p21 waf1/cip1基因在人骨肉瘤中的表达

一、人骨肉瘤中p21 waf1/cip1基因的表达（论文文献综述）

朱振华^[1]（2020）在《KIF20A通过PI3K-AKT信号通路促进纤维肉瘤发生发展的研究》文中提出软组织肉瘤是一组少见的恶性肿瘤,约占成人恶性肿瘤的1%,儿童恶性肿瘤的10%。软组织肉瘤约有50种不同亚型,它们的临床、病理以及分子学特征均有所不同。目前,软组织肉瘤的治疗仍以手术治疗与化疗为主。但存在术后复发转移、预后差以及化疗效果差等问题。随着分子病理学研究的深入,多个基因被证实与软组织肉瘤的进展相关,但是目前临床上还没有任何一种生物标志物被用于指导预后。加权共表达网络分析（Weighted Gene Co-expression Network Analysis,WGCNA）通过动态剪切树的方法,将表达相似的基因归类于同一个模块,通过临床性状和基因模块间的关联性分析,探究模块与临床性状的相关性,并通过对模块进行网络分析以及功能分析,解释基因模块的功能,筛选出具有生物学意义的核心基因。WGCNA已经在多种实体瘤中用于发现与临床性状或预后相关的基因模块和核心基因,并在实验和临床中得到较好的验证。但是,关于WGCNA在软组织肉瘤中应用的报道较为少见。驱动蛋白家族成员20A（Kinesin Family Member 20A,KIF20A）在细胞有丝分裂、细胞迁移和胞内转运中发挥作用。已有大量研究证明,KIF20A在多种肿瘤中异常高表达,并显示出较差的预后。KIF20A与细胞周期、凋亡等功能密切相关,在脑胶质瘤中,KIF20A高表达,下调KIF20A后,PI3K-AKT信号通路被抑制,引起细胞周期阻滞、凋亡。KIF20A抗体在晚期胰腺癌中展现出较好的疗效,目前已经进入临床Ⅱ期研究阶段。以往的研究证明,KIF20A的表达与肿瘤的发生发展及预后密切相关,但KIF20A在软组织肉瘤中的表达及作用仍不清楚。基于以上背景,我们采用WGCNA的方法筛选出与软组织肉瘤发生发展密切相关的核心基因KIF20A。纤维肉瘤是软组织肉瘤中最常见的一个组织学类型。在体外实验中,以KIF20A敲低的纤维肉瘤细胞作为研究对象,通过转录组测序检测KIF20A对纤维肉瘤细胞基因表达的影响;通过CCK-8、流式细胞术、Western blot及克隆形成实验检测KIF20A对细胞增殖的影响;通过流式细胞术和Western blot检测KIF20A对细胞凋亡的影响;通过划痕、Transwell迁移和侵袭实验检测KIF20A对细胞迁移侵袭能力的影响;通过Western blot对相关的分子机制进行研究;在体内实验中,用KIF20A敲低的纤维肉瘤细胞构建荷瘤鼠,通过记录肿瘤大小及重量检测KIF20A对肿瘤生长的影响,通过Ki67免疫组织化学染色检测KIF20A对增殖的影响,并通过小动物成像和HE染色检测KIF20A对肿瘤转移的影响。本研究的研究内容包括以下几个方面:一、软组织肉瘤的生物信息学分析为明确与软组织肉瘤发生发展相关基因,我们基于基因表达数据,利用WGCNA的方法,构建了基因共表达网络。通过网络结构和功能分析,我们筛选出处于网络中心位置并且与预后高度相关的四个核心基因（RRM2、BUB1B、CENPF、KIF20A）。二、核心基因在纤维肉瘤中的表达情况分析为明确核心基因在纤维肉瘤中的表达,我们通过RT-qPCR及Western blot对人纤维肉瘤细胞系HT-1080中核心基因的表达情况进行检测,发现KIF20A在基因水平和蛋白水平均显着高于对照细胞系。在接下来的实验中,我们以KIF20A为目标基因,对其在纤维肉瘤的作用及机制进行深入探究。三、KIF20A对人纤维肉瘤细胞基因表达的影响为探究KIF20A对人纤维肉瘤细胞基因表达的影响,我们构建了低表达KIF20A的HT-1080细胞系并对其进行转录组测序。结果发现,KIF20A基因敲低后,共有792个基因的表达发生显着变化,细胞程序性死亡、凋亡过程、对有机物反应（化疗药物等）、细胞核分裂等生物学过程及PI3K-AKT、mTOR、p53、MAPK、细胞周期等信号通路受到影响。这些结果提示,KIF20A可能通过PI3K-AKT、mTOR、p53、MAPK等信号通路影响人纤维肉瘤的发生发展。四、KIF20A在人纤维肉瘤中的作用及机制研究1、我们以KIF20A敲低的HT-1080细胞系及对照细胞系为研究对象,检测其细胞周期、细胞活力、克隆形成能力的变化。结果显示KIF20A下调后,细胞周期阻滞在G2/M期,p21Waf/Cip1表达上调,Cyclin A2、Cyclin E1表达下调,细胞活力明显下降,克隆形成能力明显降低,提示下调KIF20A可抑制HT-1080细胞的增殖。2、在凋亡实验中,KIF20A敲低后,凋亡明显增加,Bcl-2表达下调,Bax、Cleaved Caspase 9、Cleaved Caspase 3表达上调,提示下调KIF20A可促进HT-1080细胞的凋亡。3、在细胞迁移和侵袭实验中,发现KIF20A敲低后迁移及侵袭能力显着降低,提示下调KIF20A可抑制HT-1080细胞的迁移与侵袭。4、我们以KIF20A敲低的HT-1080细胞系及对照细胞系构建荷瘤鼠,测量其肿瘤大小及转移情况,结果显示KIF20A敲低后肿瘤显着减小,肿瘤组织Ki67的表达降低,肝转移发生率降低,提示下调KIF20A可抑制纤维肉瘤的生长和转移。5、为探究下调KIF20A抑制人纤维肉瘤发生发展的机制,我们检测了PI3K-AKT信号通路、NF-κB信号通路相关蛋白的变化,发现下调KIF20A后,PI3K-AKT信号通路中的p-PI3KTyr453及p-AKTSer473表达降低;NF-κB信号通路中的p-IKKα/β、p-p65表达降低。这些结果提示KIF20A敲低后,PI3K-AKT信号通路被抑制,其下游NF-κB信号通路也受到抑制。五、Kif20a在小鼠纤维肉瘤中的作用研究为明确Kif20a在小鼠纤维肉瘤中的作用,我们首先检测了其在小鼠纤维肉瘤细胞系WEHI164、MCA101、MCA207中的表达情况,发现Kif20a高表达。通过转染成功构建出Kif20a敲低的小鼠纤维肉瘤细胞系,并以此为研究对象,检测其细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移的变化,并用Kif20a敲低的小鼠纤维肉瘤细胞系构建荷瘤鼠,观察其肿瘤大小及肿瘤转移情况,结果显示,Kif20a下调后,小鼠纤维肉瘤细胞的活力降低,细胞周期阻滞在G2/M期,克隆形成能力明显降低,凋亡增加,侵袭、迁移能力降低,肿瘤减小,肿瘤组织Ki67的表达降低,提示在小鼠纤维肉瘤中,Kif20a下调仍能抑制细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,抑制肿瘤生长。综上所述,本研究显示KIF20A是软组织肉瘤生物调控网络的核心基因,KIF20A在软组织肉瘤中高表达与软组织肉瘤的预后密切相关。在纤维肉瘤细胞系中,转录组测序发现下调KIF20A,多种与生物学进程及信号通路相关的基因发生变化。进一步研究发现,下调KIF20A后,PI3K-AKT活性受到抑制,其下游NF-κB、细胞周期、凋亡等信号通路也发生改变,从而抑制了肿瘤的增殖、迁移、侵袭及转移,促进了肿瘤的凋亡。本研究明确了KIF20A在纤维肉瘤中的表达情况,探讨了其在纤维肉瘤中的作用及相关机制,提示KIF20A是治疗纤维肉瘤潜在的分子标志物和治疗靶点,为纤维肉瘤的治疗提供新的思路。

