一、中西医结合治疗新生儿缺氧缺血性脑病疗效观察（论文文献综述）
刘结民[1]（2019）在《热敏灸对缺氧缺血性脑病新生小鼠脑组织细胞凋亡的影响》文中研究指明目的:研究热敏灸大椎穴治疗新生儿小鼠缺氧缺血性脑病（NHIE）疗效并探讨其作用机制。方法:SPF级健康ICR小鼠（重约3～5g）按随机对照原则分成假手术组、缺氧缺血模型组、艾灸治疗组;艾灸治疗组依据小鼠尾温变化再次分为非热敏灸组（尾温未上升）和热敏灸组（尾温升高）。缺氧缺血模型组、艾灸治疗组按照Rice-Vannucci和Levine的方法制备NHIE模型;以生长发育的体重、神经行为学测试（翻正反射、悬崖躲避试验、趋地反射试验、抓力试验）、形态学观察、TTC、TUNEL、caspase-9为检测指标。结果:纳入统计的四组新生小鼠体重统计学上无差异（P>0.05）,在术后三天,与缺氧缺血模型组比较,非热敏灸组和热敏灸组的小鼠体重增长较快,统计学上有差异（P<0.05）。与缺氧缺血模型组比较,非热敏灸组和热敏灸组小鼠的翻正反射时间、悬崖躲避试验时间、趋地反射试验时间明显缩短,而抓力试验时间延长,统计学上有差异（P<0.05）。非热敏灸组和热敏灸组梗死面积较缺氧缺血模型组均减少（P<0.05）,且热敏灸组梗死面积明显减少（P<0.05）。缺氧缺血模型组小鼠左侧脑组织表面出现大面积苍白、液化现象,且脑组织萎缩,大面积梗死;与缺氧缺血模型组比较,非热敏灸组梗死面积较小,热敏灸组梗死面积最小。缺氧缺血模型组左侧脑组织细胞排列顺序杂乱无章,细胞大量丢失,缝隙变大;与缺氧缺血模型组比较,非热敏灸组仅少量细胞脱落,热敏灸组细胞脱落数量最少。非热敏灸组和热敏灸组表达的TUNEL阳性细胞总数较缺氧缺血模型组减少（P<0.05）;热敏灸组较非热敏灸组表达的TUNEL阳性细胞总数减少（P<0.05）。非热敏灸组和热敏灸组表达的caspase-9阳性细胞总数较缺氧缺血模型组减少（P<0.05）;热敏灸组较非热敏灸组表达的caspase-9阳性细胞总数减少（P<0.05）。结论:热敏灸大椎穴可以增加缺氧缺血性脑病新生小鼠的体重,提高其运动功能,减少脑梗死面积,抑制细胞脱落,其机理也许与降低脑组织中caspase-9的阳性表达和细胞凋亡的数量有关。
黄天愚[2]（2019）在《槐杞黄颗粒对新生大鼠HIE动物模型的疗效与作用机制研究》文中研究表明研究背景:槐杞黄颗粒（还尔金）是目前广泛用于呼吸、免疫、肾脏等系统的一个中成药制剂。因安全有效而被西医各领域临床医生所接受和欢迎。企业为了拓展市场,瞄准新生儿领域,确立了新生儿缺氧缺血性脑病（HIE）作为槐杞黄颗粒的治疗对象。为掌握第一手资料,企业委托我科室先从动物实验开始,观察其临床效果及作用机制。因HIE临床上以惊惕、痉挛、抽搐为其主要表现,属于中医的惊风范畴。中医言“诸风掉眩,皆属于肝”,又言“肾主脑、生髓”。故本病的中医病机多属肝肾阴亏,阻络动风,当以养阴益气活血为该病的治疗大法。笔者以此为立题依据,选用槐杞黄颗粒作为实验试剂,建立实验动物模型,观察该制剂对HIE动物模型的治疗效果,同时初步明确其对于HIE的作用机制与途径,从而证明该制剂治疗HIE的有效性与可行性,为其投入新生儿临床运用提供有力的佐证。研究目的:本研究基于以上研究背景,通过进行有关HIE的中医文献与基础理论研究,结合现代西医学关于HIE的研究成果,并根据此次动物模型实验的数据结果来分析探讨槐杞黄颗粒对新生儿缺氧缺血性脑病的作用机制,为临床上运用槐杞黄颗粒治疗HIE提供可靠的理论及实验依据。实验方法:本实验选用Vannucci模型作为HIE动物造模模型,采用槐杞黄颗粒对新生SD大鼠进行灌胃治疗,通过对实验动物进行动物行为学观察以及病理切片的HE染色来评估新生大鼠HIE动物模型的脑缺氧缺血以及脑细胞的凋亡情况,同时通过免疫组化染色SP法、平均光密度测定以及酶联免疫吸附法（Elisa法）来测定Caspase-3、S100B两项指标的变化情况。实验结果:1.行为学观察:造模成功后,模型组SD大鼠均出现行为能力改变,主要表现为对侧肢体运动障碍,睁眼困难等改变。而假手术组SD大鼠无上述改变。槐杞黄组SD大鼠早期的行为能力有与模型组相似的改变,后期行为能力改变较前期而言有减轻。2.HE染色观察结果:完成造模后的几个特定时间点,假手术组SD大鼠脑组织细胞形态表现均正常;模型组SD大鼠脑组织细胞出现坏死以及细胞核溶解等情况;槐杞黄组与模型组相比,早期改变与模型组相似,后期脑组织改变优于模型组,与假手术组脑组织相似。3.免疫组化结果:模型组SD大鼠血清中S100B、Caspase-3浓度与假手术组SD大鼠S100B、Caspase-3浓度相比,在2h、1d、3d、7d四个时间点均有升高,差异明显,统计学意义显着（p<0.01）,该结果提示:新生儿HIE动物模型造模的制备是成功的;造模后1d、3d、7d三个时间点,槐杞黄组中的S100B、Caspase-3浓度相较模型组而言均有降低,具有统计学意义（p<0.05）或（p<0.01）,提示:槐杞黄颗粒具有下调新生儿HIE模型大鼠血清中S100B、Caspase-3浓度的作用。研究结论:1、槐杞黄颗粒可改善HIE模型大鼠的行为能力,并对HIE模型SD大鼠的脑组织结构具有一定修复功能,说明槐杞黄颗粒具有抗新生大鼠缺氧缺血性脑病发展的作用。2、槐杞黄颗粒可以降低新生HIE大鼠模型脑组织中的Caspase-3蛋白酶含量,以减少脑细胞的凋亡,从而达到延缓疾病发展的目的。3、槐杞黄颗粒可以下调新生HIE大鼠模型脑组织中的S100B蛋白表达,表明槐杞黄颗粒可以通过干预S100B的表达以延缓病情的发展。通过上述实验研究表明,槐杞黄颗粒可以修复大脑缺氧缺血所致的脑组织损伤,以及减少脑神经细胞的凋亡,从而发挥抑制HIE病情发展的作用。
王文娟[3]（2018）在《乌司他丁治疗新生儿缺氧缺血性脑病的临床研究》文中研究说明目的新生儿缺氧缺血性脑病是导致新生儿死亡、神经行为和长期残疾的主要原因。尽早诊断新生儿缺氧缺血性脑病,及时治疗,是改善新生儿缺氧缺血性脑病患者预后,提高患者生命质量的重要方式,因此,开发新的治疗办法十分必要。本研究拟在亚低温等常规治疗的基础上,给予乌司他丁治疗新生儿缺氧缺血性脑病,分析乌司他丁治疗新生儿缺氧缺血性脑病的临床效果,为新生儿缺氧缺血性脑病的治疗及预后提供新思路。方法将患儿随机双盲法分为2组,对照组、实验组各100例。对照组给于亚低温等常规治疗,实验组在对照组的基础上加用乌司他丁5-10万U/kg,连用7天。分别于入院后第1、3、5、7天分别抽取桡动脉血,检测NSE水平以及白细胞介素-6、肿瘤坏死因子含量;于入院第1、2、3、4周测定患儿NBNA评分;于入院后第1、2、3、4周进行影像学检查;对比两组患儿神经系统症状恢复时间;对比两组患儿治疗过程中感染、硬肿症、肝肾功能异常、血小板计数减少、电解质紊乱、血糖异常等并发症的发生情况;所有患儿均随访至1周岁,记录患儿的智能发育情况,同时记录其癫痫、语言障碍、运动障碍、智力落后、严重脑瘫等后遗症的发生情况。结果治疗后第2周、3周和4周NBNA评分实验组均显着高于对照组,差异均具有统计学意义（p<0.05）;实验组患儿治疗后意识恢复时间、反射恢复时间和肌张力恢复时间等神经功能恢复时间均显着短于对照组,差异具有统计学意义（p<0.05）;治疗后3、5、7天,实验组NSE含量显着低于对照组,治疗后实验组血清中炎症因子IL-6和TNF-α含量下降显着,差异具有统计学意义（p<0.05）;第2、3、4周实验组患儿的CT值显着高于对照组,差异均具有统计学意义（p<0.05）;两组患儿并发症的发生率无统计学意义（p>0.05）;随访结果显示,实验组的精神发育指数和运动发育指数均显着高于对照组,差异均具有统计学意义（p<0.05）;两组患儿主要后遗症,实验组后遗症的发生率低于对照组,但是两组患儿后遗症的发生率差异无统计学意义（p>0.05）。结论（1）乌司他丁治疗新生儿缺氧缺血性脑病,可以显着改善NBNA评分,降低神经功能恢复时间;（2）乌司他丁治疗新生儿缺氧缺血性脑病,可以显着降低NSE和炎症因子TNF-α和IL-6的表达;（3）乌司他丁治疗新生儿缺氧缺血性脑病,影像学检查结果改善显着;（4）乌司他丁治疗新生儿缺氧缺血性脑病,随访结果显示,该方法治疗的并发症和后遗症结果具有一定的价值,治疗效果安全、可靠。
