉴定:通过倒置显微镜、电镜、HE染色及免疫细胞化学染色来比较培养的角膜缘上皮细胞的形态结构及生物学活性。动物实验阶段:将30只白兔制成角膜缘干细胞损伤模型,随机分成角膜基质组、新鲜培养细胞组及培养细胞深低温保存组,每组10只,分别用单纯的角膜基质、未冷冻及冷冻后的培养有角膜缘上皮细胞的角膜基质载体做移植实验,观察移植后一段时间受体角膜的眼表改变。结果（1）原代培养的角膜缘上皮细胞经VTP消化制成单细胞悬液,接种于去上皮浅层角膜基质载体上继续培养,细胞生长良好并能很好地附着在角膜基质载体上,传代培养第14天,载体上细胞可形成2～3层,经增殖细胞核抗原（PCNA）单克隆抗体免疫细胞化学染色呈阳性反应;（2）深低温保存前后角膜缘上皮细胞形态学变化和活性状况有所差异:倒置显微镜下观察可见冷冻复苏后细胞呈圆球形,与基质载体疏松相连,继续培养4～5天后,细胞渐伸展呈多边形,复苏后培养期间可见部分细胞脱落死亡;透射电镜检查也显示冻存后细胞的超微结构与未冻存培养细胞相比有轻度改变;（3）同种异体移植实验:兔角膜缘干细胞损伤模型制作术后5周,可见角膜大量新生血管长入并伴有结膜上皮入侵。以基质载体培养的角膜缘上皮细胞未冷冻及冷冻复苏后培养一周移植,移植术后一月,损伤角膜表面逐渐上皮化,角膜新生血管仅限于角膜缘,而对照组（仅移植角膜基质）术后一月,角膜上皮细胞仍然缺失,新生血管未见明显变化。结论以浅层角膜基质为载体进行角膜缘上皮细胞培养,可培养出复层上皮细胞,经深低温保存后仍保持上皮细胞特性并具有高增殖能力,可用来作异体角膜缘移植治疗角膜缘功能缺陷的角膜病。
弥胜利[6]（2008）在《冻存山羊角膜缘干细胞构造角膜上皮移植及检测研究》文中认为角膜上皮完整性的维持依赖于表浅细胞不断脱落和基底层细胞不断增殖来完成,上皮细胞持续不断的水平向心运动和垂直向上运动源于角膜缘基底层的干细胞增殖和分化。因此,角膜缘干细胞对正常角膜生理功能的稳定起重要作用。许多研究报道体外培养角膜缘干细胞构建上皮植片,可以满足临床移植的需要。但是这些报道中,多采用3T3细胞做饲养层促进上皮细胞的增殖,由于3T3细胞是来自胎鼠的成纤维细胞,其在临床应用有将异种动物疾病传播给人类的危险。另外,目前培养角膜缘干细胞用于重建角膜上皮的研究与临床应用,都是在培养结束后就直接应用于临床,需要患者的身体状况与培养结束后细胞的最佳生长状态相吻合,否则,就会导致整个操作和手术失败。如果能够将培养好的角膜缘干细胞在体外保存一定时间,于不同时间根据患者的身体状况,解冻细胞再继续培养,将极大地方便其临床应用与研究。近年来成体干细胞可塑性的报道不断涌现,几乎所有哺乳动物的成体干细胞都具有横向分化潜能。但是角膜缘干细胞体外诱导分化少见报道。本研究从山羊角膜缘干细胞分离、培养入手,系统比较了原代角膜缘干细胞的分离方法,优化了角膜缘干细胞有血清培养体系,建立了角膜缘干细胞无血清培养体系。对分离富集的角膜缘干细胞体外连续传代后,液氮中长期冻存。解冻后,对其干细胞相关特性进行了研究。本研究以人羊膜为载体负载冻存角膜缘干细胞,在无饲养层无血清的培养体系中构建组织工程化角膜上皮,手术移植给角膜缘干细胞缺损模型羊眼表,结合药物使用抑制免疫排斥反应,最后对其移植治疗效果进行综合评价。实验研究主要内容包括:1山羊角膜缘干细胞的分离培养与鉴定研究（1）比较酶消化法与组织块培养法分离山羊角膜缘干细胞上的效率,认为酶消化法在分离所得细胞中干细胞的比例,分离效率,分离细胞增殖活性,以及分离细胞纯度上均优于组织块培养法。（2）筛选不同浓度的IV胶原,以及不同粘附时间,对角膜缘干细胞分离的影响。