刘川^[2]（2019）在《Hsp27通过p21在皮肤角质形成细胞光老化中调控细胞凋亡的机制研究》文中研究表明背景:在所有影响皮肤的环境因素中,日光中的紫外线（ultraviolet,UV）无疑是重要的一项。人们几乎每天都在接触日光,因此也更容易忽视其对皮肤潜在的危害。长期反复紫外线暴露会造成皮肤慢性光损伤,也就是我们所说的皮肤光老化。课题组前期以青、中、老年人曝光部位及非曝光部位的皮肤为研究对象,从角质形成细胞中提取蛋白进行2-DE分离,采用MALDI-TOF质谱分析及数据库查询,寻找差异表达蛋白,发现同一年龄组中热休克蛋白质（Hsp）27及p21WAF1/CIP1（p21）均在曝光组中高表达,提示Hsp27和p21可能与皮肤光老化相关,但其确切功能有待进一步研究。目的:本研究在中波紫外线（ultraviolet B,UVB）诱导人皮肤角质形成细胞（HaCaT）光老化模型的基础上,研究Hsp27对光老化HaCaT细胞凋亡的作用,以及Hsp27能否调控p21影响细胞凋亡,进一步探明光老化机制,为预防、缓解光老化及光线性皮肤病提供新思路。方法:本研究以30mJ/cm2UVB辐照HaCaT细胞,建立光老化模型,通过干扰Hsp27基因的表达来评估其下游效应分子的表达以及细胞凋亡、增殖情况。采用CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞术分析细胞周期、凋亡,衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色法鉴定各组阳性细胞百分比,qRT-PCR技术检测mRNA表达情况,Western-blot技术检测蛋白表达情况,细胞免疫荧光检测蛋白胞内定位。结果:1、30mJ/cm2UVB辐照导致HaCaT细胞增殖活性下降,伴有明显的G2期周期阻滞,同时SA-β-gal染色阳性率也明显高于对照组,老化相关通路标志蛋白p53、p16表达明显升高,虽p21表达下降,但UVB辐照可引起p21发生明显的核移位。2、在光老化HaCaT中,干扰Hsp27基因降低细胞增殖活性,增加细胞凋亡的发生率。3、Hsp27的亚细胞定位主要定位于细胞质中,而p21在UVB辐照后出现了明显的核移位,Hsp27和p21之间并未观察到共定位现象。4、干扰Hsp27基因后并不影响p21蛋白及mRNA的表达,但Hsp27基因的抑制导致p21蛋白即使在UVB照射后72 h仍持续存在于细胞核中,而在空载对照组（shNC）,p21蛋白在UVB辐照后72 h出核至胞质。5、干扰Hsp27基因表达后,可抑制Akt磷酸化,阻止p21蛋白从胞核转位到胞质。6、干扰Hsp27基因表达可增加p53蛋白的表达,增加Bax:Bcl-2比率并促进caspase-3的活化。结论:30mJ/cm2的UVB辐照可成功构建光老化HaCaT细胞模型,其老化机制可能是通过调控p21核定位及p16通路诱导细胞衰老的进程。在光老化HaCaT细胞中,Hsp27的光保护作用可通过Akt-p21通路调节p21的亚细胞定位,进而调控细胞凋亡的发生;同时通过抑制p53/Bax/Bcl-2线粒体凋亡途径起到光保护作用。以上结果提示Hsp27可能成为光老化或光线性皮肤病新的治疗靶点。