李星儿[4]（2012）在《针刺对宫内窘迫缺氧缺血性脑损伤大鼠新生神经细胞凋亡的影响研究》文中提出目的新生儿缺氧缺血性脑病（hypoxic-ischemic encephalopathy, HIE）严重危害新生儿的健康,是导致脑性瘫痪（cerebral palsy, CP）、癫痫（epilepsy）等儿童脑病的直接因素。对此类疾病的治疗至今仍为世界性医学难题。如何有效改善HIE所致的病理状况一直是医学界研究的重要内容之一。近十几年来,针灸在治疗新生儿缺氧缺血性脑病后遗症之一的脑瘫方面,取得了很大突破,针灸在脑瘫领域展现出空前的繁荣景象。随着研究的深入,一些学者发现患儿接受针灸治疗的年龄越小,疗效越显着,因此萌生了在新生儿期即对缺氧缺血性脑损伤的患儿进行针灸治疗的想法。但由于HIE的危险性和严重性、现代医学目前在我国医学系统尤其是新生儿急救领域的主导地位、中医针灸对该病作用机制的实验研究尚属空白、中医“科学性”受现代医学质疑、针灸作为有创治疗在新生儿领域的安全性等多种原因,决定了目前中医针灸难以进入该领域一展所长。因此,先在动物实验上验证中医针灸的有效性和安全性,并深入探索和揭示针灸治疗HIE的作用机制,将有助于推动针灸治疗进入新生儿HIE领域的进程。靳三针疗法是已故广州中医药大学治疗弱智儿童的首席教授靳瑞教授所创立的学术体系,被誉为“岭南针灸新流派”。靳瑞教授及其带领的靳三针团队,以“靳三针头穴”为主治疗小儿脑病二十余年,疗效肯定,国家中医药管理局已将“靳三针治疗儿童精神发育迟滞和儿童自闭症临床规范化研究”两项成果作为临床适宜疗法向全国推广。目前对“靳三针疗法”治疗小儿脑病的临床观察研究很多,但缺乏对其作用机理的实验基础研究。本论文目的有二：一方面,以“靳三针头穴”为切入点,旨在探索针刺对HIBD新生大鼠的作用机制是否与减少新生神经细胞凋亡有关,并进一步寻求其起效通路,为针灸治疗HIE寻找可靠的实验依据；另一方面,以针刺介入时间为切入点,比较HIBD发生后不同时间开始针刺对新生神经细胞凋亡相关指标的影响,为临床研究提供必要的理论支持。方法文献研究本部分回顾了现代医学对新生儿HIE的认识和治疗进展、古代中医对新生儿HIE认识和现代中医治疗进展、神经干细胞凋亡基因的研究进展等三大内容。在此基础上对新生儿HIE的中西医治疗现状进行了归纳总结。实验研究本部分共包括六个实验项目。实验一采用延迟5min剖宫产术模拟宫内窘迫制造HIBD新生大鼠模型,设立正常组（自然分娩的新生大鼠）和假手术组（正常剖宫产术分娩的新生大鼠）作为对照组。根据新生大鼠出生时神经行为学表现、脑组织HE染色鉴定造模成功。将实验一中获得的各组新生大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、针刺1组和针刺2组,每组再根据处死观察的时间分为21d、28d、35d、42d、49d亚组,每组雌雄各半,饲养到第14天时,用苦味酸标记后,进入后续实验。实验二观察各组新生大鼠14～49天的体重变化,研究针刺对HIBD新生大鼠体重的影响。实验三～六研究针刺对HIBD新生大鼠大脑皮层缺血灶中的新生神经细胞凋亡的影响。其中：实验三采用Tunel法检测大脑皮质中凋亡的神经细胞数量；实验四采用免疫组织化学法检测大脑皮质中促凋亡基因Caspase-3蛋白的表达；实验五采用免疫组织化学法检测大脑皮质中BrdU.Nestin蛋白的表达,来反映大脑皮质中新生神经干细胞的数量和细胞增殖状况；实验六采用免疫组织化学法检测大脑皮质中抗凋亡基因14-3-3蛋白的表达。结果实验研究1、建立模型1)新生大鼠死亡率：出生21天时各组死亡率为正常组5.13%（4/78）,假手术组6.82%（3/44）,模型组14.66%（28/191）,卡方检验p=0.049。2)新生大鼠出生时表现：正常组甫出生即全身呈现较深的粉红色,在雌鼠的舔舐下可扭动身体、挥舞四肢、发出叫声,并可迅速吃乳。假手术组和造模组甫从子宫中取出时,均全身青紫或苍白,四肢伸展,没有呼吸,心跳过速,对触觉刺激无反应。3)新生大鼠出生第2天翻正反射：最短翻正时间假手术组<正常组<模型组,其中模型组与正常组和假手术组的差异均有统计学意义（P<0.01）。10次翻正中的成功次数正常组>假手术组>模型组,其中模型组与正常组和假手术组的差异均有统计学意义（P<0.01）。4)新生大鼠出生第14天悬吊试验：正常组和假手术组完成试验的时间差别无统计学意义（P>0.05）,造模组完成试验的时间均短于正常组（P<0.01）和假手术组（P<0.01）。5)新生大鼠出生第14天斜坡试验：正常组和假手术组完成试验的时间差别无统计学意义（P>0.05）,造模组完成试验的时间长于正常组（P<0.01）,而和假手术组的差别无统计学意义（P>0.05）。其中,正常组参加斜坡试验的新生大鼠27只,成功25只（92.6%）,不成功2只（7.4%）；假手术组参加斜坡试验的新生大鼠15只,成功13只（86.7%）,不成功2只（13.3%）；造模组参加斜坡试验的新生大鼠84只,成功55只（65.5%）,不成功29只（34.5%）。卡方检验P<0.01,可以认为斜坡试验成功与否的结果与组别有关。6)脑组织HE染色：正常组大脑皮质的神经元分布由表及里可见分子层、外颗粒层、外锥体细胞层、内颗粒层、内锥体细胞层、多形细胞层,神经元的6层结构完整。神经元圆形或锥形,细胞质内见嗜碱性均匀分布的尼氏体,细胞核位于胞体中央,核膜明显。在一片正常细胞中间或出现个别固缩细胞。假手术组大脑皮质神经元的6层结构基本完整,局灶区域可见3层（外锥体细胞层）锥体细胞胞浆红染,胞核浓缩深染,结构消失。模型组大脑皮质的3层和5层（外锥体细胞层和内锥体细胞层）锥体细胞数量减少,细胞体积缩小,变成三角形,胞浆呈均匀的嗜伊红染色,胞核浓缩深染,结构消失。部分海马椎体细胞层细胞亦见上述变化。2、针刺对体重的影响：新生大鼠14-49天体重：35天龄前,模型组、针刺1组、针刺2组和正常组或假手术组的体重差异有统计学意义,42天龄后,各组的体重差异均无统计学意义。3、针刺对细胞凋亡的影响：针刺1组凋亡细胞个数21-35天龄时和模型组的差异均无统计学意义（P>0.05）。针刺2组凋亡细胞个数35-49天龄时均少于模型组（P<0.01）。35天龄时,针刺2组凋亡细胞个数少于针刺1组（P<0.05）。4、针刺对Caspase-3的影响：针刺1组Caspase-3的表达21天龄时和模型组的差异无统计学意义（P>0.05）,28天龄时低于模型组（P<0.01）,35天龄时高于模型组（P<0.01）。针刺2组Caspase-3的表达35天龄时高于模型组（P<0.01）,42和49天龄时和模型组的差异无统计学意义（P>0.05）。35天龄时,针刺1组和针刺2组Caspase-3的表达差异无统计学意义（P>0.05）。5、针刺对BrdU的影响：针刺1组BrdU的表达21-35天龄时和模型组的差异无统计学意义（P>0.05）。针刺2组BrdU的表达35-42天龄时和模型组的差异无统计学意义,49天龄时低于模型组（P<0.01）。35天龄时,针刺1组和针刺2组BrdU的表达差异无统计学意义（P>0.05）。6、针刺对Nestin的影响：针刺1组Nestin的表达21和35天龄时和模型组的差异无统计学意义（P>0.05）,28天龄时高于模型组（P<0.01）。针刺2组Nestin的表达35-42天龄时和模型组的差异无统计学意义（P>0.05）,49天龄时高于模型组（P<0.01）。35天龄时,针刺2组Nestin的表达低于针刺1组（P<0.01）。7、针刺对14-3-3的影响：针刺1组14-3-3的表达21天龄时高于模型组（P<0.01）,28天和35天龄时,表达急剧降低,和模型组的差异无统计学意义（P>0.05）。针刺2组14-3-3的表达35天龄时低于模型组和正常组（P<0.01）,42天和49天龄时,表达略有上升,而模型组和正常组在此阶段的大脑皮质中已经没有表达。35天龄时,针刺2组14-3-3的表达低于针刺1组（P<0.01）。结论文献研究1、新生儿缺氧缺血性脑病的发病机制和病理生理过程复杂,中西医多种方法综合治疗是未来的发展方向。目前国内外对该病的治疗仍以支持疗法和对症处理为主,高压氧、亚低温、神经营养因子、神经干细胞移植等多种方法仍以动物实验研究为主,未大规模应用于临床。2、古代中医对该病的理论认识和临床经验相当丰富,古人已经发展出一套处理新生儿缺氧缺血性脑病类似症状的辨证论治方案。迄今为止,尚未有学者对古代中医治疗该病的方法进行过系统总结,也未与现代中医的临床和实验研究成功对接。这是一个巨大的宝库,值得广大中医研究者去挖掘和应用。3、现代中医在新生儿缺氧缺血性脑病治疗领域以数种单一中药提取物制剂为主,临床应用也未体现中医的辨证论证精神。针灸推拿对该病的治疗集中于其神经后遗症——脑性瘫痪上,真正在新生儿期介入治疗的临床报道非常少。实验研究1、延迟5min剖宫产术在短期内可以制备大量长期存活的HIBD新生大鼠,高度模拟胎儿宫内窘迫的发病机制,且操作简便,是一种值得推广的研究缺氧缺血性脑损伤的造模方法。该方法可造成相对温和的缺氧缺血性脑损伤,新生大鼠出生后21-49天存在神经细胞“延迟凋亡”现象,是研究中枢神经细胞凋亡的理想模型。2、获得正常新生大鼠神经系统发育和细胞凋亡的生理规律：（1）正常新生大鼠21-42天龄时大脑皮质的神经干细胞持续存在,42-49天年龄段突然下降,表明42-49天年龄段,新生大鼠神经系统发育接近成熟。（2）正常新生大鼠42天龄大脑皮质的神经细胞出现凋亡高峰,随后逐渐下降。42天以前,大脑皮质中可能存在某些抑制Caspase-3促凋亡作用的因素,抑制神经细胞过度凋亡,14-3-3可能是其中一个因素。42天以后,14-3-3表达消失,大量神经细胞进入凋亡程序,但Caspase-3可能与此无关。3、获得模型组新生大鼠细胞凋亡相关的病理规律：（1）该模型42天后大脑皮质的神经细胞开始大量凋亡,新生神经干细胞减少,同时伴随异常的细胞增殖,这些增殖的细胞很可能不是正常成熟的神经元,而是修复损伤的其他神经细胞。（2）42-49天年龄段,大脑皮质神经细胞出现“延迟凋亡”的现象,与Caspase-3的表达存在因果关系。4、获得针刺对观察指标的作用规律：（1）针刺具有抑制HIBD新生大鼠大脑皮质中的细胞凋亡和BrdU的表达、提高大脑皮质中Nestin和14-3-3表达水平的作用。其中,针刺2组的上述作用均优于针刺1组。（2）针刺对神经细胞凋亡的抑制作用,可能与针刺提高14-3-3的表达水平有关,并通过抑制凋亡,间接抑制了BrdU的表达,另一方面,针刺具有促进Nestin在大脑皮质中表达的作用,能提高损伤区的新生神经干细胞水平,从而修复受损组织。（3）针刺对Caspase-3的抑制作用不明显,针刺抑制HIBD新生大鼠神经细胞凋亡的作用很可能不是通过Caspase-3途径来实现的。5、针刺介入时间研究对临床应用的启示：（1）决定针刺介入时间的关键,不一定在于越早越好。最佳的针刺介入时机,应取决于受针刺影响的靶蛋白,以及该蛋白在HIBD模型神经系统发育过程中表达发生转折的年龄段。（2）针刺影响靶蛋白表达的维持时间偏短,提示机体对针刺具有耐受性。因此找准关键时间点介入针刺治疗,才能更大限度地提高疗效。在治疗过程中,定时更换穴位进行刺激,可能有利于减少机体对该穴位的耐受性,提高针刺治疗敏感度。