结果表明:IV胶原最佳粘附浓度为20μg/mL,最佳粘附时间为20min。（3）筛选出EGF和Insulin对角膜缘干细胞增殖影响的最佳作用浓度分别为20ng/mL和10μg/mL,优化了角膜缘干细胞有血清培养体系,建立了角膜缘干细胞无血清无饲养层培养体系,此无血清培养体系已申请国家专利,专利申请号:200710018160.9。（4）角膜缘干细胞最高传至28代,液氮中共冻存角膜缘干细胞6×107,解冻细胞仍然保持了角膜缘干细胞的相关生物学特性。研究中所建立的冻存体系可以满足不同的实验条件下,对角膜缘干细胞的运输、保存和增殖的要求。2山羊角膜缘干细胞体外定向诱导分化研究（1）解冻扩增角膜缘干细胞经1m mol/Lβ-Me预诱导24h后,再用5m mol/Lβ-Me正式诱导18h,改用无血清培养基培养7d,角膜缘干细胞分化为神经样细胞,表达NSE神经细胞标志。（2）解冻扩增角膜缘干细胞经10 u mol 5-氮胞苷诱导48h,用含心肌条件培养基的培养液体外连续培养25d,角膜缘干细胞逐渐聚集生长,最终分化为心肌样细胞,表达α-actin心肌细胞标志蛋白。（3）解冻扩增角膜缘干细胞经50μg/mL抗坏血酸、10m mol/Lβ-磷酸甘油和0.1u mol/L地塞米松联合诱导7d后,部分细胞死亡,部分细胞呈三角形或多角形聚集生长,连续诱导21d后,诱导细胞形成细胞结节,茜素红染色阳性,呈成骨样细胞。（4）解冻扩增角膜缘干细胞经2m mol/L谷氨酰胺、0.01%大豆胰酶抑制剂、10m mol/L烟碱、5ng/ml肝细胞生长因子（HGF）联合诱导,5d后,细胞胞体逐渐变大,继续诱导,细胞开始聚集成团,连续诱导21d后,诱导形成的细胞团Insulin抗体染色呈阳性,呈胰岛样细胞。3山羊组织工程角膜上皮植片的构建移植与检测研究（1）以冻存角膜缘干细胞为种子细胞,用无血清无饲养层培养体系,以去上皮羊膜为载体,体外培养12-14天,成功构建具有与正常角膜相似结构的组织工程角膜上皮。（2）冻存角膜缘干细胞组织工程化角膜上皮移植可重建角膜缘干细胞完全缺失失明病理模型羊眼表。跟踪观察3个月,实验组100%（15/15）形成角膜型上皮（荧光素不着色）;跟踪观察6个月,实验组20%（3/15）角膜上皮基本透明,80%（12/15）部分角膜开始透明;有6只实验组山羊,跟踪观察12个月,33.3%（2/6）成功修复受损角膜,角膜上皮完全透明,66.7%（4/6）部分修复,视力得到一定恢复。而角膜缘干细胞缺失未进行角膜上皮移植的对照组山羊,全部角膜结膜化失明。眼罩蒙蔽正常眼,对另一侧试验眼进行功能性检测,对试验羊进行驱赶,角膜完全修复组山羊能辨别方向正确躲避;病理模型组山羊完全无方向感,不能正确躲避甚至出现撞墙现象。（3）提出了异体移植的角膜缘干细胞修复角膜缘干细胞完全缺失病理模型的机理可能是:外源移植的异体干细胞抑制了自身周围结膜以及血管向中央角膜上皮的生长,协同机体其他来源的前体细胞共同参与完成了角膜上皮的修复过程,实现角膜上皮重建。（4）系统评价了组织工程化人工角膜上皮移植效果,首次通过检测SRY基因的办法,动态监测了供体细胞在受体动物机体中是否长期存在。并且采用酶标仪测定了角膜上皮透光度,此方法操作简单,结果真实可靠,可以在实验动物中很好地评价角膜上皮透光度。
黄小勇,刘翔,谭小玲[7]（2007）在《角膜移植排斥反应的基础研究进展》文中认为影响异体角膜缘/角膜缘干细胞移植术成败的关键是术后移植排斥反应的防治。在参阅有关文献后,本文对术后移植排斥反应的机制、表现及早期诊断和处理方法等诸多方面进行了较为全面的综述。
