一、THE PREPARATION OF FRUCTOSE-MODIFIED CHITOSAN MICROCARRIERS AND CULTURE OF PRIMARY RAT HEPATOCYTES(论文文献综述)
汪凯[1](2020)在《口服次血红素六肽改善2型糖尿病肝脏胰岛素抵抗的机制研究》文中指出2型糖尿病是一种由多因素引起的代谢性疾病,以高血糖、胰岛素抵抗为主要特征。2型糖尿病的发病率持续增加,已成为全球最大的公共健康问题之一。研究表明,过量活性氧(reactive oxygen species,ROS)会引起氧化应激,导致细胞功能障碍,包括能量代谢紊乱、细胞信号受损、细胞转运机制障碍、免疫激活和炎症。慢性氧化应激是导致胰岛素抵抗、代谢失调、糖尿病等疾病发展的潜在因素。因此,抗氧化应激药物的研发是治疗2型糖尿病的新思路。次血红素三肽(Deuterohemin-βAla-His-Lys,Dh HP-3)是本实验室基于天然过氧化物酶(microperoxidase-11,MP-11)设计合成的新型过氧化物酶模拟物。前期研究发现,Dh HP-3能够降低2型糖尿病大鼠血糖,激活PI3K/AKT信号通路抑制高糖诱导的胰岛β细胞凋亡。Dh HP-3因其较短的半衰期及较快的血浆清除率而采用注射给药。注射导致依从性差,且有感染的风险,因此,口服途径仍是最理想的给药方式。基于此,我们设计合成了次血红素六肽(Deuterohemin-βAla-His-Thr-Val-Glu-Lys,Dh HP-6)。前期研究发现,Dh HP-6的相对酶活要高于Dh HP-3。Dh HP-6在人工胃肠液及血浆中具有较高稳定性,且降解产物的相对酶活与Dh HP-6一致。为了探讨口服Dh HP-6对于2型糖尿病的影响,本论文主要从三个方面进行了研究:1.本文通过高脂饮食联合腹腔注射链脲霉素构建了2型糖尿病小鼠模型,从动物水平探究了口服Dh HP-6对于2型糖尿病的影响。结果表明,口服Dh HP-6能够有效降低2型糖尿病小鼠的血糖,改善胰岛素抵抗。血清学研究发现,Dh HP-6能够增强SOD、GSH及CAT的活性,降低MDA的含量,从而降低氧化应激水平;此外,Dh HP-6还能降低T-CHO、TG及LDL-C含量,增加HDL-C的含量,改善2型糖尿病小鼠的血脂紊乱;通过对肝功指标(AST、ALT和ALP)的检测及肝脏形态结构的观察发现,Dh HP-6能够有效维持2型糖尿病小鼠肝脏的功能及结构完整性。同时,通过对胰岛和肾脏形态结构的观察发现,Dh HP-6能够有效改善2型糖尿病小鼠胰岛萎缩及空泡变性,维持肾小球结构完整性。值得一提的是,Dh HP-6能够显着降低2型糖尿病小鼠FBPase和G6Pase含量,升高HK含量;肝脏PAS染色发现,Dh HP-6能够有效促进2型糖尿病小鼠肝脏糖原的合成。通过western blot分析发现,Dh HP-6能够促进IRS-1(Tyr632)、AKT(Ser473)及GSK-3β(Ser9)的磷酸化,抑制IRS-1(Ser307)的磷酸化,激活2型糖尿病小鼠肝脏PI3K/AKT信号通路;同时,Dh HP-6能够促进AMPK的Thr172磷酸化,抑制G6Pase及PEPCK的表达,激活2型糖尿病小鼠AMPK信号通路;此外,Dh HP-6促进了Nrf2的表达,抑制了Keap1的表达,改善2型糖尿病小鼠的抗氧化系统。