张锡宇^[3]（2012）在《甲基莲心碱诱导人成骨肉瘤细胞G1期停滞的分子机制研究》文中提出成骨肉瘤发生率相对较低,但在原发性恶性骨肿瘤中占首位。该病在青少年中发病率高,且死亡率和致残率高,严重影响青少年健康。成骨肉瘤对放射治疗不敏感,目前采用大剂量化疗结合手术治疗的方式。然而化疗药物易产生耐药性且有毒副作用,因此从天然化合物中筛选低毒、高效的抗癌药物用于临床治疗具有重要意义。苄基异喹啉类生物碱（benzylisoquinoline alkaloid, BA）是自然界中广泛存在的一类生物碱,具有抗肿瘤、抗炎、抗病毒及抗血小板凝集、抗心律失常和抗高血压等心血管疾病的多种药理活性。研究表明多种BA对不同肿瘤细胞株均显示了较强的细胞毒作用。其抑制肿瘤细胞增殖的机制主要是诱导细胞周期停滞和细胞凋亡。甲基莲心碱（Neferine）属于双苄基异喹啉类生物碱,是莲子心（睡莲科植物莲（Nelumbo nucifera Gaertn）成熟种子的绿色胚芽）中一种主要的生物碱成分。已有的研究表明甲基莲心碱具有降血压、抗氧自由基、抗心律失常、抗血小板凝集等多种药理作用；并且甲基莲心碱还是一种化疗增敏剂,能逆转肿瘤细胞的多药耐药性。化疗药物抑制肿瘤细胞生长的普遍机制在于抑制其细胞周期进程和／或促进细胞凋亡。本课题组的前期研究发现,甲基莲心碱能明显抑制人类成骨肉瘤细胞、乳腺癌细胞及宫颈癌细胞的生长。甲基莲心碱可诱导成骨肉瘤细胞G1期细胞周期停滞,cyclinE表达水平降低、p21蛋白水平升高,但并不引起细胞DNA损伤和细胞凋亡。然而,由于对甲基莲心碱抑制肿瘤细胞生长的分子生物学机制尚未见报道,这在一定程度上限制了其在临床医学中的应用,因此深入探讨甲基莲心碱抑制人成骨肉瘤细胞生长的可能的作用机制就有重要的意义。为进一步明确甲基莲心碱诱导成骨肉瘤细胞发生G1期停滞的分子机制,我们进行了以下的研究：●甲基莲心碱诱导人成骨肉瘤细胞细胞周期G1期停滞依赖于p21蛋白的累积由于前期研究结果提示甲基莲心碱诱导成骨肉瘤细胞G1期停滞、p21蛋白累积,因此有必要验证p21蛋白累积是否是甲基莲心碱引起成骨肉瘤细胞G1期阻滞的直接原因。1.我们采用siRNA干扰p21基因表达的方法,检测甲基莲心碱处理后U20S细胞内p21表达情况和细胞增殖能力。结果发现：与对照细胞相比,低表达p21基因的细胞经甲基莲心碱处理后,p21蛋白的累积明显减弱,并部分抵消甲基莲心碱引起的S期细胞比例降低的效应,这表明甲基莲心碱诱导人成骨肉瘤细胞细胞周期G1期停滞依赖于p21蛋白的累积。2.进一步明确甲基莲心碱诱导人成骨肉瘤细胞的p21蛋白水平上调是否为转录水平调控。（1）实时定量PCR方法检测甲基莲心碱处理前后U20S细胞内p21mRNA水平,结果提示,不同浓度甲基莲心碱（5,10,20μ M）处理U20S细胞,与对照细胞相比,p21mRNA水平并没有显着的变化；提示甲基莲心碱不是通过转录水平激活p21的表达。（2）为进一步明确甲基莲心碱激活p21的机制,我们用CHX抑制新蛋白质合成,检测甲基莲心碱处理前后p21蛋白质半衰期的变化,结果表明与未处理细胞相比,甲基莲心碱可明显延长p21蛋白半衰期,蛋白降解延迟。初步说明甲基莲心碱从翻译后水平调控p21蛋白的表达水平。●甲基莲心碱诱导p21蛋白的累积对相关信号通路的影响多项研究发现MAPK和AKT信号通路参与调控p21蛋白累积及细胞周期G1期停滞过程。许多化疗药物抑制肿瘤细胞生长的过程中,也伴随着MAPK、AKT等信号通路的激活。为了进一步明确甲基莲心碱诱导p21蛋白累积和细胞周期G1期停滞的分子机制,以及涉及到的信号通路,我们采用western blotting实验检测了ERK、AKT、p38MAPK和JNK1/2四种分子的磷酸化水平,并用抑制激酶活性、RNAi干扰等方法探讨了JNK1/2和p38MAPK在甲基莲心碱诱导p21蛋白累积过程中的作用。1.10μM甲基莲心碱能够显着激活P38MAPK和JNK1/2通路,而对ERK、AKT通路则没有明显影响。实验结果提示P38MAPK、JNK1/2可能参与甲基莲心碱诱导的p21蛋白的累积和细胞周期G1期阻滞,而ERK、AKT不参与调控该过程。2.JNK1/2对甲基莲心碱诱导p21累积的影响：（1）为了明确JNK1/2信号通路是否参与甲基莲心碱诱导p21的累积,采用JNK1/2活性抑制剂SP600125特异性抑制U20S细胞的JNK1/2激酶活性后,检测细胞内p21蛋白的表达水平,结果显示,阻断JNK并没有引起p21蛋白水平的降低,p21蛋白反而明显增加；初步说明JNK并不参与甲基莲心碱诱导p21的累积。（2）为了进一步明确JNK信号通路对甲基莲心碱诱导p21累积的影响,利用siRNA干扰U20S细胞JNK1/2基因表达,发现抑制JNK1/2基因可上调细胞内p21蛋白水平,并且不能抑制甲基莲心碱诱导的p21累积；提示在U20S细胞中JNK信号通路有下调p21蛋白水平的作用。3. p38MAPK信号通路对甲基莲心碱诱导p21累积的影响：（1）为阐明p38MAPK信号通路是否参与甲基莲心碱诱导p21表达的增加,利用p38MAPK活性抑制剂SB203580特异性抑制U20S细胞的p38MAPK激酶活性后,检测p21的表达水平。结果显示：与对照细胞相比,SB203580明显抑制了甲基莲心碱诱导p21蛋白水平的增加。这提示甲基莲心碱引起的p21蛋白累积依赖于p38MAPK信号通路的激活。（2）为进一步验证p38MAPK信号通路在甲基莲心碱引起的p21蛋白累积过程中的作用,利用RNAi技术抑制U20S细胞p38α、β基因表达水平后,检测p21蛋白表达水平。结果表明甲基莲心碱诱导的p21蛋白的累积效应在p38干扰的细胞中明显减弱；BrdU掺入实验证实低表达p38MAPK基因也逆转了甲基莲心碱引起细胞增殖能力的降低。以上实验结果说明甲基莲心碱诱导p21蛋白累积依赖于p38MAPK信号通路的激活。4.明确p38MAPK介导甲基莲心碱诱导p21蛋白累积的分子机制：（1）分析p38MAPK对p21蛋白质半衰期的影响：为研究P38MAPK对甲基莲心碱诱导p21累积的具体机制,采用CHX抑制新蛋白质合成,检测阻断p38MAPK通路后p21蛋白的半衰期。分析实验结果发现,甲基莲心碱明显延长U20S细胞p21蛋白的稳定性,而当用SB203580抑制p38MAPK激酶活性后,SB203580可抑制由甲基莲心碱引起的p21蛋白半衰期的延长。这说明甲基莲心碱诱导的p21蛋白半衰期的延长依赖于P38MAPK信号通路的激活。（2）检测p38MAPK对p-p21Ser130的影响：p38MAPK主要通过磷酸化下游靶分子而发挥作用,为了进一步明确p38MAPK介导p21蛋白稳定性增加的机制,我们选择文献报道的可能与p38MAPK有关的p21蛋白的磷酸化位点进行检测。结果提示甲基莲心碱处理U20S细胞可诱导p21蛋白水平的累积,伴随有p21Ser130位点磷酸化程度升高；当用SB203580抑制p38激酶活性或利用siRNA干扰p38基因表达后,甲基莲心碱不再能够引起细胞内p21蛋白累积,并且p21Ser130位点磷酸化程度降低,实验结果说明激活的p38MAPK信号通路通过磷酸化p21Ser130位点并增加p21蛋白的稳定性,进而介导了甲基莲心碱诱导的细胞周期G1期停滞。本研究的实验结果表明,甲基莲心碱对成骨肉瘤细胞的生长抑制机制是通过诱导p21蛋白的累积而实现的,而p21蛋白的累积并不是发生在转录水平；进一步研究表明,甲基莲心碱激活p38MAPK信号通路,活化的p38MAPK信号通路通过磷酸化p-p21Ser130而延长p21蛋白半衰期,导致p21蛋白在细胞内累积进而引起细胞周期G1期停滞,抑制成骨肉瘤细胞的生长。