郑穗联,蔡剑秋,徐栩,韩真真,施明光[8]（2006）在《异体角膜缘干细胞移植联合手术的临床应用》文中研究表明目的应用异体角膜缘干细胞联合手术治疗严重眼表疾病。方法28例（28眼）接受90°360°新鲜或液氮保存的不同阶段的异体角膜缘干细胞联合羊膜移植术、全厚板层角膜移植术,或穿透性角膜移植术。结果16例眼表结构恢复满意,印迹细胞学检查未见杯状细胞;6例眼表结构恢复满意并提高了视力;3例眼球得以保存;3例失败,全部为360°角膜缘干细胞联合穿透性角膜移植术者,不同阶段的深低温保存的异体角膜缘干细胞都具备一定活性。结论角膜缘干细胞移植联合手术可以用于治疗严重眼表疾病。新鲜角膜缘干细胞与液氮保存的异体角膜缘干细胞应用无明显差异。
韩真真,郑穗联,蔡剑秋[9]（2005）在《深低温保存角膜缘组织的结构检测及临床急症应用》文中研究指明
蔡剑秋,张艳玲,郑穗联,韩真真[10]（2004）在《深低温保存异体角膜缘干细胞羊膜移植治疗重度眼表疾病》文中进行了进一步梳理目的 应用以羊膜为载体的深低温保存的角膜缘干细胞同种异体移植术治疗重度眼表疾病。方法 19例 19眼重度眼表疾病患者采用羊膜移植联合深低温保存的角膜缘干细胞同种异体移植 ,2例术后半年行穿透性角膜移植术 ,随访观察术后疗效。结果 14例平均随访超过一年 ,眼表结构恢复正常 ,整个角膜上皮未见结膜杯状细胞 ,保存了眼球 ,视力均有不同程度的提高 ;1例植片脱落 ;4例发生角膜自溶的免疫排斥反应。结论 羊膜移植联合深低温保存的角膜缘干细胞同种异体移植术对于重度眼表疾病患者能快速、稳定的促进角膜表面重新上皮化 ,是一项可采纳的技术。
二、深低温保存角膜缘干细胞羊膜片的异体移植（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、深低温保存角膜缘干细胞羊膜片的异体移植（论文提纲范文）
（1）HLA匹配角膜缘干细胞联合羊膜移植修复翼状胬肉（论文提纲范文）
| 文章亮点: |
| 0引言Introduction |
| 1 对象和方法Subjects and methods |
| 2 结果Results |
| 2.1 参与者数量分析 |
| 2.2 两组各项基本资料 |
| 2.3 两组手术时间、住院时间、治疗成功率 |
| 2.4 两组患者复发情况、矫正视力 |
| 2.5 角膜上皮愈合时间和移植片愈合时间 |
| 2.6 不良反应 |
| 2.7 典型病例分析 |
| 3 讨论Discussion |
（2）以羊膜为载体的同种异体角膜缘上皮干细胞膜片移植术后供体细胞的命运变化研究（论文提纲范文）
| 论文创新点 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分 兔碱烧伤角膜缘干细胞缺乏模型的建立、评价及病理改变的研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3.讨论 |
| 4.结论 |
| 第二部分 以羊膜为载体的同种异体角膜缘上皮干细胞膜片移植术后供体细胞的命运变化 |
| 第一节 以羊膜为载体的角膜缘上皮干细胞膜片的培养和鉴定 |
| 第二节 同种异体角膜缘上皮干细胞移植手术及其术后供体细胞命运变化 |
| 第三部分 以羊膜为载体培养的同种异体角膜缘干细胞移植术后免疫排斥反应研究 |