因此,Dh HP-6能够激活2型糖尿病小鼠PI3K/AKT、AMPK及Nrf2-Keap1信号通路,改善其肝脏胰岛素抵抗症状。2.通过葡萄糖胺诱导建立了Hep G2细胞胰岛素抵抗模型,进一步从细胞水平探究了Dh HP-6改善肝脏胰岛素抵抗的作用机制。研究结果表明,Dh HP-6能够有效抑制葡萄糖胺诱导引起的细胞损伤,促进Hep G2细胞的葡萄糖吸收及糖原合成,抑制ROS的生成,改善线粒体功能损伤。Western blot结果表明,Dh HP-6能够激活Hep G2细胞胰岛素抵抗模型的PI3K/AKT、AMPK及Nrf2-Keap1信号通路。当加入PI3K的特异性抑制剂LY294002后,PI3K/AKT信号通路并不能完全被抑制,同时发现,LY294002也能部分抑制AMPK及Nrf2-Keap1信号通路;当加入AMPK的抑制剂复合物C后,AMPK信号通路不能被完全抑制,而PI3K/AKT及Nrf2-Keap1信号通路也被部分抑制。由此可知,PI3K/AKT、AMPK及Nrf2-Keap1信号通路并非独立作用,而是相互影响相互促进的。因此,Dh HP-6能够激活PI3K/AKT、AMPK及Nrf2-Keap1信号通路改善葡萄糖胺诱导的Hep G2细胞胰岛素抵抗。3.为了进一步探讨Dh HP-6的口服递送策略,我们合成了靶向叶酸受体的叶酸-羧甲基壳聚糖,制备了由Dh HP-6、细胞穿膜肽、叶酸-羧甲基壳聚糖组成的微球,并初步验证了其作为Dh HP-6口服递送系统的可行性。结果表明,相同浓度下,细胞穿膜肽RR-9相较于FI-6和LK-18能够显着降低Caco-2细胞模型的跨膜电阻,降低细胞膜连续性,因此,选用RR-9进行后续实验。叶酸-羧甲基壳聚糖对Caco-2细胞几乎没有毒性,且黏附能力比羧甲基壳聚糖更强。Dh HP-6-细胞穿膜肽-叶酸-羧甲基壳聚糖微球在人工胃液中释放缓慢,在人工肠液中释放显着变快。在Caco-2细胞口服吸收模型中,Dh HP-6-细胞穿膜肽-叶酸-羧甲基壳聚糖微球能够显着促进Dh HP-6的跨膜转运。因此,Dh HP-6-细胞穿膜肽-叶酸-羧甲基壳聚糖微球能够增强壳聚糖对于Caco-2细胞的黏附能力,促进Dh HP-6的跨膜转运。综上,Dh HP-6通过激活PI3K/AKT、AMPK及Nrf2-Keap1信号通路改善2型糖尿病肝脏胰岛素抵抗;此外,Dh HP-6-细胞穿膜肽-叶酸-羧甲基壳聚糖微球作为Dh HP-6口服递送系统具有可行性。
韦佼君[2](2018)在《聚合物短纤维作为可注射药物载体和细胞球培养支架的研究》文中提出药物筛选和组织修复是生物医学领域中的重要研究课题。在药物筛选方面,体外检测药物的药效和毒性是药物进入临床研究前的一个重要环节。细胞二维(2D)培养是目前常用的体外药物筛选模型,但通过该模型得到的检测结果与动物实验结果,甚至是临床实际效果相差甚远。在组织修复领域,通常采用器官移植的方式来实现组织或器官修复,而大部分替代的组织器官主要来源于器官捐献、自身组织或动物组织等。然而采用器官移植的方法修复组织,常常受限于器官供体的数量有限,移植后与宿主发生免疫排斥反应以及使用自身组织修复容易造成机体的二次伤害等。因此构建具有与组织器官相似功能结构的类组织,则能够为药物筛选提供理想的体外模型以及替代器官移植实现组织修复。