田玉凤,曹亚敏,王瑜,崔巍,郭丽丽,闫红霞[5]（2022）在《选择性头部亚低温疗法联合高压氧治疗新生儿缺氧缺血性脑病的效果及对患儿神经细胞因子水平、NBNA评分的影响》文中研究表明目的探讨选择性头部亚低温疗法联合高压氧治疗新生儿缺氧缺血性脑病（HIE）的效果。方法选取2016年2月至2020年5月收治的80例HIE患儿进行研究,根据治疗方案不同将其分为对照组和观察组,各40例。对照组采用常规对症治疗及选择性头部亚低温疗法,观察组在对照组基础上加用高压氧。比较两组的治疗效果。结果观察组的治疗总有效率为97.50%,高于对照组的80.00%,差异具有统计学意义（P<0.05）。治疗后,两组的NSE、NGB、MBP水平均低于治疗前,且观察组低于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）。治疗后,两组的NBNA及Gesell评分均高于治疗前,且观察组高于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）。治疗后,两组的IL-4、hs-CRP、TNF-α水平均低于治疗前,且观察组低于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论选择性头部亚低温疗法联合高压氧治疗新生儿HIE的效果满意,可改善神经细胞因子及炎性因子水平,促进神经功能修复,值得推广。
李娜[6]（2021）在《黄芪甲苷调控MMP-9介导NLRP3/Caspase-1信号通路改善缺氧缺血性脑损伤的分子机制》文中研究表明目的:新生儿缺氧缺血性脑病（HIE）的发病机制可能与NOD样受体家族含吡咯结构域-3（NLRP3）及基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的激活有关。炎症对神经系统发育的影响高度依赖于治疗时机,早期评估HIE的炎症严重程度对于调整干预措施非常重要。本研究旨在观察新生大鼠缺氧缺血性脑损伤早期MMP-9、NLRP3炎症小体及其下游效应因子Caspase-1和白细胞介素-1β（IL-1β）的时程变化规律,阐明MMP-9介导NLRP3/Caspase-1信号通路在HIE进程中的作用;同时通过体内和体外细胞实验研究黄芪甲苷（AS-IV）对HIE的防治作用及机制,为缺氧缺血脑损伤后治疗时机的选择提供实验依据,为黄芪甲苷治疗新生儿脑损伤的临床应用提供依据。材料与方法:选取体质量10～14g的7日龄大鼠随机分为缺氧缺血组（HI组,n=40）和假手术组（sham组,n=40）。分别于术后0 h、4 h、8 h、12 h、24 h采集标本（每个时间点随机选取8只）。HI组大鼠双重结扎右侧颈总动脉,然后低氧（8%O2和92%N2）暴露2 h。Sham组仅切开皮肤并钝性分离乳鼠右侧颈总动脉,不结扎直接进行皮肤缝合。手术前后使用头颅超声测量双侧大脑中动脉（MCA）近端最大收缩末期血流速度（ESV）、舒张末期血流速度（EDV）和阻力指数（RI）。用声辐射力脉冲成像（ARFI）评价脑损伤程度。采用HE染色观察24 h内不同时间点大脑海马组织病理变化、免疫组织化学方法检测24 h内不同时间点脑组织中NLRP3、Caspase-1和IL-1β蛋白的表达,检测24 h内不同时间点脑组织NLRP3、Caspase-1、IL-1β、MMP-9 m RNA和蛋白的表达。构建HT22细胞氧糖剥夺（OGD）模型,将HT22细胞分为4组:对照组、OGD组、OGD+MMP-9抑制剂组、OGD+MMP-9激活剂组。应用CCK-8法测定HT22细胞缺氧后48 h内不同时间点细胞活力,观察其细胞形态变化;应用RT-q PCR和Western blot检测24 h内不同时间点OGD对HT22细胞MMP-9、金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）、NLRP3、Caspase-1、Gasdermin蛋白（GSDMD）及IL-1β的m RNA和蛋白表达的影响;免疫荧光法检测24 h内不同时间点NLRP3和MMP-9在氧糖剥夺HT22细胞中的表达的变化;免疫荧光法观察激活或阻断MMP-9对NLRP3表达的影响;RT-q PCR和Western blot法检测激活或阻断MMP-9对NLRP3及其下游效应因子Caspase-1、IL-1β、GSDMD m RNA和蛋白表达的影响。选取体质量10～14g的7日龄大鼠24只按随机数字表法分为假手术组、HI组和HI+AS-IV组,每组均8只。造模方法同前。HI+AS-IV组在HI造模后,立即将AS-IV（10 mg/kg）溶于DMSO液中（10m L/kg）,根据仔鼠体重进行灌胃,每8 h 1次,共记3次,24 h后异氟醚麻醉后脑部组织取样。HE染色观察AS-IV对HIE新生大鼠海马区脑组织的影响;采用Caspase-1和TUNEL双免疫荧光染色法检测AS-IV对HIE新生大鼠海马CA1区神经元焦亡发生的影响;Western blot检测AS-IV对新生大鼠焦亡相关蛋白MMP-9、NLRP3、Caspase-1、GSDMD及IL-1β蛋白表达水平的影响。构建HT22细胞OGD模型,随机分为对照组、OGD组、OGD+AS-IV组。设置AS-IV浓度梯度（50～400μmol/L）,采用CCK8检测不同浓度AS-IV对氧糖剥夺HT22细胞活力及细胞形态的影响;Western blot法检测不同浓度AS-IV对MMP-9、NLRP3、Caspase-1、GSDMD及IL-1β蛋白表达的影响;免疫荧光法检测OGD 8 h应用不同浓度AS-IV对NLRP3和MMP-9的影响;采用Caspase-1和TUNEL双免疫荧光染色法观察AS-IV对氧糖剥夺后HT22细胞焦亡的影响。结果:1.颅脑超声结果显示HI组右侧椎基底动脉4 h血流速度加快,24 h脑实质回声增强,3只仔鼠在24 h出现椎基底动脉盗血现象;与左侧MCA比较,HI组右侧MCA术后4、24 h ESV明显降低,24 h时EDV明显降低,4 h、12 h、24 h时RI明显增高（P<0.05）。与Sham组比较,HI组右侧MCA在24 h时ESV明显降低,RI明显升高（P<0.05）,左侧MCA的EDV呈进行性升高。HI后4 h,右侧海马锥体细胞层出现细胞密度降低,细胞核固缩和碎裂,可见少量神经细胞嗜酸性变性;8 h可见较多空泡细胞,细胞排列松散、层次紊乱;12 h神经细胞嗜酸性变性明显增多;24 h神经元体积和数量减少,嗜酸性改变有所减轻。免疫组化结果显示,与0 h相比,NLRP3和IL-1β在4 h、8 h、12 h和24 h的表达均显着升高（P<0.01）,Caspase-1的表达在8 h和12 h显着增强（P<0.01）。与sham组相比,HI组NLRP3 m RNA和蛋白地表达在4 h、8 h、24 h显着升高（P<0.05）,Caspase-1表达在12 h显着升高（P<0.001）,IL-1β表达在8 h时明显升高（P<0.01）。MMP-9变化趋势同NLRP3。2.HT22细胞在OGD环境下暴露8 h后体积开始缩小,并被碎屑包围,细胞核呈碎裂状。随着OGD时间的延长,细胞失去原有形态,细胞数量明显减少。CCK-8法检测HT22细胞活力,与0 h相比,8 h细胞活力明显下降（P<0.001）,48 h细胞存活率降至9.9±1.1%。与0 h比较,MMP-9、NLRP3、pro-Caspase-1、cleaved-Caspase-1、GSDMD及IL-1βm RNA和蛋白在OGD后4 h、8 h、12 h、24 h表达均升高（P<0.01）,8 h和12 h上升最明显,24 h轻度下降。上述指标在8 h和12 h间比较,均无统计学意义（P>0.05）。NLRP3和MMP-9在OGD 24 h内各时间点变化趋势一致,TIMP-1变化则与NLRP3和MMP-9相反。免疫荧光法显示,与对照组比较,HT22细胞氧糖剥夺后NLRP3和MMP-9共定位在8 h和12 h明显上升,24 h轻度下降,两者在各时间点的Pearson相关系数（PCC）均大于0.8,各时间点PCC间比较均无统计学意义（P>0.05）。以上研究均证实OGD后8 h MMP-9、NLRP3、Caspase-1、GSDMD及IL-1β的表达增加最明显,因此后续实验选择氧糖剥夺8 h的诱导条件进行。应用MMP-9抑制剂后,NLRP3的表达迅速下降。与OGD组比较,两者共定位明显下降（P<0.001）。应用MMP-9激动剂后,与OGD组比较,两者共定位无明显升高,差异无统计学意义（P>0.05）。激活或阻断MMP-9后,NLRP3和MMP9在各时间点PCC均大于0.8,各时间点PCC比较无统计学意义（P>0.05）。应用MMP-9抑制剂后,与OGD组比较,NLRP3、pro-Caspase-1、cleaved-Caspase-1、GSDMD及IL-1βm RNA和蛋白表达均显着降低（P<0.001）;与对照组比较,上述抗体蛋白和m RNA表达无明显变化（P>0.05）。