| 1.材料与方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 4.结论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 综述 体外角膜缘上皮干细胞培养及其在眼表重建中的作用 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（4）山羊角膜上皮细胞与角膜内皮细胞分离培养研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 角膜的早期胚胎发育、组织结构和生理功能 |
| 1.1 角膜的早期胚胎发育 |
| 1.1.1 胚眼的形成 |
| 1.1.2 角膜的发生与形成 |
| 1.1.3 角膜内皮的胚胎发育 |
| 1.2 角膜的解剖结构 |
| 1.3 角膜的组织结构 |
| 1.3.1 上皮细胞层 |
| 1.3.2 前弹力膜 |
| 1.3.3 基质层 |
| 1.3.4 后弹力膜 |
| 1.3.5 内皮细胞层 |
| 1.4 角膜缘 |
| 1.5 角膜的生理功能 |
| 1.5.1 角膜的透明性 |
| 1.5.2 角膜的渗透性 |
| 1.5.3 角膜的生理免疫功能 |
| 1.5.4 角膜的营养和代谢 |
| 1.5.5 角膜的修复 |
| 1.5.6 角膜的知觉 |
| 第二章 角膜缘干细胞 |
| 2.1 角膜缘干细胞的概念与定位 |
| 2.1.1 干细胞的概念和特点 |
| 2.1.2 角膜缘干细胞及其定位 |
| 2.2 角膜缘干细胞的微环境 |
| 2.3 角膜缘干细胞的特异性标记 |
| 2.4 角膜缘干细胞体外培养 |
| 2.4.1 角膜缘干细胞的分离培养方法 |
| 2.4.2 角膜缘干细胞的培养条件 |
| 2.4.3 体外培养的角膜缘干细胞鉴定方法 |
| 2.5 角膜缘干细胞的临床应用 |
| 2.5.1 自体角膜缘干细胞的移植 |
| 2.5.2 异体角膜缘干细胞移植 |
| 2.5.3 角膜缘干细胞体外培养后移植 |
| 第三章 人羊膜在眼科临床应用的研究进展 |
| 3.1 羊膜的生物学特性 |
| 3.2 人羊膜的制备与保存 |
| 3.2.1 羊膜的制备 |
| 3.2.2 羊膜的保存 |
| 3.3 羊膜在眼科领域的应用 |
| 3.3.1 羊膜在各种眼表疾病治疗中的应用 |
| 3.3.2 作为药物缓释系统 |
| 3.4 问题与展望 |
| 第四章 角膜内皮细胞研究进展 |
| 4.1 角膜内皮细胞的增殖能力 |
| 4.1.1 角膜内皮细胞的结构和功能 |
| 4.1.2 角膜内皮细胞体内不增殖的证据 |
| 4.1.3 体内抑制角膜内皮细胞增殖的机制 |
| 4.1.4 细胞周期与角膜内皮细胞增殖 |
| 4.1.5 年龄与角膜内皮细胞增殖 |
| 4.1.6 促进角膜内皮细胞增殖的因素 |
| 4.2 角膜内皮细胞干细胞 |
| 4.3 角膜内皮细胞的体外培养 |
| 4.3.1 角膜内皮细胞的分离培养研究 |
| 4.3.2 角膜内皮细胞的鉴定 |
| 4.4 培养的角膜内皮细胞移植 |
| 第五章 组织工程化人工角膜的研究 |
| 5.1 人工角膜的研究简史 |
| 5.2 组织工程化人工角膜的构建 |
| 5.2.1 种子细胞 |
| 5.2.2 载体研究 |
| 5.2.3 组织工程全层角膜的构建及移植 |
| 第六章 山羊角膜缘上皮细胞的体外分离培养与鉴定 |
| 6.1 材料和方法 |
| 6.1.1 材料 |
| 6.1.2 方法 |
| 6.2 结果 |
| 6.2.1 体外培养的角膜缘上皮细胞的生长特性 |
| 6.2.2 生长曲线及群体倍增时间 |
| 6.2.3 贴壁率 |
| 6.2.4 角膜缘上皮细胞的冻存与复苏 |