因此本论文旨在一方面以短纤维作为支架培养肝细胞球体、肿瘤细胞球体以及间充质干细胞球体,用于药物筛选、类肿瘤组织模拟、软骨修复和治疗关节炎,另一方面以可注射短纤维作为药物控释载体通过瘤内注射的方式治疗肿瘤,并且实现药物的局部缓释。建立一种可靠的,肝细胞球状体大小可控的以及可适用于高通量筛选的体外肝模型用于药物筛选仍存在巨大的挑战挑战性。本论文设计将短纤维作为支架,用于制备尺寸可控的,且具有肝特异性功能和表型的肝细胞球体。短纤维的长度、半乳糖和RGD的接枝密度能够调控细胞球体的大小及功能,长度为50 μm、PSMA混纺比例为95%、半乳糖和RGD接枝密度分别为135.7±4.5 nmol/mg和14.8±0.5 pmol/mg的短纤维培养得到的肝细胞球体具有最佳的肝特异性功能表达。短纤维分布在整个细胞球体中,与肝细胞紧密地相互作用从而形成较为致密的细胞球体。与不含支架的肝细胞球体相比,在对五种药物(甲苯磺丁脲、S-华法林、咪达唑仑、睾酮和对乙酰氨基酚)代谢清除率的考察过程中,含短纤维的细胞球体作为药物模型具有更高的代谢清除率,能够更好地预测体内药物清除率,其体内体外相关值(R2)为0.886。此外,这些肝细胞球体的药物代谢能力还表现在对药物代谢酶的诱导剂和抑制剂具有高度敏感,并且在20天的培养过程中一直保持对药物的响应性,为确定药物-药物的相互作用提供了一种有效的体外模型。因此,通过与短纤维共培养得到的肝细胞球体是一种能够在体外长时间维持肝细胞功能的简便操作方法,可推广至传统的多孔板和微芯片设备中培养,后用于高通量药物筛选。肝脏能够调节葡萄糖代谢和脂代谢。利用半乳糖修饰的PSMA/PS短纤维(gSF)作为支架分别与小鼠原代肝细胞(rPH)和肝癌细胞系(HepG2)共培养获得肝细胞球体模拟肝组织用于糖脂代谢的研究。与HepG2细胞球体相比,rPH细胞球体在葡萄糖消耗、糖原合成、糖异生、对胰岛素和胰高血糖素等葡萄糖调节激素的敏感性方面,表现出较强的葡萄糖代谢能力。HepG2细胞球体则显示出比rPH细胞球体更强的胆固醇和甘油三酯合成水平。通过对磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)和腺苷5’-单磷酸激活的蛋白激酶(AMPK)的活性表征,验证了上述实验结果。采用该模型研究药物的敏感性,含半乳糖修饰的短纤维肝细胞球体对升血糖药物(地塞米松)、降血糖药物(二甲双胍)、胰岛素增敏剂(吡格列酮)以及降脂药物(二甲双胍和洛伐他汀)均表现出较好的响应性。因此rPH和HepG2细胞球体可分别用作体外葡萄糖和脂质代谢研究模型,并且可用于筛选代谢紊乱疾病(如糖尿病和肥胖症等)的治疗药物。在全身性给药后,只有一小部分药物进入肿瘤,有许多障碍因素阻止药物向肿瘤内渗透。为克服这些障碍,通过在瘤内注射含抗癌药物的载药短纤维,使药物在靶点部位积累,从而达到治疗效果。制备了 5(FF-5)、20(FF-20)和50 μm(FF-50)的载HCPT短纤维,分散到2%海藻酸钠溶液中,注射性好。FF-5、FF-20和FF-50的药物释放曲线趋势相似,但纤维长度越长药物释放速度越慢。体外细胞毒性实验表明,FF-5和FF-20比FF-50会引起更高的细胞毒性和细胞凋亡率。短纤维瘤内注射小鼠H22皮下肿瘤后,长度越长的短纤维在瘤内的滞留效果更好。然而,载HCPT的纤维膜虽然在瘤内的滞留效果最好,但其抗肿瘤活性较低。