应用MMP-9激动剂后,与对照组比较,NLRP3、pro-Caspase-1、cleaved-Caspase-1、GSDMD及IL-1βm RNA和蛋白表达显着升高（P<0.01）;与OGD组比较,pro-Caspase-1及cleaved-Caspase-1m RNA和蛋白表达升高（P<0.01）。3.HE染色显示,HI组海马区锥体细胞层细胞密度降低、排列松散、层次紊乱,部分细胞可见空泡变性和典型红色神经元;AS-IV组海马神经元细胞变性程度减轻,急性缺血性改变明显减少。采用Caspase-1和TUNEL标记焦亡细胞,与假手术组比较,HI组海马区可见较多焦亡细胞。与HI组比较,AS-IV治疗后焦亡细胞明显下降（P<0.01）。与假手术组比较,HI组脑组织NLRP3、Caspase-1、GSDMD及IL-1β表达水平明显升高（P<0.05）;与HI组比较,AS-IV治疗组脑组织NLRP3、Caspase-1及GSDMD表达水平显着降低（P<0.05）。4.HT22细胞氧糖剥夺8 h时,应用不同浓度AS-IV进行干预。CCK-8实验结果显示,与OGD组比较,应用100～400μmol/LAS-IV干预后,HT22细胞活力均升高（P<0.05）;AS-IV药物浓度在200μmol/L时能明显减轻OGD损害,与对照组比较,细胞活力升高最明显;氧糖剥夺不同时间点应用AS-IV 200μmol/L干预HT22细胞结果显示,OGD 8 h应用黄芪甲苷治疗效果最佳。与对照组比较,OGD组MMP-9、NLRP3、pro-Caspase-1、cleaved-Caspase-1、GSDMD、IL-1β蛋白表达明显升高（P<0.001）;应用AS-IV100～400μmol/L三个浓度干预后MMP-9、NLRP3、pro-Caspase-1、cleaved-Caspase-1、GSDMD、IL-1β蛋白表达明显下降（P<0.01）。200μmol/LL和400μmol/L两个浓度为最佳浓度,两浓度间比较差异无统计学意义（P>0.05）。免疫荧光显示,与对照组比较,NLRP3与MMP-9共定位明显增加（P<0.001）。与OGD组比较,AS-IV在应用100～400μmol/L三个浓度干预后NLRP3和MMP-9双阳细胞均明显下降（P<0.01）。200μmol/L和400μmol/L两个浓度间比较差异无统计学意义（P>0.05）。采用Caspase-1和TUNEL标记焦亡细胞,与对照组比较,OGD组可见较多焦亡细胞,AS-IV治疗后焦亡细胞比率明显下降（P<0.01）。结论:1.新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后4～8 h,NLRP3、Caspase-1和IL-1β的m RNA和蛋白表达均升高,提示NLRP3炎症体可能参与了新生儿缺氧缺血性脑损伤的发病且其开始上调时间可能早于4小时。NLRP3/Caspase-1/IL-1β信号通路可能成为治疗新生儿缺氧缺血性脑损伤新的治疗靶点。2.新生大鼠缺氧缺血性脑损伤发生发展过程中,MMP-9表达与NLRP3有一定相关性,抑制MMP-9可显着降低NLRP3及其相关炎症介质Caspase-1、GSDMD、IL-1β的表达。MMP-9可能是调控NLRP3/Caspase-1信号通路的重要介质。3.黄芪甲苷治疗可以减轻缺氧缺血诱导新生大鼠脑损伤,抑制新生大鼠缺氧缺血脑组织和HT22海马神经元细胞炎症反应,这种作用可能是通过调控MMP-9介导NLRP3/Caspase-1信号通路发挥作用的。
秦玮珣[7]（2020）在《基于自噬和炎症探讨“智三针”改善HIBD大鼠认知障碍分子机制》文中提出目的:本课题旨在研究“智三针”改善宫内窘迫缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage,HIBD）模型大鼠认知行为障碍的内在机制。探讨智三针对HIBD大鼠脑部海马区受损神经元病理变化的影响;从NLRP3炎症体活化机制切入,阐明智三针通过调控HIBD大鼠神经元自噬流的强度从而抑制NLRP3炎症体活化,改善神经元损伤的作用通路,为针刺治疗围产期缺氧缺血性脑病的机制研究提供理论依据。方法:采用延迟10分钟剖宫产方法复制宫内窘迫HIBD新生大鼠模型。在新生大鼠出生后第15天给予针刺干预（“智三针”包括神庭穴、双侧本神穴）,每天干预1次,每次留针10分钟,连续14天。本研究共分为四部分:（1）第一部分实验评价针刺对HIBD大鼠生长发育状况的影响,包括体重测定和mNSS神经功能缺损评分;（2）第二部分实验应用旷场试验、新物体识别实验和物体位置识别实验评价针刺对HIBD新生大鼠行为认知能力的影响;通过测定大脑湿重和冠状面、矢状面、水平面的直径评价HIBD大鼠脑部水肿与萎缩变化及针刺对其的影响;应用HE染色、Nissl染色观察针刺对HIBD大鼠海马形态和神经元结构的影响;应用TUNEL荧光染色观察针刺对HIBD大鼠海马神经元凋亡的影响;应用免疫组化观察针刺对HIBD大鼠神经元标志物NeuN和NF200的平均光密度值的影响,初步阐明针刺改善HIBD大鼠行为认知能力的病理学机制;（3）第三部分实验应用ELISA技术检测氧化应激相关指标ROS、MDA、SOD、GSH-px和炎症相关因子TNF-α、IL-1β、IL-18的表达,探讨针刺对HIBD大鼠血清氧化应激与炎症反应的影响;应用Western Blotting技术分别在PND1、PND3、PND7、PND14（针刺前）和PND28（针刺后）五个时间节点检测自噬相关蛋白LC3Ⅱ、P62、Lampl、Cathepsin D、Beclin 1 和 NLRP3 炎症体相关蛋白 NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、GSDMD的表达,探讨宫内窘迫HIBD大鼠脑部自噬与炎症反应随着缺血后再灌注的变化以及针刺对HIBD大鼠脑部自噬与NLRP3炎症体相关蛋白表达的影响;（4）第四部分实验添加了自噬激活剂RAPA（雷帕霉素）和抑制剂 CQ（氯喹）,应用时序记忆测试和情景记忆测试观察针刺对HIBD大鼠行为认知能力的影响;应用Western blotting技术检测针刺对HIBD大鼠海马自噬相关蛋白LC3Ⅱ、P62、Lamp1、mTOR、p-mTOR和NLRP3炎症体活化相关指标NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、GSDMD的表达的影响;应用Real-time PCR技术检测针刺对HIBD大鼠相关基因Map1lc3a、Lampl、Khdrbs1、Nlrp3、Pycard、Gsdmd对应mRNA相对表达量的影响,进一步在分子基因层面阐明智三针通过调控自噬流的强度抑制NLRP3炎症体的活化从而减轻细胞死亡保护受损神经元的机制作用。结果:1.第一部分实验结果延迟10分钟剖宫产方法复制宫内窘迫HIBD新生大鼠模型。分别在各组大鼠PND3、PND7、PND14、PND21和PND28比较各组大鼠体重,结果显示在PND3,HIBD造模导致的缺血缺氧使新生大鼠体重减轻;在PND7和PND14,随着生长时间的增加,HIBD大鼠生长速度明显弱于正常分娩的大鼠;在PND21,HIBD导致新生大鼠体重增长缓慢,针刺干预7天后无显着变化;在PND28,HIBD模型大鼠体重增长缓慢,生长受到限制,而针刺干预14d有利于HIBD大鼠体重增长。各组大鼠改良后的mNSS神经功能缺损评分结果显示HIBD造模的大鼠神经功能明显受损,模型制作成功;针刺能有效改善HIBD模型大鼠的受损神经功能。2.第二部分实验结果（1）旷场实验结果在针刺干预7d后,HIBD模型鼠的旷场探索能力无明显改善作用。在针刺干预14d后,结果显示针刺可以显着提高HIBD模型鼠的旷场水平运和中央区探索能力,但无法明显改善HIBD大鼠旷场垂直探索能力且对HIBD大鼠的情绪影响不明显。（2）新物体识别实验和物体位置识别实验结果各组大鼠均可以识别新旧物体和物体位置。针刺可显着提升HIBD大鼠的新物体辨别能力和对物体位置的识别能力。（3）各组大鼠大脑湿重及各切面直径HIBD造模并未对使大鼠大脑产生明显水肿或萎缩;针刺对HIBD模型鼠的大脑大小和重量无明显影响。（4）各组大鼠脑部海马区HE染色结果正常组大鼠海马锥体细胞结构清晰,呈多角形,排列紧密整齐,胞核饱满,核仁深染清晰可见;模型组大鼠海马的锥体细胞排列散乱,间隙变宽,细胞肿胀导致形态改变,边界不清,大部分神经元坏死形成空泡,核仁固缩;针刺组大鼠海马锥体细胞排列较整齐致密,少部分神经元肿胀坏死,部分核仁清晰可见,边界较清晰,提示针刺有助于改善HIBD受损神经元的形态与结构。（5）各组大鼠脑部海马区Nissl染色结果正常组大鼠海马区锥体细胞排列整齐规律,部分细胞质着色不全,有少量尼氏体在锥体层两侧,部分核仁有固缩现象;模型组大鼠海马锥体细胞排列散乱,间隙明显变宽,胞体肿胀形成空泡,着色不深,核仁明显固缩;针刺组大鼠海马锥体细胞排列较整齐致密,部分核仁清晰可见,边界较清晰。提示HIBD导致新生大鼠海马区神经元肿胀坏死,针刺可有效缓解HIBD大鼠海马区的病理形态。（6）各组大鼠脑部海马Tunnel荧光染色结果宫内窘迫缺氧缺血可引起新生大鼠海马区神经元凋亡从而引起脑损伤;针刺可明显改善HIBD大鼠的海马区神经元凋亡现象。（7）各组大鼠脑部海马区免疫组化结果缺氧缺血导致大鼠海马NeuN表达下降,神经元受损,模型组和假针刺组细胞着色较正常组浅,且细胞排列明显散乱,间距增大;针刺14d可以有效改善大鼠受损海马区NeuN的表达。缺氧缺血导致大鼠海马神经元受损或坏死,NF200表达量显着降低;针刺可以有效改善大鼠受损海马区NF200的表达。3.