| 6.2.5 免疫组化染色 |
| 6.2.6 RT-PCR 检测结果 |
| 6.3 讨论 |
| 6.3.1 山羊角膜缘上皮细胞生长特性 |
| 6.3.2 角膜缘干细胞的鉴定 |
| 6.4 小结 |
| 第七章 组织工程化人工角膜上皮的构建 |
| 7.1 材料与方法 |
| 7.1.1 材料 |
| 7.1.2 羊膜的制备与保存 |
| 7.1.3 角膜缘上皮细胞的培养 |
| 7.1.4 羊膜角膜上皮植片的构建 |
| 7.1.5 不同冻存时间羊膜对角膜缘上皮细胞培养的影响 |
| 7.1.6 羊膜上皮细胞对角膜缘上皮细胞生长的影响 |
| 7.1.7 正常山羊角膜的采集 |
| 7.1.8 石蜡切片的制备和HE 染色 |
| 7.1.9 免疫组化染色观察 |
| 7.1.10 透射电镜观察 |
| 7.1.11 数据统计 |
| 7.2 结果 |
| 7.2.1 组织工程人工角膜的构建 |
| 7.2.2 不同冻存时间羊膜对角膜缘上皮细胞生长的影响 |
| 7.2.3 羊膜上皮细胞对角膜缘上皮细胞生长的影响 |
| 7.3 讨论 |
| 7.3.1 组织工程人工角膜的构建 |
| 7.3.2 冻存不同时间去上皮羊膜对角膜缘上皮细胞的影响 |
| 7.3.3 羊膜上皮细胞对角膜缘上皮细胞生长的影响 |
| 7.4 小结 |
| 第八章 山羊角膜内皮细胞的分离培养与鉴定 |
| 8.1 材料和方法 |
| 8.1.1 材料 |
| 8.1.2 方法 |
| 8.2 结果 |
| 8.2.1 GCECs 培养方法的比较 |
| 8.2.2 GCECs 生长特性 |
| 8.2.3 培养体系筛选 |
| 8.2.4 GCECs 的鉴定 |
| 8.2.5 GCECs 在羊膜上的培养 |
| 8.3 讨论 |
| 8.3.1 角膜内皮细胞分离纯化与鉴定 |
| 8.3.2 角膜内皮细胞的生长特性 |
| 8.3.3 培养体系筛选 |
| 8.4 小结 |
| 第九章 山羊角膜内皮细胞人端粒酶逆转录酶基因转染 |
| 9.1 材料与方法 |
| 9.1.1 材料 |
| 9.1.2 方法 |
| 9.2 结果 |
| 9.2.1 pC1-neo-hTERTT 质粒双酶切鉴定 |
| 9.2.2 RT-PCR 检测细胞中外源性hTERT 的表达 |
| 9.2.3 免疫组化染色结果 |
| 9.2.4 细胞形态观察 |
| 9.2.5 细胞生长曲线 |
| 9.3 讨论 |
| 9.4 小结 |
| 结论 |
| 本研究的创新之处和尚需进一步研究的课题 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（5）以兔浅层角膜基质为载体体外培养角膜缘上皮细胞深低温保存后生物学活性研究（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（6）冻存山羊角膜缘干细胞构造角膜上皮移植及检测研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 文献综述 |
| 第一章 角膜缘干细胞 |
| 1.1 角膜缘干细胞概念与定位 |
| 1.1.1 角膜缘的组织解剖 |
| 1.1.2 角膜缘干细胞的定位 |
| 1.2 角膜缘干细胞发育分化及迁移过程 |
| 1.3 干细胞微环境 |
| 1.4 角膜缘干细胞的生物学特性 |
| 1.4.1 慢周期性(slow cycling) |
| 1.4.2 自我更新能力 |
| 1.4.3 粘附特性 |
| 1.4.4 角膜缘干细胞的形态结构特征 |