与FF-5和FF-50相比,FF-20在瘤内释放HCPT在肿瘤内具有最佳的空间分布效果,这对动物存活、肿瘤生长抑制和肿瘤细胞凋亡诱导等具有显着的影响。上述结果表明肿瘤内注射载药短纤维是一种有效的治疗实体肿瘤的策略,通过调控载药短纤维在肿瘤内的滞留效果以及释放药物在肿瘤组织内的空间分布,来降低药物的全身毒性并提升治疗效果。为构建类肿瘤模型,以聚乳酸-聚乙二醇共聚物/聚环氧乙烷(PELA/PEO)混纺短纤维作为支架,携载促乳腺癌细胞系(MCF-7)增殖的17β-雌二醇(E2)药物,与细胞共培养构建MCF-7球体。PEO的含量和E2载药量会影响药物的释放速度、细胞的活力、增殖及粘附。结果表明PEO添加比例为3%、E2载药量0.01%的短纤维与MCF-7共培养6天后,即可得到直径为250 μm的成熟类恶性肿瘤细胞球体。该细胞球体在结构和因子表达上与恶性肿瘤类似,即中心细胞生长密集、内部缺氧,与恶性肿瘤的相似性较高;通过表征E-钙粘蛋白表达、恶性因子分泌、上皮-间充质转化相关基因表达等,证明该细胞球体具有恶性侵袭转移的倾向;癌症干细胞(CSC)表型基因表达和体内肿瘤构建表明该细胞球体具有较强的致瘤性。所有结果表明MCF-7球体与恶性实体瘤类似,因此可以作为体外类肿瘤模型用于新药的研发和肿瘤疾病的研究。采用组织工程的方法修复软骨缺损,将载有软骨诱导药物kartogenin(KGN)的PELA短纤维作为支架与骨髓间充质干细胞(BMSC)共培养得到有软骨分化潜能的细胞球体,为避免细胞流失,以可注射水凝胶包裹BMSC球体填充软骨缺损部位。结果表明KGN的载药浓度、水凝胶的机械性能和注射过程会影响BMSC球体的活力和分化能力,其中通过调节凝胶的浓度、反应比例以及在凝胶中添加短纤维可有效调控凝胶的机械强度。最终凝胶浓度为3%,巯基/丙烯双键(HS/Acr)反应比例为1/1.2,短纤维掺杂浓度为1%,以及KGN短纤维载药量为0.1%的复合支架在体外诱导BMSC分化成软骨细胞的效果最理想;体内缺损软骨修复结果表明,该复合凝胶携载BMSC球体治疗6周后缺损部位被大量的成熟新生软骨填充,12周后缺损部位得到了完全的修复。随后将该组织工程软骨与抗关节炎药物塞来昔布(CLX)结合并治疗骨关节炎,将CLX载入增强凝胶力学强度的短纤维上,调节药物浓度对BMSC无毒副作用;结果表明二者的协同作用能够较大程度地抑制关节炎的发展,12周后关节炎症状缓解并且病变引起的软骨缺损得到了修复。综上所述,本论文以短纤维作为可注射的药物控释载体用于瘤内注射治疗皮下肿瘤;作为体外三维培养细胞球体的支架,分别构建了肝脏、肿瘤以及软骨相关的细胞球体,可有效用于药物代谢模型、降糖降脂药物的筛选、类肿瘤的构建、软骨组织的修复和关节炎治疗;研究结果为体外药物筛选模型、器官修复和疾病治疗等提供了新思路和手段。
戴雅彬[3](2017)在《甘草次酸受体介导的雷公藤内酯醇纳米粒对原位肝癌治疗的研究》文中进行了进一步梳理肝靶向药物递送系统用于提高肝药物制剂的治疗效率,近年来引起了广泛的关注,尤其在减少药物剂量和显着降低毒副作用方面有特殊的作用。其中,甘草次酸(Glycyrrhetinic acid,GA)修饰的壳聚糖(Chitosan,CTS)作为药物递送的肝靶向载体也被广泛研究。本文成功制备了甘草次酸-壳聚糖/雷公藤内酯醇(Glycyrrhetinic acid-Chitosan/triptolide,GA-CTS/TPL)纳米粒,考察其体外表征,对其体内外抗肿瘤药效学和体内药代动力学进行了研究。