一、聚合酶链反应-单链构型多态性检测细胞壁缺陷型淋病奈瑟菌cppB基因变异（论文文献综述）
魏荣旋,赵庆,王和[1]（2010）在《细胞壁缺陷型淋病奈瑟菌cppB基因酶切图谱分析》文中进行了进一步梳理目的探讨细胞壁缺陷对淋病奈瑟菌隐蔽性质粒B（cppB）基因的影响以及细胞壁缺陷型淋病奈瑟菌cppB的变异特点。方法用青霉素诱导淋病奈瑟菌成为细胞壁缺陷型并获得其纯培养物,cppB基因特异性引物PCR检测细胞壁缺陷型纯培养物的cppB基因,并对其cppB基因PCR扩增产物进行限制性核酸内切酶图谱分析。结果细菌型和细胞壁缺陷型均具有cppB基因扩增产物,经过限制性内切酶HindⅢ、HinfⅠ、HpaⅡ和MspⅠ消化和电泳,在5%PAGE凝胶电泳中,呈现出相同的电泳条带。结论淋病奈瑟菌细菌型及其细胞壁缺陷型对cppB基因限制性核酸内切酶（HindⅢ、HinfⅠ、MspⅠ、HpaⅡ）的分析没有发现淋病奈瑟菌L型具有与其亲代细菌型不同的图谱,提示细胞壁缺陷没有导致淋病奈瑟菌的cppB基因发生这些核酸酶切位点中核苷酸序列的改变。
孙[2]（2010）在《1型鸭疫里默氏杆菌OmpA蛋白间接ELISA方法的建立及应用》文中认为鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer）是里默氏杆菌属的代表种,原名鸭疫巴氏杆菌,又称鸭败血症、传染性浆膜炎、鸭疫败血症、新鸭病,鹅的该菌感染被称为鹅流感或渗出性败血症。该病是家鸭、鹅、火鸡和多种鸟类的一种常见的、接触性传染性疾病,呈急、慢性败血症,其基本特征是纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎、脓性肺炎、干酪型输卵管炎、和细菌性非化脓性脑膜炎等。自Riemer1904年最早在鹅群中分离此菌后,到目前为止,该病呈世界范围分布。在我国,郭玉璞等白1982年在北京首次分离出鸭疫里默氏杆菌以来,在全国许多省市相继均有此病发生的报道,给养鸭业造成了巨大的经济损失。鸭疫里默氏杆菌病的早期诊断是控制该病发生和蔓延的有效手段,因此该病的诊断成为了国内外兽医研究的焦点。世界动物卫生组织公布的陆生动物诊断试验和疫苗手册2004年第五版在马立克病毒检验中提到SPF鸭应排除的疾病的种类包括鸭疫里默氏杆菌病。鸭疫里默氏杆菌的外膜蛋白A是一种能够引起机体免疫反应的重要的蛋白。在病原菌侵入机体时,这类蛋白是重要的毒力因子和免疫原。ompA基因存在于所有的RA血清型参考株中,该基因具有较高的保守性,较小的变异并不能导致其表型的改变。OmpA蛋白是一种较强的抗原决定簇,并不存在RA血清型的差异。本试验扩增了1型鸭疫里默氏杆菌黑龙江地方分离株HLG1 ompA基因的核酸序列,利用DNA Star软件与GenBank公布的24个RA ompA基因序列对比,同源性为94.3%-100%,氨基酸序列同源性为94.3%-100%。本研究构建了重组表达质粒pHtb-ompA,测序表明目的基因序列正确。将该质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）进行表达,经SDS-PAGE凝胶电泳分析,在1mM IPTG诱导条件下,目的蛋白获得表达,重组蛋白大小约为55KDa。通过DNAStrar软件及Western Blot分析目的蛋白的抗原性,均表现出与RA阳性血清具有良好的抗原性。利用Ni＋柱在变性条件下对其进行纯化,获得了较高纯度的OmpA重组蛋白。本试验以纯化的OmpA蛋白为包被抗原进行间接ELISA条件的优化,确定最佳的抗原包被浓度为2.09μg/mL、血清稀释度为1：100、二抗稀释度为1：5000、封闭液为5%的脱脂乳。根据133份阴性血清的检测结果,确定了判断标准：当样品OD450值≥0.304时,判断为阳性,当样品OD450值<0.260时,判断为阴性,OD450值在二者之间为可疑需要复检,如仍小于0.304则判定为阴性；重组蛋白抗原不与大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、网状内皮增生病毒、鸭肠炎病毒、鸭肝炎病毒,以及H5N1流感病毒等阳性鸭血清无交义反应,但能对RA阳性血清有效阻断,表明其具有良好的特异性；重组抗原能与1：25600倍稀释的阳性血清反应表明其具有良好的敏感性；与菌体破碎上清蛋白为抗原的间接ELISA方法进行比对,两者的符合率为91.3%。