高锋利^[4]（2011）在《人类肝细胞性肝癌RUNX3、p21WAF1/CIP1、CyclinD1基因表达的临床意义及其相关性研究》文中指出目的探讨RUNX3、p21WAF1/CIP1、cyclinD1蛋白在人类肝细胞性肝癌（HCC）与其癌旁组织中的表达差异;RUNX3、p21WAF1/CIP1、cyclinD1蛋白在HCC组织中表达的相关性;RUNX3、p21WAF1/CIP1、cyclinD1蛋白表达与临床病理相关因素之间的关系。方法收集临床43例HCC患者手术切除的癌组织及其癌旁组织标本,用免疫印迹（Western Blot）技术检测癌及癌旁组织中基因RUNX3、p21WAF1/CIP1、cyclinD1蛋白的表达,并收集相关临床病理资料,使用SPSS16.0统计软件对相关数据进行统计学分析。结果RUNX3蛋白在肝癌组织标本中表达明显低于在癌旁组织中的表达,两组比较差异有统计学意义（P<0.05）;p21WAF1/CIP1蛋白在肝癌组织标本中的表达明显低于在癌旁组织中的表达,两组比较差异有统计学意义（P<0.05）;CyclinD1蛋白在肝癌组织中表达高于癌旁组织,两者比较有显着性差异（P<0.001）。RUNX3蛋白相对表达量与性别、年龄、HBsAg、AFP、肿瘤大小、静脉癌栓无明显关系（P>0.05）,与TNM分期及组织分化程度有关（P<0.05）;p21WAF1/CIP1蛋白相对表达量与性别、年龄、HBsAg、AFP、肿瘤大小、静脉癌栓、TNM分期无明显关系（P>0.05）,与组织分化程度有关（P<0.05）;cyclinD1蛋白相对表达量与性别、年龄、HBsAg、AFP、肿瘤大小、静脉癌栓无明显关系（P>0.05）,与TNM分期及组织分化程度有关（P<0.05）。肝癌组织中RUNX3蛋白表达与p21WAF1/CIP1蛋白表达成正相关（r=0.696, P<0.001）;RUNX3蛋白表达与cyclinD1蛋白表达成负相关性（r=-0.435, P<0.05）;p21WAF1/CIP1蛋白表达与cyclinD1蛋白表达成负相关性（r=-0.328, P<0.05）。结论RUNX3和p21WAF1/CIP1基因在HCC组织中蛋白的表达低于癌旁组织、cyclinD1基因在HCC组织中蛋白的表达高于癌旁组织,三者的表达异常与HCC发生有关;RUNX3与p21WAF1/CIP1蛋白表达正相关,与cyclinD1蛋白表达负相关,p21WAF1/CIP1与cyclinD1蛋白表达呈负相关, RUNX3与p21WAF1/CIP1、cyclinD1基因表达关系密切,且与HCC发生、发展有关;RUNX3、cyclinD1蛋白表达与HCC的病理分化及临床分期有关,p21WAF1/CIP1蛋白表达与HCC的病理分化有关,联合检测RUNX3、p21WAF1/CIP1和cyclinD1蛋白的表达可能会对判断HCC病理分级和临床分期有一定参考价值。