第一章GA-CTS/TPL纳米粒的制备GA和CTS通过化学合成法合成甘草次酸壳聚糖(Glycyrrhetinic acid-Chitosan,GA-CTS)载体,红外光谱和核磁共振氢谱均证实成功合成。采用离子交联法将GA-CTS载体与雷公藤内脂醇(triptolide,TPL)联合制备成纳米粒,测得其粒径为(197±9)nm,多分散系数为(0.30±0.03),透射电镜下观察到纳米粒呈圆形,分布均匀,无团聚现象。测得包封率为(34.8±2.8)%,载药量为(0.220±0.011)%。体外释放实验证实GA-CTS/TPL纳米粒在pH为7.4、6.8磷酸盐缓冲液和pH为7.4的血浆释放介质中具有较明显的缓释效果,其中在pH为7.4的磷酸盐缓冲液中具有较好的缓释效果,释放曲线符合一级动力学方程。第二章GA-CTS/TPL纳米粒的抗肿瘤药效学研究为了进一步研究GA-CTS/TPL纳米粒的体外抗肿瘤作用,以MTT法检测GA-CTS/TPL纳米粒、TPL溶液对HepG2、MCF、HL-60细胞的抑制作用,结果表明可剂量依赖性地抑制上述肿瘤细胞。在体外肝癌靶向性的研究中发现,GA-CTS/TPL纳米粒对L02细胞的抑制作用小于TPL溶液。荧光显微镜观察细胞摄取实验中发现5(6)-异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的GA-CTS纳米粒在HepG2细胞中的荧光强度大于CTS纳米粒,而在L02细胞中则相对较弱。通过尾静脉给药研究GA-CTS/TPL纳米粒对裸鼠肝原位移植瘤的药效学。结果显示:GA-CTS/TPL纳米粒组(0.2 mg/kg)、TPL溶液组(0.2 mg/kg)、5-氟尿嘧啶(5-FU)组(10 mg/kg)的抑瘤率分别为58.3%、51.6%、48.70%,各给药组的抑瘤率与空白组相比均具有显着性差异。同时对各给药组肝脏的损伤程度进行相关指标的测定,数据显示只有GA-CTS/TPL纳米粒组的谷丙转氨酶/谷草转氨酶(ALT/AST)比值大于1,其它组别都小于1。与TPL溶液组相比,GA-CTS/TPL纳米粒对裸鼠肝原位移植瘤有较好的抑制作用和较小的肝脏损伤。第三章GA-CTS/TPL纳米粒在肝原位移植瘤小鼠体内的药动学研究进一步研究GA-CTS/TPL纳米粒在肝原位移植瘤小鼠中的药动学和组织分布。按0.2 mg/kg的剂量分别对小鼠尾静脉注射GA-CTS/TPL纳米粒与TPL溶液。药动学数据采用DAS软件进行处理。GA-CTS/TPL纳米粒在肝原位移植瘤小鼠血浆中的Cmax、t1/2、MRT0-180 min、AUC0-180 min、AUC0-∞分别是TPL溶液的1.03、2.16、1.76、1.55、1.81倍,且对于t1/2、Vz、CLz、AUC0-180 min、AUC0-∞在上述两组间的结果差异均有统计学意义。相对于TPL溶液而言,GA-CTS/TPL纳米粒在血浆中的滞留时间延长,药时曲线下面积较大。组织分布中发现,AUC0-180min在两组的肝脏和肺中具有显着性差异(P<0.05),MRT0-180 min在两组的肝肿瘤中具有显着性差异(P<0.05)。靶向效率用选择靶向效率T%进行分析,结果显示对于溶液组,纳米粒在肝脏和肝肿瘤的T%均增大,而在其它组织器官的T%有所下降。