第三部分实验结果（1）各组大鼠血清氧化应激指标结果:HIBD造模导致大鼠机体释放大量活性氧引起氧化应激反应;针刺可以有效减少血清ROS和MDA浓度,降低氧化应激反应。HIBD造模导致大鼠机体SOD浓度下降;针刺可以有效升高血清SOD和GSH-Px浓度,促进清除氧化应激反应产生的氧离子自由基,减轻细胞损伤。HIBD造模导致大鼠机体释放大量细胞炎性因子使机体受损;针刺可以有效降低血清炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-18的浓度,减轻细胞受损程度。（2）HIBD大鼠海马神经元自噬流与焦亡相关蛋白表达结果在PND1,HIBD造模导致机体缺血缺氧,自噬作用被激活清楚受损细胞器,同时激活了大鼠海马区NLRP3炎症体的合成和焦亡作用。在PND3,HIBD导致的机体自噬流降解作用继续增强,同时NLRP3炎症体介导的焦亡作用在继续增强。在PND7,HIBD导致的机体自噬流降解作用继续增强,同时NLRP3炎症体持续活化。在PND14,HIBD大鼠海马自噬诱导持续增强,降解作用无明显改变,同时炎症反应继续增强,脑损伤加重。（3）智三针对HIBD大鼠海马神经元自噬与NLRP3炎症体活化的影响针刺干预后,模型组大鼠海马LC3Ⅱ表达明显升高、P62表达明显降低、LAMP1的表达升高;针刺组大鼠海马LC3Ⅱ、P62、LAMP1的表达明显升高,而假针刺组无明显变化,提示针刺干预抑制HIBD大鼠海马过量自噬流。此外,模型组大鼠海马NLRP3、pro-caspase-1、caspase-1、ASC、IL-1β、GSDMD 表达明显升高;针刺组大鼠海马NLRP3、pro-caspase-1、caspase-1、ASC、IL-1β、GSDMD 表达明显降低,提示针刺干预可有效抑制HIBD大鼠海马神经元焦亡反应,保护受损细胞。4.第四部分实验结果（1）行为学检测结果各组大鼠均可以识别物体出现的先后顺序以及是否与背景匹配。时序记忆测试结果显示:HIBD造模严重降低了大鼠对物体出现顺序的识别能力,抑制自噬流可以显着改善这一现象;经过RAPA干预后的HIBD模型鼠产生了过量的自噬流,而此时针刺已经无法使其下降,脑损伤在不断加重从而导致大鼠的记忆能力始终处于较低水平;CQ组抑制过量自噬流有缓解大鼠的记忆力低下的趋势。情景记忆测试结果显示:HIBD造模严重降低了大鼠识别物体是否与环境匹配的能力,抑制自噬流可以显着改善这一现象;RAPA干预后的HIBD模型鼠产生了过量的自噬流,针刺后自噬流受到抑制,脑损伤减轻从而使大鼠的记忆能力提升;CQ抑制了过量的自噬流可以有效提升大鼠的物体辨别及记忆能力。（2）各组大鼠自噬相关蛋白表达结果模型组大鼠海马LC3Ⅱ表达明显增高、P62表达降低、LAMP1表达升高、P-mTOR/totalmTOR值降低,提示HIBD造模导致的缺氧缺血激活大鼠神经元自噬作用;针刺组大鼠LC3Ⅱ表达升高、P62表达升高、LAMP1表达降低、P-mTOR/otal mTOR值升高,提示针刺抑制自噬流的降解;RAPA组大鼠的LC3IⅡ表达明显升高、P62表达降低、P-mTOR/total mTOR值降低,LAMP1呈升高趋势,提示自噬流被持续过量促进,而CQ组大鼠的LC3Ⅱ、P62、LAMP1、P-mTOR/total mTOR值均升高,提示自噬流降解被抑制;针刺+RAPA组LC3 Ⅱ、P62表达升高,针刺+CQ组LC3Ⅱ、P62表达降低,提示针刺抑制HIBD大鼠的过量自噬流作用。（3）各组大鼠NLRP3炎症体相关蛋白表达结果模型组大鼠海马 NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1、IL-1β、GSDMD 表达升高,提示HIBD造模导致的缺氧缺血使大鼠神经元NLRP3炎症体活化,焦亡反应加重;针刺组大鼠海马 NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1、IL-1β、GSDMD 表达降低,提示针刺抑制HIBD大鼠神经元NLRP3炎症体活化;RAPA组大鼠海马ASC、pro-caspase-1、IL-1ββ表达升高,提示自噬流增强促使炎症反应加重,CQ组大鼠海马NLRP3、ASC、pro-caspase-1、GSDMD表达降低,提示降低过量自噬流可抑制神经元炎症。针刺+RAPA组大鼠海马ASC、pro-caspase-1、IL-1β、GSDMD表达降低,提示针刺可适量降低HIBD大鼠神经元过量自噬流从而抑制细胞炎症。（4）各组大鼠Real-time PCR结果模型组大鼠海马LC3、P62、LAMP1 mRNA的相对表达量升高;针刺组大鼠LC3、LAMP1 mRNA的相对表达量升高,P62降低,提示针刺干预抑制HIBD大鼠产生的过量自噬流;RAPA组大鼠LC3、P62、LAMP1 mRNA的相对表达量升高,提示RAPA促进HIBD大鼠自噬流增强;CQ组大鼠P62mRNA的相对表达量降低,提示CQ通过抑制自噬底物的生成进而抑制自噬。针刺+RAPA组P62 mRNA的相对表达量降低,提示针刺通过抑制自噬底物的生成抑制过量自噬流。此外,模型组大鼠海马NLRP3、ASC、GSDMD mRNA的相对表达量升高,针刺组大鼠海马NLRP3、ASC、GSDMD mRNA的相对表达量降低,提示针刺干预抑制HIBD大鼠细胞焦亡;RAPA组大鼠海马NLRP3、GSDMD mRNA的相对表达量升高,提示自噬流增强加重HIBD大鼠细胞焦亡;CQ组大鼠海马NLRP3、ASC、GSDMD mRNA的相对表达量降低,提示阻断自噬降解可以有效降低HIBD大鼠的焦亡反应。针刺+RAPA组NLRP3 mRNA相对表达量降低,针刺+CQ组NLRP3 mRNA相对表达量升高,提示针刺抑制NLRP3的生成进而抑制NLRP3炎症体活性,减弱HIBD大鼠的神经元焦亡反应。结论:本研究证实“智三针”改善宫内窘迫HIBD新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的可能机制是:通过调控大鼠海马区因缺氧缺血产生的自噬流,进而抑制神经元中NLRP3炎症体的活化,减少细胞死亡,保护受损神经元。
林天霸[8]（2020）在《改良宫内窘迫脑损伤新生大鼠模型及针刺作用的机制研究》文中研究指明目的:观察针刺对缺血缺氧脑损伤（Neonatal hypoxic-ischemic brain disorders,HIBD）对新生大鼠的学习记忆能力和神经行为的影响,评价不同时长（5min,10min,15min）的宫内窘迫对HIBD新生大鼠脑组织形态和神经功能缺损程度的影响,探讨更贴合临床实际的宫内窘迫HIBD新生大鼠模型;观察不同时长缺血缺氧脑损伤与神经元自噬的联系,探讨神经元自噬在新生儿缺血缺氧脑损伤中的角色和作用;观察针刺对宫内窘迫HIBD新生大鼠神经元自噬蛋白表达和神经元超微结构的影响,初步揭示针刺调控神经元自噬水平,改善宫内窘迫HIBD新生大鼠缺血缺氧脑损伤和神经功能缺损的作用机制。方法:应用不同时长（5min,10min,15min）的宫内窘迫剖宫产术建立新生儿缺血缺氧脑损伤（Neonatal hypoxic-ischemic brain disorders,HIBD）模型。本实验分为三个部分:（1）评价不同时长缺血缺氧对HIBD新生大鼠学习记忆能力（旷场实验、水迷宫实验）的影响;（2）应用透射电镜、HE染色技术观察不同时长的缺血缺氧对HIBD新生大鼠脑组织形态和超微结构的影响;（3）应用WestemBlot技术观察不同时长的缺血缺氧对HIBD新生大鼠海马神经元自噬蛋白表达（Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、p62）的影响,探讨神经元自噬在新生儿缺血缺氧脑损伤中的角色和作用。最终,探讨出更贴合临床实际的宫内窘迫HIBD新生大鼠模型。应用宫内窘迫剖宫产术建立新生儿缺血缺氧脑损伤（Neonatal hypoxic-ischemic brain disorders,HIBD）模型。出生后第 14 天（Postnatal day 14,PND14）,给予 HIBD新生大鼠针刺（神庭穴、双侧本神穴、脑户穴、双侧脑空穴、双侧颞三穴）干预,每天干预一次,连续干预14天,每穴进针后,均匀、快速地捻转针柄10次,捻转完成后即刻出针,不留针。本部分（第四部分）实验旨在观察针刺对宫内窘迫HIBD新生大鼠海马神经元自噬蛋白表达（Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、p62）和海马神经元超微结构的影响,初步揭示针刺调控神经元自噬水平,改善宫内窘迫HIBD新生大鼠缺血缺氧脑损伤和神经功能缺损的作用机制。结果:（1）第一部分实验研究发现,与正常组比较,假手术组新生大鼠平均水平活动次数无明显变化（P＞0.05）,5min组、10min组和15min组大鼠平均水平活动次数均减少（P<0.05,P<0.01,P<0.001）。与正常组比较,假手术组新生大鼠平均水平活动次数无明显变化（P>0.05）,5min组、10min组和15min组大鼠平均水平活动次数均减少（P<0.05,P<0.01,P<0.001）。与正常组相比,假手术组、5min组大鼠定位航行实验各天的逃避潜伏期以及空间搜索实验的穿台次数与游泳总路程无明显变化（P＞0.05）,说明手术不是模型的干扰因素;与正常组相比,10min组和15min组大鼠各天潜伏时间明显延长（P<0.01,P<0.001）,穿台次数与游泳总路程减少（P<0.01,P＜0.001）,说明模型组出现了空间学习记忆障碍,造模成功。