谭晓虹^[5]（2010）在《P21WAF1/CIP1对肝癌细胞SMMC-7721生物学行为的影响及其与POLD1基因关系初探》文中研究指明肝细胞性肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC,以下简称肝癌）是全世界最常见的恶性肿瘤之一,有着较高的发病率和死亡率。我国是世界上肝癌的高发地区之一,每年新发HCC病例占全世界新发病例数的比例高达42.5%,严重威胁着人民的身体健康。手术切除和肝脏移植是目前治疗肝癌较为有效的方法,但由于肝癌具有恶性程度高、发展迅速、容易复发和转移等特点,肝癌患者中仅有一部分人适合外科手术治疗。绝大部分肝癌患者只能依赖于放疗、化疗及其它的一些姑息疗法。因此深入研究肝癌的病因及发病机理,对于寻找有效的肝癌化学预防及治疗方法无疑具有十分积极的意义。肝癌的发生和发展是一个多因素、多步骤、多基因作用的复杂过程,研究表明,p21（p21WAF1/CIP1）可能通过不同的途径参与了肝癌的发生和发展。p21属于细胞周期抑制因子（CKIs）中的Cip/Kip家族,可以通过抑制细胞周期蛋白/细胞周期依赖性激酶（cyclin/CDK）复合物活性,使细胞周期进程受阻;而且还可以通过抑制细胞增殖核抗原（PCNA）与DNA聚合酶δ（polδ）结合,从而抑制DNA合成。现已确定人的p125亚基是由POLD1基因编码的, POLD1表达受到细胞周期的调控,但其机制尚未明了。癌基因的活化、抑癌基因的失活或突变以及激素调节、信号转导和转录调控等的失调均可作用于细胞周期调控系统而激活细胞进行不正常的DNA复制,最终出现细胞的异常增殖导致肿瘤的发生。鉴于p21在细胞周期调控和DNA复制中所起的重要作用,本研究通过真核表达载体使p21高表达和慢病毒载体靶向沉默p21表达,研究p21表达量变化对肝癌细胞SMMC-7721生物学行为的影响,双向验证了p21对细胞周期进程的抑制作用,在肝癌侵袭转移中可能具有的作用,并初步探讨了p21对POLD1基因表达的影响,从而为下一步深入研究肝癌细胞中p21对POLD1基因的表达调控通路打下了坚实的基础。目的:通过真核表达载体使p21高表达和慢病毒载体靶向沉默p21表达对肝癌细胞SMMC-7721生物学行为的影响,验证p21对细胞周期进程的影响,在肝癌侵袭转移中是否发挥作用,并初步探讨在肝癌细胞中p21对POLD1基因表达的影响。方法:1.瞬时转染:将表达p21 cDNA的真核表达载体pXJ41-p21及空载体pXJ41-neo转染入SMMC-7721细胞;将p21小干扰RNA片段p21-siRNA、阴性对照片段NC转染入SMMC-7721细胞。2.稳定转染:SMMC-7721细胞瞬时转染pXJ41-p21及空载体pXJ41-neo后,经G418筛选,获得稳定细胞系7721-p21、7721-pXJ;用包装有p21小干扰RNA片段p21-siRNA及阴性对照片段NC的慢病毒载体感染SMMC-7721细胞,经有限稀释法获得稳定细胞系7721-p21RNAi、7721-NC。3. RT-PCR、Western-blot检测瞬时转染及稳定转染后p21、POLD1的mRNA和蛋白表达水平。4.通过生长曲线测定,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,克隆形成实验,侵袭和迁移能力测定,了解SMMC-7721细胞在p21表达水平改变后生物学行为的变化。结果:1.瞬时转染p21 48h后发现,p21 mRNA表达水平升高, POLD1 mRNA表达水平降低,并且SMMC-7721细胞生长速率下降,G0/G1期占细胞周期比例升高,S期比例下降（P<0.05）。对高表达p21的稳定细胞株研究发现,随着p21 mRNA及蛋白表达水平升高, POLD1 mRNA及蛋白表达水平随之降低;细胞生长受抑制,G0/G1期比例升高,细胞凋亡比例及克隆形成数减少,迁移及侵袭能力减弱。2.瞬时转染p21小干扰RNA片段48h后发现,p21 mRNA表达水平降低, POLD1 mRNA表达水平升高,并且SMMC-7721细胞生长速率升高,G0/G1期占细胞周期比例下降,S期比例升高（P<0.05）。对p21低表达的细胞株研究发现,随着p21 mRNA及蛋白表达水平下降, POLD1 mRNA及蛋白表达水平随之增强;细胞生长速度加快,G0/G1期比例下降,S期比例升高,细胞凋亡比例及克隆形成数增多,迁移及侵袭能力增强。结论:p21可以抑制SMMC-7721细胞的细胞周期进程,对抗凋亡的发生,有可能参与了肝癌的侵袭转移的发生。POLD1基因的表达水平与p21呈负相关,p21可能参与了POLD1基因的调控,并且这种作用有可能是p21对细胞增殖抑制及细胞恶性表型变化的调控途径之一。