结论:为了增强TPL的抗肝肿瘤作用,降低TPL对肝脏的损伤,合成了具有肝靶向性的GA-CTS载体材料,并制备了甘草次酸受体介导的GA-CTS/TPL纳米粒。纳米粒粒径小,具有缓释作用,细胞实验证实纳米粒能够选择性作用于肝癌细胞。药效学实验中发现对裸鼠肝原位移植瘤有较好的抑制作用,同时对正常肝组织的损伤较小。药动学实验中GA-CTS/TPL纳米粒在肝原位移植瘤小鼠的血浆中有着较长的滞留时间和较大的药时曲线下面积。通过组织分布也证实了其靶向于肝肿瘤,同时降低了在其它组织的分布,药动学的数据也验证了药效学的结果。GA-CTS/TPL纳米粒为治疗原位肝癌的研究提供新的思路。
贺颖[4](2016)在《微载体/细胞复合物的共形微囊治疗肝损伤和骨质疏松的研究》文中进行了进一步梳理传统细胞微囊含大量冗余凝胶,移植体积大、移植部位受限,囊外营养导入和囊内治疗性分泌物导出困难。本文将细胞培养在微载体上,用双水相乳化法将其包裹在海藻酸-壳聚糖-海藻酸(ACA)共形微囊中,并探索其治疗肝损伤和骨质疏松两种疾病的可行性。研究包括3个部分:(1)微载体的ACA共形微囊制备与性能表征。制备Cytodex-3微载体的ACA共形微囊,与蛋白溶液共孵育探究其囊膜对牛血清白蛋白(BSA)、免疫球蛋白IgG的透过性,用球磨法和挤压法考察其在1个月内的机械稳定性,用原子力显微镜扫描微囊的表面形貌,测定其表面粗糙度。结果表明,0.3%、0.6%及1.2%(w/v)的壳聚糖溶液制备的共形微囊均能允许BSA透过,并阻隔IgG透过;3组微囊在1个月内均能耐受球磨法中的剪切力,且在挤压实验中表现出相似的应力-时间曲线,平均最大应力约为1.7-2.2 g,与传统微囊无明显差异;共形微囊的平均偏差粗糙度和均方根粗糙度分别为6.73±1.81 nm、8.23±2.03 nm,与传统细胞微囊相近。(2)Cytodex-3微载体/L02细胞复合物(microC/L02)的共形微囊治疗肝损伤症研究。制备microC/L02的ACA共形微囊,采用水溶性四唑盐法、5(6)-羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯/碘化丙啶(CFDA-SE/PI)染色法考察微囊化后细胞的活性;酶联免疫吸附法(ELISA)和尿素酶-谷氨酸脱氢酶动力学法分别检测其体外培养上清液中的人白蛋白和尿素水平;将细胞微囊移植至对乙酰氨基酚所致的肝损伤大鼠模型中,在60天内检测移植组、模型组、正常组大鼠的血清谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、白蛋白(ALB)的水平;肝组织苏木精/伊红(HE)染色观察肝小叶中细胞形态。结果显示,微囊化后细胞存活良好,活性可在16 h内恢复正常;共形细胞微囊在体外可持续合成人白蛋白和尿素;移植细胞微囊后大鼠血清ALT、TBIL、ALB可在60天内维持正常水平;回收的移植微囊90%以上保持完整,细胞维持存活;HE染色显示移植组大鼠肝脏细胞坏死和水肿均明显少于模型组。(3)Cytodex-3微载体/胰岛素样生长因子1基因重组中国仓鼠卵巢细胞复合物(microC/rCHO-IGF-1)的共形微囊治疗骨质疏松症研究。