（2）第二部分实验研究发现,200倍显微镜下观察海马CA1区可见正常组及假手术组锥体细胞排列致密、有序、层次分明,细胞形状规则,核仁清晰;15min组锥体细胞减少甚至消失,排列无序结构疏松,细胞间隙增大,细胞形状不规则,多数细胞核固缩,核仁不清晰;5min组细胞排列整齐,细胞间隙小,核仁清晰;10min组椎体细胞排列较松散,细胞数量明显减少。正常组和假手术组大鼠前额叶神经元核周间隙正常,核膜连续光滑,细胞器完整,海马神经元核膜光源,核周间隙无改变,细胞器丰富,未见明显自噬小体;5min组核周间隙轻微增宽,粗面内质网轻微扩张,细胞器结构形态较清晰,自噬小体偶见;10min组核周间隙增宽,自噬小体吞噬、清除衰老受损细胞器现象清晰可见多处,粗面内质网明显扩张;15min组大鼠皮质神经元异染色质增多,核固缩,核膜锯齿样,自噬小体少见,细胞破裂内容物易见,海马神经元粗面内质网扩张,线粒体肿胀空泡化,线粒体嵴脱落,锯齿样核膜,高尔基体空泡化。（3）第三部分实验研究发现,正常组、假手术组、5min组、10min组、15min组的Beclin-1蛋白相对表达量服从正态分布（Kolmogorov-Smirnov=0.193,0.221,0.146,0.215,0.251,P=0.200,0.200,0.200,0.200,0.148）;经方差齐性检验,方差齐（Levene’s=0.944,P=0.473）,组间比较应用LSD检验。各组p62蛋白相对表达量服从正态分布（Kolmogorov-Smirnov=0.184,0.231,0.096,0.194,0.196,P=0.200,0.200,0.200,0.200,0.200）;经方差齐性检验,方差不齐（Levene’s=5.729,P=0.000）,组间比较应用Dunnett T3检验。各组LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白相对表达量服从正态分布（Kolmogorov-Smirnov=0.106,0.152,0.146,0.249,0.141,P=0.200,0.200,0.200,0.154,0.200）;经方差齐性检验,方差不齐（Levene’s=3.497,P=0.006）,组间比较应用Dunnett T3检验。与正常组相比,假手术组大鼠海马区的Beclin-1、p62、LC3Ⅱ/Ⅰ表达无明显变化（P=0.1 08,P=1.000,P=0.826）;与正常组相比,5min组大鼠海马区的 Beclin-1、p62、LC3Ⅱ/Ⅰ 表达升高（P=0.016,P=0.036,P=0.027）,10min 组大鼠海马区的 Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ 表达升高（P=0.000,P=0.000）,p62 表达升高（P=0.001）,15min 组大鼠海马区 Beclin-1、p62、LC3Ⅱ/Ⅰ 表达升高（P=0.001,P=0.000,P=0.000）。（4）第四部分实验研究,宫内窘迫HIBD造模后,模型组大鼠走出中央区域时间明显延长（P<0.01）,中央区域路程和总路程明显缩短（P<0.01,P<0.05）,活动次数明显减少（P<0.01）。而针刺组走出中央区域时间明显缩短（P<0.05）,中央区域路程和总路程明显增加（P<0.01,P<0.05）,活动次数显着增加（P<0.01）。在定位航行实验中,随着训练天数的增加,各组逃避潜伏期均呈逐渐缩短趋势,组间差异有统计学意义（P<0.001）。在第1～5天,模型组的逃避潜伏期均较正常组明显延长（P<0.05）,空间探索实验中第一次穿越平台象限时间显着延长（P<0.01）,目标象限停留时间显着缩短（P＜0.01）,穿越平台的次数显着减少（P<0.01）;而第1～5天的定位航行实验中,针刺组逃避潜伏期均较模型组明显缩短（P<0.05）,空间探索实验中第一次穿越平台象限时间明显缩短（P<0.05）,目标象限停留时间显着延长（P<0.01）,穿越平台的次数明显增多（P<0.05）。与正常组比较,HIBD模型组新生大鼠海马区LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、p62明显增多（P<0.001,P<0.001,P<0.001）;与HIBD模型组比较,针刺组新生大鼠海马区LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1表达升高（P＜0.001,P＜0.001）,p62表达下降（P<0.001）。假手术组大鼠前额叶神经元核周间隙正常,核膜连续光滑,细胞器完整,海马神经元核膜光源,核周间隙无改变,细胞器丰富,自噬小体偶见;HIBD模型组大鼠皮质神经元异染色质增多,核固缩,核膜锯齿样,自噬小体增多,细胞破裂内容物易见,海马神经元粗面内质网扩张,线粒体肿胀空泡化,线粒体嵴脱落,锯齿样核膜,高尔基体空泡化;针刺组大鼠皮质神经元核膜光滑,细胞器丰富,核周间隙较模型组变窄,自噬小体增多,细胞坏死现象未见,海马神经元粗面内质网轻微扩张,自噬小体增加。结论:HIBD新生大鼠海马神经元有自噬现象和神经元形态变性损伤等表现,证实了缺血缺氧可诱导自噬的发生,同时造成了神经元的损伤甚至坏死。针刺能够修复HIBD导致的神经功能缺损。针刺干预激活并促进了自噬水平,在一定程度上促进了受损神经元的修复。针刺激活自噬,促进了自噬水平,并修复受损神经元。揭示了缺血缺氧环境诱导下的自噬水平不足以修复神经元损伤,而促进进一步的自噬水平有利于神经元损伤的修复。
王思进[9]（2020）在《神经生长因子治疗新生儿缺氧缺血性脑病疗效的Meta分析》文中认为研究背景 新生儿缺氧缺血性脑病（Hypoxic ischemic encephalopathy,HIE）是指由于围产期缺氧窒息导致的脑部分或完全性缺氧缺血性损害,是引起新生儿死亡和远期后遗症的主要原因。在我国,神经生长因子在临床上用于治疗新生儿缺氧缺血性脑病已经较为广泛,但其临床疗效及安全性目前仍未明确。目的 评价神经生长因子治疗新生儿缺氧缺血性脑病的有效性及安全性。方法 通过计算机检索中国期刊全文数据库（CNKI）,维普中文科技期刊数据库,万方资源数据库,中国生物医学文献服务系统,PubMed,Cochrane Library,Web of science数据库进行全面的检索。收集以神经生长因子为干预措施治疗新生儿缺氧缺血性脑病的随机对照试验和半随机对照试验。文献检索时间范围为:从数据库建库至2019年11月。按照纳入和排除标准进行文献筛选和提取资料,应用Cochrane协作网的研究方法对文献进行质量评价,采用Cochrane协作网提供的RevMan5.3软件进行统计分析。研究结果 共纳入26篇文献,包括患儿2114例,Meta分析结果显示:（1）在临床有效率方面[OR=1.27（95%CI:1.22-1.34）,P<0.00001],差异有统计学意义,神经生长因子组治疗临床有效率高;（2）在提高行为神经评分方面,神经生长因子治疗后第7天[连续给药组RR=4.16（95%CI:3.62-4.70）,P<0.00001]、第14天[RR=4.20（95%CI:3.91-4.50）,P<0.00001]、第 28 天[RR=1.40（95%CI:0.92-1.89）,P<0.00001]时,差异均有统计学意义,神经生长因子治疗组优于对照组;而治疗后第7天[隔日给药组RR=0.16（95%CI:-0.11-0.43）,P=0.243]、治疗前后14天行为神经评分变化值[RR=2.26（95%CI:0.05-4.48）,P=0.05]两组之间差异无统计学意义;（3）在提高智力发育指数（MDI）方面,神经生长因子治疗组在 3 个月[RR=7.85（95%CI:5.14-10.56）,P<0.00001]、6 个月[RR=7.27（95%CI:4.22-10.33）,P<0.00001]、10 个月时[RR=7.72（95%CI:3.12-12.31）,P=0.0010]时,差异有统计学意义,神经生长因子治疗组优于对照组;（4）在提高心理运动发育指数（PDI）方面,神经生长因子治疗组在3个月[RR=8.13（95%CI:5.07-11.20）,P<0.00001]、6 个月[RR=8.65（95%CI:5.97-11.32）,P<0.00001]、10个月[RR=7.45（95%CI:2.18-12.72）,P=0.006]时,差异有统计学意义,神经生长因子组效果优于对照组;（4）在改善临床症状方面,神经生长因子治疗组在肌张力恢复所用的时间[RR=-2.38（95%CI:-2.55—-2.22）,P<0.00001]、惊厥消退所用的时间[RR=-2.38（95%CI:-3.09—-1.67）,P<0.00001]、意识恢复所用的时间[RR=-2.38（95%CI:-2.93—-1.84）,P<0.00001]、原始反射恢复所用的时间[RR=-2.59（95%CI:-3.13—-2.05）,P<0.00001]上均较少,差异有统计学意义。结论 本次Meta分析结果表明,神经生长因子治疗新生儿缺氧缺血性脑病具有较好的临床疗效,能够改善新生儿神经行为评分、促进智力和运动发育及缩短病程。因纳入研究的质量限制,仍需进行高质量的临床随机对照试验以明确此结论。