章恒^[6]（2010）在《宁夏汉族人群p21WAF1/CIP1基因多态性与食管癌的关联研究》文中指出目的食管癌（Esophageal Cancer, EC）是我国最常见的消化道肿瘤之一,死亡率位居恶性肿瘤的第四位。宁夏地区是我国食管癌高发地区之一,该地区食管癌的高发符合典型的多基因遗传易感性与环境相互作用的发病模式。超过50%的恶性肿瘤与p53基因突变有关,p21WAF1/ CIP1基因是p53基因最重要的下游基因之一。本课题选择p21WAF1/CIP1基因中既往报道比较集中的编码区31位密码子（codon 31）进行研究,旨在发现codon 31多态性和吸烟、饮酒等环境因素与宁夏汉族人群食管癌易感性的关系,为阐明宁夏地区人群食管癌发病的遗传学机制提供部分理论依据,为实现宁夏地区汉族食管癌易感人群的早期预防、早期诊断、早期诊治提供一定的参考。方法（1）实验方法:收集宁夏医科大学附属医院80例经病理确诊,未经放、化疗的食管癌住院患者及200例健康献血者外周血标本,EDTA抗凝冰冻贮存、树脂型DNA提取试剂盒提取DNA、PCR扩增特异性片段、PCR产物直接测序。（2）统计学方法:以χ2检验分析单个SNP基因型和等位基因频率在病例组和对照组的分布;应用非条件Logistic回归模型分析p21WAF1/CIP基因SNPs与环境因素对食管癌发生危险程度的影响,调整传统食管癌危险因素如:年龄、性别、吸烟、饮酒等情况;计算OR值和95%置信区间。结果（1）食管癌组与对照组间年龄和性别无显着性差异（P>0.05）;食管癌组80例患者中吸烟和饮酒者分别为44 （55.00%）和23（28.75%）,高于对照组200例健康人的53（26.5%）和29 （14.50%）,两组间有显着性差异（P<0.05）。（2）吸烟和饮酒可以增加食管癌患病的风险（OR = 3.222,95% CI = 1.860-5.580,P <0.05;OR = 2.215, 95% CI = 1.139–5.829,P<0.05）。（3） Ser/Ser纯合体基因型在对照组与食管癌组中的表达有显着性差异（35.00 vs. 21.00%,P<0.05）,而且Ser/Ser纯合体基因型可以显着增加食管癌的患病风险（OR = 2.170, 95%CI = 1.180- 3.992, P <0.05）。结论（1） codon31基因型为纯合AGC是宁夏汉族食管癌发生的危险因素。（2）吸烟、饮酒是宁夏汉族食管癌发生的可能危险因素。