批内、批间重复试验的变异系数均小于15%,表明其具有良好的重复性。应用该诊断方法检测黑龙江地区鸭血清样品,阴性率为80.2%；SPF鸭血清进行鸭疫里默氏杆菌抗体检测,结果显示2周龄SPF鸭血清抗体均为阴性。本研究成功表达了鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白A,应用DNAStar软件及Western Blot方法对该蛋白进行了抗原性分析,并以此建立了特异、敏感、重复性好的间接ELISA方法。为RA流行病学调查和SPF鸭的净化检测提供了一种简单、快速血清学诊断方法。
李雪莹,唐立[3]（2007）在《微生态学方法学的研究进展》文中认为
王强[4]（2006）在《鸡IGF-I基因PCR-SSCP分析及其与肉用性状关系的研究》文中研究说明胰岛素样生长因子-I（IGF-1）是动物体内重要的调节因子之一,因此,研究鸡的IGF-1基因多态性与其重要经济性状间的关系,使得IGF-1基因越来越受到重视,并被作为一个重要的候选基因进行研究。目前,对IGF-1多态性的研究主要是采用PCR-RFLP技术,由于酶切技术可能会存在有些序列不能被限制性内切酶所识别,而导致其检测受到限制。相反,PCR-SSCP技术能够更加灵活的应用于SNPs的检测、筛选。本实验对新扬州鸡（130只）、雪山鸡（100只）和莱航鸡（47只）的IGF-1基因进行了PCR-SSCP多态性检测;并结合测序验证。对设计的引物进行了PCR扩增和电泳检测最优条件的探索,建立和完善了特定位点的PCR-SSCP检测方法。建立统计分析模型,应用GLM过程对新扬州鸡部分生长和屠宰性状进行分析。本论文得到的结论如下:1.本实验确立了检测鸡胰岛素样生长因子I（IGF-I）基因5’-UTR、Exon1和3’-UTR的最佳PCR-SSCP方法。并在新扬州鸡、雪山鸡和莱航鸡共发现了四个多态位点;分别为:23F/R、26F/R、28F/R和29F/R。2.对多态位点进行基因型频率和基因频率以及基因型分布分析,其结果:新扬州鸡23F/R等位基因A频率:0.8038,等位基因B频率:0.1962;28F/R等位基因A频率:0.3846,等位基因B频率:0.6154。雪山鸡等位基因频率为:26F/R A:0.8200,B:0.1800;28F/R A:0.3819,B:0.6181;经基因型分布卡方检验,发现新扬州鸡上的两个多态位点处于哈代-温伯格平衡（P=0.929、P=0.966）,雪山鸡不处于哈代-温伯格平衡（P=0.002、P=0.112）,并发现多态位点存在品种分布差异。3.对存在多态的4个座位PCR扩增产物进行测序,测序结果显示在IGF-I存在插入突变G（23F/R）和同义替换C→G（28F/R）;可能涉及T→C（26F/R）和C→A（29F/R）。4.在早期体重方面,23F/R基因型中,二周龄体重BB型与AB型差异显着（P<0.05）,但AA型与AB型和BB型均不显着（P>0.05）;在十二周龄,BB型对AA型型在龙骨长上,接近差异显着水平（P=0.068）。而28F/R基因型中在十二周龄体
余华,王和[5]（2004）在《细胞壁缺陷结核分枝杆菌IS986序列的检测与分析》文中提出
魏荣旋,王和[6]（2003）在《聚合酶链反应-单链构型多态性检测细胞壁缺陷型淋病奈瑟菌cppB基因变异》文中进行了进一步梳理目的 :检测与分析淋病奈瑟菌 L 型的 cpp B基因 ,探讨细胞壁缺陷对淋病奈瑟菌 cpp B基因的影响。方法 :用青霉素诱导淋病奈瑟菌成为 L 型并获得稳定 L 型纯培养物 ,用 cpp B基因特异性引物以聚合酶链反应 （PCR）检测稳定 L型纯培养物的 cpp B基因和进行单链构型多态性 （SSCP）分析。结果 :淋病奈瑟菌的细菌型及其 L型都具有 cpp B基因扩增产物 ,但 PCR-SSCP分析可见异常泳动 DNA带型 （细菌型有 2条带、L型有 3条带 ）。结论 :细胞壁缺陷淋病奈瑟菌仍然具有 cpp B基因 ,但其碱基序列可以发生改变