制备microC/rCHO-IGF-1的ACA共形微囊,采用水溶性四唑盐法、CFDA-SE/PI染色法考察微囊化后细胞的活性;ELISA法测定其培养上清液中IGF-1水平;将培养上清液与大鼠原代颅顶骨成骨细胞共同孵育,茜素红S染色法考察其促进成骨细胞分化的能力;细胞微囊移植后,在30天内测定移植组、去势组、假手术组的血清IGF-1水平;在移植30天时测定大鼠血清钙、磷、碱性磷酸酶(ALP)的水平,采用双能X-射线吸收法测定大鼠股骨的骨密度值;进行大鼠股骨HE染色,评价骨组织形态。结果显示,共形微囊化后细胞存活良好,活性可在24h内恢复正常;体外培养时,共形细胞微囊可持续分泌IGF-1,培养上清液可促进原代大鼠颅顶骨成骨细胞钙化结节形成;移植后,共形细胞微囊可在30天内提高移植组大鼠的血清IGF-1水平;移植第30天,移植组和假手术组的大鼠血清ALP和磷水平显着低于去势组,说明移植的共形细胞微囊改善了去势大鼠的血清ALP和磷水平;移植组大鼠股骨的骨密度值显着高于去势组;90%以上的回收微囊保持完整,细胞维持存活;HE染色显示,移植组的骨小梁厚度和排列紧密度要优于去势组。综上所述,本文采用双水相乳化法制备了微载体/细胞复合物的ACA共形微囊,并分别以L02、重组细胞rCHO-IGF-1作为模型细胞,分别移植进行了治疗大鼠肝损伤和去势大鼠骨质疏松的研究,发现microC/L02的共形微囊具有改善肝损伤大鼠生化指标和肝组织形态的能力,microC/rCHO-IGF-1的共形微囊具有体内持续释放IGF-1,提高股骨的骨密度,改善股骨组织形态,从而减缓骨质疏松发生的能力。本研究为实现细胞微囊的囊径微化和功能强化提供了新思路。
周咏[5](2016)在《仿ECM纳米纤维结构壳聚糖微球构建软骨样组织工程复合体的体外实验研究》文中进行了进一步梳理目的:本研究制备了具有仿软骨细胞外基质纳米纤维结构壳聚糖微球,并探索这种材料通过bottom-up方案及软骨组织工程技术进行体外软骨样组织工程复合体的构建组织工程复合体。材料和方法:1.利用拉针仪和煅针仪加工玻璃毛细管形成毛细微管,并组装形成微流体装置。2.将壳聚糖溶液和环己烷溶液分别注入微流体装置的内外管内,通过氢氧化钠乙醇溶液固化,超临界二氧化碳干燥后得到仿细胞外基质(ECM)纳米纤维结构的壳聚糖微球,扫描电镜观察材料的结构特征。3.改变微流体装置的参数、壳聚糖溶液及氢氧化钠溶液浓度,制备不同大小和不同结构的壳聚糖微球,通过扫描电镜评价材料的结构特征。4.将不同大小的微球与兔耳软骨细胞进行复合,通过旋转培养瓶培养5d,测定细胞材料黏附率及细胞增殖率,通过细胞骨架染色确定细胞的生长状态,测定细胞外基质糖胺聚糖(GAG)含量。5.将壳聚糖微球与软骨细胞复合,旋转培养瓶培养7d后,放入模具中,继续体外培养2周,将形成的类组织块进行组织学和机械性能检测。结果:1.我们成功的构建了微流体装置。利用微流体装置和临界二氧化碳干燥制备了具有仿细胞外基质结构的壳聚糖微球,微球的表面和内部为均一的纤维网状结构。2.壳聚糖微球材料的直径和纳米纤维直径可以精确调控。3.贴壁法成功培养、传代兔软骨细胞。4.体积最小的微球(150nm)可促进软骨细胞黏附、增殖、ECM分泌。激光共聚焦显微镜观察,软骨细胞在材料表面生长良好,7d后,细胞可以布满整个材料表面,材料间可以通过细胞间的桥接作用连接在一起,形成局部团块。5.将细胞材料放入模具继续培养后,我们成功获得了一种表面光滑、半透明状结构及组织切片染色显示材料之间有软骨细胞外基质沉淀的类软骨组织工程复合体。