秦国斌,王义生,李月白,殷力,鲍剑^[7]（2009）在《人骨肉瘤中p53、p21WAF1/CIP1和增殖细胞核抗原的表达及相互关系》文中研究说明目的探讨细胞周期相关基因p21WAF1/CIP1、p53和增殖细胞核抗原（PCNA）在人骨肉瘤中的表达和相互关系。方法应用LSAB法,对40例骨肉瘤、20例骨软骨瘤患者的病变组织和20例正常人骨组织分别以p53、p21WAF1/CIP1、PCNA蛋白的单克隆抗体作免疫组织化学检测。结果骨肉瘤组织中p53、p21WAF1/CIP1、PCNA蛋白的阳性反应率和阳性反应强度均明显高于骨软骨瘤和正常骨组织,其差异有统计学意义（P<0.05）。p53标记指数与p21WAF1/CIP1标记标数以及p21WAF1/CIP1与PCNA标记指数间呈正相关（t值分别为2.93和4.20,P<0.01）。结论骨肉瘤组织中有p53、p21WAF1/CIP1和PCNA的过表达,其表达的强度与肿瘤的恶性程度和预后相关。

陈煜,陈伟高,余智华^[8]（2009）在《骨肉瘤p21、p16基因表达及相关性初步研究》文中认为目的检测p21、p16基因在骨肉瘤中的表达,并探讨其相关性。方法选择骨肉瘤标本37例,用免疫组化SP法检测标本中p21、p16基因的表达情况,并分析其相关性。结果37例骨肉瘤中p21、p16基因的阳性表达率分别为64.9%、40.5%,两者的阳性表达率和阳性程度在骨肉瘤中均较高;骨肉瘤中p21、p16基因表达呈正相关（r=0.492 4,P<0.05）。结论骨肉瘤组织中p21、p16基因异常表达,两者同时缺失可能是影响瘤细胞恶性行为的重要因素之一。