二、聚合酶链反应-单链构型多态性检测细胞壁缺陷型淋病奈瑟菌cppB基因变异（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、聚合酶链反应-单链构型多态性检测细胞壁缺陷型淋病奈瑟菌cppB基因变异（论文提纲范文）
（2）1型鸭疫里默氏杆菌OmpA蛋白间接ELISA方法的建立及应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 鸭疫里默氏杆菌病病原学概况 |
| 1.2 鸭疫里默氏杆菌流行病学 |
| 1.3 临床症状及病理变化 |
| 1.4 外膜蛋白研究进展 |
| 1.5 鸭疫里默氏杆菌致病因子与毒力基因 |
| 1.6 鸭疫里默氏杆菌诊断技术 |
| 1.7 鸭疫里默氏杆菌的防治 |
| 1.8 研究的目的和意义 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 血清制备 |
| 3.2 目的基因PCR扩增结果 |
| 3.3 基因的克隆及序列分析 |
| 3.4 重组抗原的制备 |
| 3.5 间接ELISA方法反应条件优化 |
| 3.6 特异性试验结果 |
| 3.7 重复性试验结果 |
| 3.8 保存期试验 |
| 3.9 敏感性试验结果 |
| 3.10 符合性试验结果 |
| 3.11 临床应用结果 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 目的基因的选择 |
| 4.2 重组OMPA蛋白的制备 |
| 4.3 重组OMPA蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立及分析 |
| 第五章 总结 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
| 附录 |
| 参考文献 |
（3）微生态学方法学的研究进展（论文提纲范文）
| 1 色谱技术 |
| 1.1 高效色谱技术 |
| 1.2 气相色谱分析法 |
| 2 电泳技术 |
| 2.1 SDS-PAGE |
| 2.2 PCR-DGGE技术 |
| 2.3 PCR-TGGE技术 |
| 3 分子杂交技术 |
| 3.1核酸探针 |
| 4 聚合酶链反应技术 |
| 4.1 随机引物聚合酶链式反应 |
| 4.2 聚合酶链反应-单链构象多态性银染技术 |
| 4.3 16S rRNA荧光定量PCR |
| 4.4 定量PCR技术 |
| 5 生物芯片技术 |
| 6 流式细胞技术 |
| 7 激光共聚焦显微镜 |
| 8 DNA指纹图法 |
| 9 重组DNA技术 |
（4）鸡IGF-I基因PCR-SSCP分析及其与肉用性状关系的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 引言 |
| 第一章 文献综述 |
| 1. 分子遗传标记 |
| 2. 单链构象基因多态性的检测方法——PCR-SSCP |
| 2.1 PCR-SSCP 方法的建立与发展 |
| 2.2 PCR-SSCP 方法的原理 |
| 2.3 PCR-SSCP 方法的特点 |
| 2.4 PCR-SSCP 技术今后的发展趋势 |
| 2.5 PCR-SSCP 方法在单核苷酸多态性检测的应用 |
| 3 类胰岛素样生长因子-I（IGF-1） |
| 3.1 禽类生长轴 |
| 3.2 类胰岛素样生长因子-I 的起源、主要功能和基本结构 |
| 3.3 IGF-1 在生物体内的作用 |
| 3.4 IGF-1 基因在畜禽上的研究进展 |
| 第二章鸡 IGF-1 基因 PCR-SSCP 分析的研究 |
| 1 实验目的 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 实验器材及试剂 |
| 2.3 禽血红细胞DNA样的提取 |
| 2.4 引物设计与筛选 |
| 2.5 PCR扩增与产物检测 |