| 1.4.5 角膜缘干细胞相关标志 |
| 1.4.6 角膜缘干细胞分化标志 |
| 1.5 角膜缘干细胞的分离纯化及鉴定 |
| 1.5.1 获取和培养原代角膜缘干细胞的一般方法 |
| 1.5.2 角膜缘干细胞体外培养体系 |
| 1.5.3 角膜缘干细胞体外培养的载体 |
| 1.5.4 角膜缘干细胞体外培养的形态学及动力学研究方法 |
| 1.5.5 筛选纯化角膜缘干细胞的方法 |
| 1.5.6 体外培养角膜缘干细胞的鉴定方法 |
| 1.6 角膜缘干细胞的超低温冻存 |
| 1.6.1 培养的角膜缘干细胞超低温保存的必要性和可行性 |
| 1.6.2 角膜缘干细胞超低温保存的技术和方法 |
| 1.7 角膜缘干细胞研究中仍需研究的几个问题 |
| 1.7.1 角膜缘干细胞高特异性标志物筛选研究 |
| 1.7.2 角膜缘干细胞微环境研究 |
| 1.7.3 角膜缘干细胞可塑性研究 |
| 1.7.4 角膜缘干细胞超低温冻存体系的优化研究 |
| 第二章 角膜缘干细胞可塑性研究 |
| 2.1 成体干细胞可塑性研究 |
| 2.1.1 成体干细胞可塑性的研究背景及现状 |
| 2.2.2 成体干细胞可塑性分化机制 |
| 2.2 角膜缘干细胞分化潜能与可塑性研究 |
| 2.3 成体干细胞潜在应用前景 |
| 第三章 角膜上皮移植研究 |
| 3.1 角膜移植 |
| 3.1.1 自体角膜缘干细胞移植 |
| 3.1.2 异体角膜缘干细胞移植 |
| 3.1.3 角膜缘干细胞体外培养后移植 |
| 3.2 组织工程化角膜研究的基本问题 |
| 3.2.1 种子细胞 |
| 3.2.2 支架材料 |
| 3.3 羊膜角膜上皮植片的构建移植及检测 |
| 3.3.1 羊膜负载角膜上皮细胞植片的构建 |
| 3.3.2 移植羊膜角膜植片手术和术后护理 |
| 3.3.3 角膜上皮植片移植后效果评价 |
| 3.4 展望 |
| 实验研究 |
| 第四章 山羊角膜缘干细胞的分离培养与鉴定研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 材料 |
| 4.1.2 方法 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 原代山羊角膜缘干细胞分离和富集 |
| 4.2.2 山羊角膜缘干细胞继代培养体系的优化 |
| 4.2.3 山羊角膜缘干细胞在体外冷冻保存 |
| 4.2.4 冻存山羊角膜缘干细胞的生物学特性 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 角膜缘干细胞分离方法探讨 |
| 4.3.2 角膜缘干细胞富集方法探讨 |
| 4.3.3 角膜缘干细胞无血清无饲养层培养体系的建立 |
| 4.3.4 角膜缘干细胞的鉴定方法 |
| 4.3.5 角膜缘干细胞的超低温冻存 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 山羊角膜缘干细胞体外定向诱导分化研究 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 材料 |
| 5.1.2 方法 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 山羊角膜缘干细胞向神经细胞分化 |
| 5.2.2 山羊角膜缘干细胞向心肌细胞分化 |
| 5.2.3 山羊角膜缘干细胞向成骨细胞分化 |