黎承军,郭开今,吴苏稼^[9]（2008）在《骨肉瘤预后相关分子生物学指标研究进展》文中提出骨肉瘤是一种临床常见的成骨性恶性肿瘤,约占所有骨肿瘤的20%。其恶性程度高,进展快,好发于青少年,预后较差。近来研究发现,骨肉瘤的预后与细胞凋亡失衡有关。

赵伟,孙洁,徐惠绵,李建华^[10]（2008）在《骨肉瘤中P53及P21WAF1表达的生物学意义》文中研究指明应用免疫组化SP法观察34例骨肉瘤中P53及P21WAF1的表达情况,探讨P53及P21WAF1表达与骨肉瘸临床病理学特征之间的关系,分析P53和P21WAF1在骨肉瘤中的作用及其相关性。结果可见,在34例骨肉瘤中,18例表达P53,阳性表达率52.94%;12例表达P21WAF1,阳性表达率35.29%。P53阳性表达与性别、肿瘤分化及是否转移复发有关（P<0.05）,P21WAF1与肿瘤分化有关（P<0.01）。P53在中、低分化骨肉瘤中阳性表达率较高,而在高分化骨肉瘤中阳性表达率较低（70%、28.57%）;P21WAF1在高分化骨肉瘤中阳性表达率较高,而在中、低分化骨肉瘤阳性表达率较低（85.71%、0%）。P53及P21WAF1表达呈负相关性（r=-0.537,P=0.001）。在骨肉瘤组织中P53表达上调及P21WAF1表达下调与骨肉瘤的恶性进展有关。

二、人骨肉瘤中p21 waf1/cip1基因的表达（论文开题报告）

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、人骨肉瘤中p21 waf1/cip1基因的表达（论文提纲范文）

（1）KIF20A通过PI3K-AKT信号通路促进纤维肉瘤发生发展的研究（论文提纲范文）

（2）Hsp27通过p21在皮肤角质形成细胞光老化中调控细胞凋亡的机制研究（论文提纲范文）

（3）甲基莲心碱诱导人成骨肉瘤细胞G1期停滞的分子机制研究（论文提纲范文）

（4）人类肝细胞性肝癌RUNX3、p21WAF1/CIP1、CyclinD1基因表达的临床意义及其相关性研究（论文提纲范文）

（5）P21WAF1/CIP1对肝癌细胞SMMC-7721生物学行为的影响及其与POLD1基因关系初探（论文提纲范文）

（6）宁夏汉族人群p21WAF1/CIP1基因多态性与食管癌的关联研究（论文提纲范文）

（9）骨肉瘤预后相关分子生物学指标研究进展（论文提纲范文）

四、人骨肉瘤中p21 waf1/cip1基因的表达（论文参考文献）

• [1]KIF20A通过PI3K-AKT信号通路促进纤维肉瘤发生发展的研究[D]. 朱振华. 吉林大学, 2020(08)
• [2]Hsp27通过p21在皮肤角质形成细胞光老化中调控细胞凋亡的机制研究[D]. 刘川. 重庆医科大学, 2019(01)
• [3]甲基莲心碱诱导人成骨肉瘤细胞G1期停滞的分子机制研究[D]. 张锡宇. 山东大学, 2012(12)
• [4]人类肝细胞性肝癌RUNX3、p21WAF1/CIP1、CyclinD1基因表达的临床意义及其相关性研究[D]. 高锋利. 宁夏医科大学, 2011(05)
• [5]P21WAF1/CIP1对肝癌细胞SMMC-7721生物学行为的影响及其与POLD1基因关系初探[D]. 谭晓虹. 广西医科大学, 2010(08)
• [6]宁夏汉族人群p21WAF1/CIP1基因多态性与食管癌的关联研究[D]. 章恒. 宁夏医科大学, 2010(02)
• [7]人骨肉瘤中p53、p21WAF1/CIP1和增殖细胞核抗原的表达及相互关系[J]. 秦国斌,王义生,李月白,殷力,鲍剑. 中华实验外科杂志, 2009(12)
• [8]骨肉瘤p21、p16基因表达及相关性初步研究[J]. 陈煜,陈伟高,余智华. 江西医学院学报, 2009(06)
• [9]骨肉瘤预后相关分子生物学指标研究进展[J]. 黎承军,郭开今,吴苏稼. 中国骨肿瘤骨病, 2008(06)
• [10]骨肉瘤中P53及P21WAF1表达的生物学意义[J]. 赵伟,孙洁,徐惠绵,李建华. 微生物学杂志, 2008(02)

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