| 2.6 PCR产物的SSCP分析 |
| 2.7 PCR产物的测序 |
| 3 统计方法的建立 |
| 3.1 基因频率和基因型频率的计算 |
| 4 结果与分析 |
| 4.1 血液中提取鸡基因组DNA |
| 4.2 IGF-1 基因 PCR 扩增产物结果 |
| 4.3 PCR-SSCP检测结果 |
| 4.4 基因频率和基因型频率的分析 |
| 4.5 IGF-1基因型的Hardy-Weinberg平衡定律检验 |
| 5 讨论与结论 |
| 5.1 基因组DNA的提取 |
| 5.2 影响 PCR 反应的因素 |
| 5.3 影响SSCP分析的因素 |
| 5.4 鸡 IGF-I 基因突变情况 |
| 5.5 基因型分布检验 |
| 5.6 遗传多态性分析 |
| 5.7 对IGF-1突变位点进行蛋白质分析 |
| 第三章 新扬州鸡IGF-1基因的多态性位点对其生长、屠宰测定指标相关性分析 |
| 1 实验目的 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 IGF-1基因多态性分析 |
| 2.3 主要仪器 |
| 2.4 生长、屠宰指标 |
| 2.5 屠体指标测定 |
| 2.6 肉质测定 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 基因型与新扬州鸡早期发育分析 |
| 3.2 基因型与屠体各组成部分的关系 |
| 4 讨论与小结 |
| 4.1 突变位点基因型与新扬州鸡早期体重和龙骨、胫骨发育分析 |
| 4.2 突变位点基因型与新扬州鸡屠宰指标分析 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 IGF-1基因内含子1多态及序列分析初探 |
| 1 研究目的及意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要试剂及仪器 |
| 2.2 实验动物 |
| 2.3 基因组DNA的提取 |
| 2.4 引物设计 |
| 2.5 PCR反应程序的建立 |
| 2.6 PCR产物的初步鉴定及测序 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 PCR产物检测与电泳结果 |
| 3.2 测序结果与分析 |
| 4 讨论与结论 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
（6）聚合酶链反应-单链构型多态性检测细胞壁缺陷型淋病奈瑟菌cppB基因变异（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 菌种 |
| 1.2 培养基 |
| 1.3 诱导剂 |
| 1.4 PCR检测试剂 |
| 1.5 L型诱导 |
| 1.6 细菌型培养 |
| 1.7 聚合酶链反应 |
| 1.8 单链构型多态性(SSCP)分析[6] |
| 2 结果 |
| 2.1 淋病奈瑟菌L型 |
| 2.2 cppB基因的PCR |
| 2.3 cppB基因的PCR-SSCP |
| 3 讨论 |
四、聚合酶链反应-单链构型多态性检测细胞壁缺陷型淋病奈瑟菌cppB基因变异（论文参考文献）
- [1]细胞壁缺陷型淋病奈瑟菌cppB基因酶切图谱分析[J]. 魏荣旋,赵庆,王和. 中国实验诊断学, 2010(09)
- [2]1型鸭疫里默氏杆菌OmpA蛋白间接ELISA方法的建立及应用[D]. 孙. 黑龙江八一农垦大学, 2010(10)
- [3]微生态学方法学的研究进展[J]. 李雪莹,唐立. 中国微生态学杂志, 2007(05)
- [4]鸡IGF-I基因PCR-SSCP分析及其与肉用性状关系的研究[D]. 王强. 扬州大学, 2006(04)
- [5]细胞壁缺陷结核分枝杆菌IS986序列的检测与分析[J]. 余华,王和. 中华结核和呼吸杂志, 2004(05)
- [6]聚合酶链反应-单链构型多态性检测细胞壁缺陷型淋病奈瑟菌cppB基因变异[J]. 魏荣旋,王和. 中国微生态学杂志, 2003(06)