曾保起,高乐,周庆欣,杨继春,詹思延,孙凤[10]（2020）在《神经节苷脂治疗新生儿缺氧缺血性脑病的系统综述与Meta分析》文中进行了进一步梳理目的:评价单唾液酸四己糖神经节苷脂（GM1）治疗新生儿缺氧缺血性脑病（hypoxic ischemic encephalopathy,HIE）的疗效。方法:计算机检索PubMed、Embase、the Cochrane Library、ClinicalTrial.gov、CNKI、SinoMed、VIP和WanFang Data数据库,搜集有关GM1治疗新生儿HIE的随机对照试验（randomized controlled trial,RCT）,检索时限均为建库至2019年2月15日,两名研究者独立筛选文献、提取资料并评价纳入研究的偏倚风险后,使用Stata 14.0软件进行Meta分析。结果:共纳入34个RCT,包含2 685例受试者。①4项研究（348例）报告了死亡率,GM1组和对照组（常规治疗或加用其他神经营养药物）的差异无统计学意义[RR=0.46,95%CI（0.18,1.19）];②19项研究（1 527例）报告了后遗症发生率,GM1显着降低后遗症发生率[RR=0.40,95%CI（0.30,0.52）],同时GM1也可降低脑瘫发生率、癫痫发生率和智力低下发生率;③GM1可提高患儿出生后28 d的新生儿神经行为测定评分[MD=2.75,95%CI（1.45,4.04）]、发育商[MD=12.92,95%CI（8.55,17.29）]、智力发育指数[MD=10.36,95%CI（4.30,16.43）]和精神运动发育指数[MD=9.52,95%CI（4.77,14.27）]。结论:GM1可能不会减少新生儿HIE的死亡率,但可能会改善其远期神经发育情况、降低后遗症发生率。
二、中西医结合治疗新生儿缺氧缺血性脑病疗效观察（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、中西医结合治疗新生儿缺氧缺血性脑病疗效观察（论文提纲范文）
（1）热敏灸对缺氧缺血性脑病新生小鼠脑组织细胞凋亡的影响（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 引言 |
| 第一部分 文献研究 |
| 1 西医对NHIE的研究 |
| 2 中医对NHIE的研究 |
| 第二部分 实验研究 |
| 1 实验材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方案 |
| 1.3 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 热敏灸对HI模型小鼠尾温的影响 |
| 2.2 热敏灸对HI模型小鼠体重的影响 |
| 2.3 热敏灸对HI模型小鼠行为学测试结果的影响 |
| 2.4 热敏灸对HI模型小鼠脑梗死面积的影响 |
| 2.5 热敏灸对HI模型小鼠脑组织形态观察 |
| 2.6 热敏灸对HI模型小鼠脑组织TUNEL阳性细胞数的影响 |
| 2.7 热敏灸对HI模型小鼠脑组织caspase-9 阳性细胞数的影响 |
| 3 小结 |
| 讨论 |
| 1 实验动物的选择 |
| 2 HI模型的选择 |
| 2.1 气管夹闭术 |
| 2.2 延迟剖宫产术 |
| 2.3 动脉结扎法 |
| 3 热敏灸的概述 |
| 4 针灸大椎穴与脑病的探讨 |
| 5 腧穴热敏化的探讨 |
| 6 热敏灸治疗HI模型疗效的探讨 |
| 6.1 热敏灸对HI模型小鼠生理发育和行为学测试的探讨 |
| 6.2 热敏灸对HI模型的探讨 |
| 6.3 热敏灸对HI模型脑组织形态学的探讨 |
| 7 热敏灸治疗HI模型作用机制的探讨 |
| 7.1 热敏灸对HI模型小鼠脑组织TUNEL阳性细胞数的探讨 |
| 7.2 热敏灸对HI模型小鼠脑组织caspase-9阳性细胞数的探讨 |
| 结论 |
| 1 文献研究 |
| 2 实验研究 |
| 本研究创新与不足之处 |
| 创新之处 |
| 不足之处 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 作者简介 |
| 答辩委员会名单 |
（2）槐杞黄颗粒对新生大鼠HIE动物模型的疗效与作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 引言 |
| 第一部分 文献研究 |
| 1.新生儿缺氧缺血性脑病的现代临床医学研究 |
| 1.1 新生儿缺氧缺血性脑病概述 |
| 1.2 新生儿缺氧缺血性脑病的致病因素 |
| 1.3 新生儿缺氧缺血性脑病的发病机制 |
| 1.4 新生儿缺氧缺血性脑病的临床诊断标准及分级 |
| 1.5 新生儿缺氧缺血性脑病辅助诊断 |
| 1.6 新生儿缺氧缺血性脑病的临床治疗 |
| 2.新生儿缺氧缺血性脑病的中医研究 |
| 2.1 新生儿缺氧缺血性脑病的中医病名及诊断依据 |
| 2.2 新生儿缺氧缺血性脑病的中医病因病机 |
| 2.3 新生儿缺氧缺血性脑病的中医治疗 |
| 第二部分 实验药物的选择依据 |
| 1.槐杞黄颗粒的治法功用符合新生儿的特殊体质 |
| 2.槐杞黄颗粒的治法功用符合新生儿HIE的生理病理及其中医病因病机特点 |
| 3.槐杞黄颗粒的方药分析与相关研究进展 |
| 3.1 槐杞黄颗粒的方解 |
| 3.1.1 槐耳 |
| 3.1.2 枸杞子 |
| 3.1.3 黄精 |
| 3.2 槐杞黄颗粒的现代研究进展 |
| 3.3 总结 |
| 第三部分 HIE动物模型的选择 |
| 第四部分 动物实验部分 |
| 实验一 、槐杞黄颗粒干预作用的动物行为学和病理学观察 |
| 1.实验动物与材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.实验小结 |
| 实验二 、观察槐杞黄颗粒对新生儿HIE大鼠模型S100B含量表达的干预作用 |
| 1.S100B对于新生儿HIE的临床价值 |
| 2.样本分组及实验材料 |
| 3.实验方法 |
| 4.实验结果 |
| 5.实验小结 |
| 实验三 、观察槐杞黄颗粒对新生儿HIE大鼠模型Caspase-3 含量的影响 |
| 1.Caspase-3 对于新生儿HIE的临床价值 |
| 2.样本分组及实验材料 |
| 3.实验方法 |
| 4.实验结果 |
| 5.实验小结 |
| 结论 |
| 1.文献研究部分 |
| 2.实验研究部分 |
| 创新点 |
| 问题与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附件一 综述 |
| 参考文献 |
| 附件二:在读期间公开发表的学术论文、专着及科研成果 |
（3）乌司他丁治疗新生儿缺氧缺血性脑病的临床研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（4）针刺对宫内窘迫缺氧缺血性脑损伤大鼠新生神经细胞凋亡的影响研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 目录 |
| 前言 |
| 第1章 文献研究 |
| 1.1 新生儿缺氧缺血性脑病的现代医学治疗进展 |
| 1.1.1 新生儿缺氧缺血性脑病和宫内窘迫 |
| 1.1.2 新生儿缺氧缺血性脑病诊断标准 |
| 1.1.3 现代医学治疗进展 |
| 1.2 新生儿缺氧缺血性脑病的中医治疗进展 |
| 1.2.1 古代中医对HIE的认识 |
| 1.2.2 现代中医对HIE的治疗现状 |
| 1.2.3 中医在新生儿HIE领域的现状和展望 |
| 1.3 神经干细胞凋亡基因研究进展 |
| 1.3.1 神经干细胞 |
| 1.3.2 细胞凋亡 |
| 1.3.3 小结 |
| 第2章 实验研究 |
| 2.1 实验一 宫内HIBD新生大鼠出生14天内行为学和脑组织HE染色 |
| 2.1.1 材料与方法 |
| 2.1.2 结果 |
| 2.1.3 讨论 |
| 2.2 实验二 针刺对HIBD新生大鼠体重的影响 |
| 2.2.1 材料与方法 |
| 2.2.2 结果 |
| 2.2.3 讨论 |
| 2.3 实验三 针刺对HIBD新生大鼠神经细胞凋亡的影响 |
| 2.3.1 材料与方法 |
| 2.3.2 结果 |
| 2.3.3 讨论 |
| 2.4 实验四 针刺对HIBD新生大鼠CASPASE-3的影响 |
| 2.4.1 材料与方法 |
| 2.4.2 结果 |
| 2.4.3 讨论 |
| 2.5 实验五 针刺对HIBD新生大鼠新生神经细胞的影响 |
| 2.5.1 材料与方法 |
| 2.5.2 结果 |
| 2.5.3 讨论 |
| 2.6 实验六 针刺对HIBD新生大鼠14-3-3的影响 |
| 2.6.1 材料与方法 |
| 2.6.2 结果 |
| 2.6.3 讨论 |
| 第3章 实验间的相关分析与讨论 |
| 3.1 各指标之间的关系 |
| 3.1.1 直观认识 |
| 3.1.2 多元线性回归分析 |
| 3.2 针刺1组和针刺2组效果比较 |
| 3.2.1 两组对各指标的影响比较 |
| 3.2.2 原因分析 |
| 3.3 存在问题与展望 |
| 3.3.1 新生大鼠14天前标记困难使体重观察不连续 |
| 3.3.2 BrdU标记的增殖细胞种类不明 |
| 3.3.3 假手术组设置多余 |
| 3.3.4 针刺组参数设计的优缺点分析 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录一 HE染色 |
| 附录二 凋亡细胞 |
| 附录三 CASPASE-3阳性细胞 |
| 附录四 BRDU阳性细胞 |