| 5.2.4 山羊角膜缘干细胞向胰岛样细胞分化 |
| 5.3 讨论 |
| 5.3.1 角膜缘干细胞向神经细胞分化 |
| 5.3.2 角膜缘干细胞向心肌细胞分化 |
| 5.3.3 角膜缘干细胞向成骨细胞分化 |
| 5.3.4 角膜缘干细胞向胰岛样细胞分化 |
| 5.4 小结 |
| 第六章 山羊组织工程角膜上皮植片的构建移植与检测 |
| 6.1 材料与方法 |
| 6.1.1 材料 |
| 6.1.2 方法 |
| 6.2 结果 |
| 6.2.1 角膜缘干细胞缺失病理模型山羊眼表特征 |
| 6.2.2 冻存角膜缘干细胞在羊膜上的生长行为及羊膜植片的组织学特征 |
| 6.2.3 角膜上皮移植效果评价 |
| 6.3 讨论 |
| 6.3.1 冻存角膜缘干细胞无血清培养构建组织工程角膜上皮 |
| 6.3.2 羊膜是负载角膜缘干细胞的理想载体 |
| 6.3.3 人工角膜上皮移植效果评价 |
| 6.4 小结 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 进一步研究的课题 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（7）角膜移植排斥反应的基础研究进展（论文提纲范文）
| 1 移植排斥反应的基础 |
| 2 移植排斥反应表现及早期诊断 |
| 3 移植排斥反应的处理进展 |
| 3.1 药物治疗进展 |
| 3.1.1 治疗方案的改进 |
| 3.1.2 改进给药方式 |
| 3.1.3 新药的开发 |
| 3.2 干细胞体外培养后移植 |
| 3.3 转基因研究 |
| 4 结语 |
（10）深低温保存异体角膜缘干细胞羊膜移植治疗重度眼表疾病（论文提纲范文）
| 材料与方法 |
| 1.病例选择 |
| 2.羊膜准备和角膜缘干细胞准备 |
| (1) 羊膜准备: |
| (2) 角膜缘干细胞准备: |
| 3.羊膜移植和角膜缘干细胞同种异体移植 |
| 结 果 |
| 讨 论 |
四、深低温保存角膜缘干细胞羊膜片的异体移植（论文参考文献）
- [1]HLA匹配角膜缘干细胞联合羊膜移植修复翼状胬肉[J]. 杨洁,张金莎,樱峰. 中国组织工程研究, 2015(06)
- [2]以羊膜为载体的同种异体角膜缘上皮干细胞膜片移植术后供体细胞的命运变化研究[D]. 王君怡. 武汉大学, 2012(06)
- [3]培养角膜缘上皮细胞深低温保存后异体移植实验研究[J]. 沈培清,廖荣丰. 实用防盲技术, 2009(04)
- [4]山羊角膜上皮细胞与角膜内皮细胞分离培养研究[D]. 赵清梅. 西北农林科技大学, 2008(12)
- [5]以兔浅层角膜基质为载体体外培养角膜缘上皮细胞深低温保存后生物学活性研究[D]. 沈培清. 安徽医科大学, 2008(05)
- [6]冻存山羊角膜缘干细胞构造角膜上皮移植及检测研究[D]. 弥胜利. 西北农林科技大学, 2008(12)
- [7]角膜移植排斥反应的基础研究进展[J]. 黄小勇,刘翔,谭小玲. 眼视光学杂志, 2007(01)
- [8]异体角膜缘干细胞移植联合手术的临床应用[J]. 郑穗联,蔡剑秋,徐栩,韩真真,施明光. 眼外伤职业眼病杂志.附眼科手术, 2006(06)
- [9]深低温保存角膜缘组织的结构检测及临床急症应用[J]. 韩真真,郑穗联,蔡剑秋. 中华急诊医学杂志, 2005(10)
- [10]深低温保存异体角膜缘干细胞羊膜移植治疗重度眼表疾病[J]. 蔡剑秋,张艳玲,郑穗联,韩真真. 中国实用眼科杂志, 2004(09)