| 附录五 NESTIN阳性细胞 |
| 附录六 14-3-3阳性细胞 |
| 研究生在学期间发表论文情况 |
| 中英文对照与缩略词表 |
| 致谢 |
（5）选择性头部亚低温疗法联合高压氧治疗新生儿缺氧缺血性脑病的效果及对患儿神经细胞因子水平、NBNA评分的影响（论文提纲范文）
| 1 资料与方法 |
| 1.1 一般资料 |
| 1.2 纳入及排除标准 |
| 1.3 方法 |
| 1.4 观察指标及疗效评价标准 |
| 1.5 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 两组患儿的临床疗效比较 |
| 2.2 两组患儿治疗前、后的神经细胞因子水平比较 |
| 2.3 两组患儿治疗前、后的NBNA、Gesell评分比较 |
| 2.4 两组患儿治疗前、后的炎性因子水平比较 |
| 3 讨论 |
（6）黄芪甲苷调控MMP-9介导NLRP3/Caspase-1信号通路改善缺氧缺血性脑损伤的分子机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 论文一 缺氧缺血性脑损伤早期MMP-9、NLRP3和Caspase-1 变化的研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文二 MMP-9 介导NLRP3/Caspase-1 信号通路在氧糖剥夺海马神经元细胞中的机制研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文三 黄芪甲苷调控MMP-9 介导NLRP3/Caspase-1 信号通路对缺氧缺血性脑损伤的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文四 黄芪甲苷调控MMP-9 介导NLRP3/Caspase-1 信号通路对氧糖剥夺海马神经元细胞作用的分子机制 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 黄芪的生物活性及其对神经系统保护作用机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（7）基于自噬和炎症探讨“智三针”改善HIBD大鼠认知障碍分子机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献综述 |
| 第一节 围产期缺氧缺血性脑病的现代医学研究进展 |
| 一、HIE的流行病学现状、诊断和预后 |
| 二、HIE的病理学机制研究进展 |
| 三、HIE的现代医学治疗进展 |
| 第二节 自噬流与NLRP3炎症体介导的焦亡参与HIBD发生发展 |
| 一、自噬流参与调控HIBD神经元死亡 |
| 二、NLRP3炎症体介导的焦亡参与调控HIBD神经元死亡 |
| 三、自噬作用介导NLRP3炎症体活化的机制 |
| 第三节 针灸治疗HIE的研究进展 |
| 一、针灸治疗HIE的临床疗效研究进展 |
| 二、针刺治疗HIE的机制研究进展 |
| 第二章 实验研究 |
| 第一节 智三针对HIBD新生大鼠一般生长发育状况的影响 |
| 一、实验用品 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 第二节 智三针对HIBD新生大鼠行为学和脑部病理形态的影响 |
| 一、实验用品 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 第三节 智三针修复HIBD新生大鼠海马区受损神经元的相关分子机制 |
| 一、实验用品 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 第四节 智三针调控自噬流抑制HIBD新生大鼠NLRP3炎症体活化的机制 |
| 一、实验用品 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 附件1:统计学处理合格证明 |
（8）改良宫内窘迫脑损伤新生大鼠模型及针刺作用的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 ABSTRACT 引言 第一章 文献研究 |
| 第一节 新生儿缺血缺氧脑损伤的定义及认识 |
| 一、新生儿缺血缺氧脑损伤的定义及西医认识 |
| 二、新生儿缺血缺氧脑损伤的中医认识 |
| 第二节 新生儿缺血缺氧脑损伤的发病机制研究 |
| 一、神经炎症反应参与新生儿缺血缺氧脑损伤 |
| 二、神经元自噬对神经元次级坏死的调控作用 |
| 第三节 新生儿缺血缺氧脑损伤的中西医治疗现状 |
| 一、新生儿缺血缺氧脑损伤的西医治疗现状 |
| 二、新生儿缺血缺氧脑损伤的中医治疗现状 |
| 第四节 针刺治疗新生儿缺血缺氧脑损伤的作用机制研究 |
| 一、新生儿缺血缺氧脑损伤的模型制备研究现状 |
| 二、针刺治疗新生儿缺血缺氧脑损伤的作用机制研究 第二章 实验研究 |
| 第一节 不同时长缺血缺氧对HIBD新生大鼠神经行为学和学习记忆能力的影响 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、实验讨论 |
| 第二节 不同时长的缺血缺氧对HIBD新生大鼠脑组织病理形态的影响 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、实验讨论 |
| 第三节 不同时长缺血缺氧对HIBD新生大鼠海马神经元自噬的影响 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、实验讨论 |
| 第四节 针刺调控自噬抑制缺血性HIBD模型大鼠神经元炎性坏死的机制研究 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、实验讨论 结语 参考文献 附录 在校期间发表论文情况 致谢 附件1:统计学处理合格证明 |
（9）神经生长因子治疗新生儿缺氧缺血性脑病疗效的Meta分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 研究的设计与方法 |
| 1.1 研究的设计 |
| 1.2 研究对象与方法 |
| 1.3 文献的来源及检索方法 |
| 1.4 文献的纳入与排除标准 |
| 1.5 疗效判定指标 |
| 1.6 文献的数据提取及方法学质量评价方法 |
| 1.7 统计学分析方法 |
| 第二章 结果 |
| 2.1 文献检索及筛选结果 |
| 2.2 纳入文献的基本特征 |
| 2.3 纳入文献的质量评价 |
| 2.4 Meta分析结果 |
| 第三章 讨论 |
| 第四章 结论 |
| 参考文献 |
| 附录1 随机对照试验信息提取表 |
| 附录2 英汉缩略词对照表 |
| 成果 |
| 致谢 |
（10）神经节苷脂治疗新生儿缺氧缺血性脑病的系统综述与Meta分析（论文提纲范文）
| 1 资料与方法 |
| 1.1 纳入标准 |
| 1.1.1 研究类型 |
| 1.1.2 研究对象 |
| 1.1.3 干预措施 |
| 1.1.4 结局指标 |
| 1.2 排除标准 |
| 1.3 文献检索策略 |
| 1.4 文献筛选与数据提取 |
| 1.5 纳入研究的偏倚风险评价 |
| 1.6 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 文献筛选流程及结果 |
| 2.2 纳入研究的特征 |
| 2.3 纳入研究的偏倚风险评价结果 |
| 2.4 Meta分析结果 |
| 2.4.1 主要结局指标 包括死亡率和后遗症发生率。 |
| 2.4.2 次要结局指标 |
| 2.5 发表偏倚分析 |
| 3 讨论 |
四、中西医结合治疗新生儿缺氧缺血性脑病疗效观察（论文参考文献）
- [1]热敏灸对缺氧缺血性脑病新生小鼠脑组织细胞凋亡的影响[D]. 刘结民. 江西中医药大学, 2019(02)
- [2]槐杞黄颗粒对新生大鼠HIE动物模型的疗效与作用机制研究[D]. 黄天愚. 成都中医药大学, 2019(04)
- [3]乌司他丁治疗新生儿缺氧缺血性脑病的临床研究[D]. 王文娟. 泰山医学院, 2018(06)
- [4]针刺对宫内窘迫缺氧缺血性脑损伤大鼠新生神经细胞凋亡的影响研究[D]. 李星儿. 广州中医药大学, 2012(10)
- [5]选择性头部亚低温疗法联合高压氧治疗新生儿缺氧缺血性脑病的效果及对患儿神经细胞因子水平、NBNA评分的影响[J]. 田玉凤,曹亚敏,王瑜,崔巍,郭丽丽,闫红霞. 临床医学研究与实践, 2022(07)
- [6]黄芪甲苷调控MMP-9介导NLRP3/Caspase-1信号通路改善缺氧缺血性脑损伤的分子机制[D]. 李娜. 辽宁中医药大学, 2021(02)
- [7]基于自噬和炎症探讨“智三针”改善HIBD大鼠认知障碍分子机制[D]. 秦玮珣. 广州中医药大学, 2020(06)
- [8]改良宫内窘迫脑损伤新生大鼠模型及针刺作用的机制研究[D]. 林天霸. 广州中医药大学, 2020(06)
- [9]神经生长因子治疗新生儿缺氧缺血性脑病疗效的Meta分析[D]. 王思进. 南方医科大学, 2020(01)
- [10]神经节苷脂治疗新生儿缺氧缺血性脑病的系统综述与Meta分析[J]. 曾保起,高乐,周庆欣,杨继春,詹思延,孙凤. 药物流行病学杂志, 2020(01)