扫描电子显微镜显示所获得的组织样结构具有和正常猪关节软骨类似的纳米结构。机械性能测定证实该种组织样结构弹性模量良好。结论:1.借助微流体设备通过物理交联过程,我们首次成功制备了仿ECM纳米纤维结构的壳聚糖微球。材料的大小尺寸和纤维结构可精确调控。2.仿ECM壳聚糖纳米微球的纳米纤维结构与壳聚糖溶液和氢氧化钠溶液的浓度相关。壳聚糖溶液和氢氧化钠溶液浓度的升高会导致纳米纤维直径的增加。3.仿ECM壳聚糖微球具有促进软骨细胞黏附、增殖及ECM分泌的作用。4.通过bottom-up方案及软骨组织工程技术,软骨细胞与仿ECM壳聚糖微球复合后,可通过细胞增殖和细胞间的桥接作用形成微团块。在模具中继续培养,可形成类软骨样组织结构。组织学检测显示该结构具有软骨样基质形成,机械性能检测证实该结构具有较强的抗压缩性,扫描电子显微镜结果显示,该组织的纳米纤维结构与正常猪膝关节软骨的细胞外基质结构类似。
杨静[6](2015)在《LCC基生物材料的制备及其与人体肝细胞生物相容性的研究》文中研究说明作为人体的重要器官——肝脏,却在人体内极易发生病变,有相当一部分人受肝癌、急性肝衰竭等肝脏疾病的困扰。日前,医疗上主要采用肝移植的治疗手段,于是寻找合适的肝脏支架材料是细胞组织工作者在体外进行人工肝脏细胞培养的基础性研究工作。木素-碳水化合物复合体(Lignin-carbohydrate complexes,LCC)具有良好的物理强度、两亲性、生物相容性、可降解性等特性,是一种很好的天然可降解医用高分子材料。本论文对LCC在肝脏组织工程中生物相容性进行了探索。本文选取裸子植物的银杏、被子植物的杨木和麦草为原料分别提取了LCC,通过与丙三醇缩水甘油醚交联的方法制备凝胶材料用于作生物多孔载体,对该生物载体的主要成分含量以及表面形态进行分析。结果表明:对人体肝细胞有较高生物相容性的半乳糖在银杏、杨木和小麦秸秆三种原料的LCC基凝胶材料中分别为2.30%、3.32%以及0.27%,而甘露糖含量分别为21.94%、3.12%和10.13%。用上述三种LCC为原料可以制备水凝胶型的生物载体,平均孔径约为80-120μm。用该多孔生物载体进行人肝细胞培养,发现人肝细胞能够成功地在LCC基凝胶材料上生长,在前2天细胞密度较小,后2天细胞密度增大,后细胞从第5d开始堆积老化和脱落。银杏、杨木和小麦秸秆LCC基凝胶载体同与肝细胞作用,综合比较细胞增长及代谢趋势为:杨木凝胶材料最优,银杏和小麦分别次之,对照组最次,且细胞增殖较快,培养液的ALB值、合成BUN值和GLUCOSE消耗值的测定结果表明肝细胞具有较高的代谢活性。研究结果表明LCC基多孔凝胶材料具有良好的生物相容性。用TEMPO氧化硫酸盐针叶木漂白浆,将木素前驱物松柏醇葡萄糖苷与氧化后的纸浆在漆酶的作用下反应,使生成的脱氢聚合物(DHP)与多糖之间以缩醛键结合生成LCC。合成LCC材料中所含有对人体肝细胞有较高生物相容性的半乳糖和甘露糖组分为3.53%和7.69%。将TEMPO氧化纸浆材料、含合成LCC的纸浆材料与人体肝细胞作用,肝细胞密度在第4d达到最大,综合比较增殖及代谢速率为合成LCC实验组优于TEMPO氧化纸浆实验组,优于对照组。最重要的原因是材料中半乳糖含量较高,促进细胞生长。对培养的代谢液进行检测的结果也表明加入合成的LCC材料有利于提高肝细胞的代谢活性,由此也证明了合成LCC具有良好的生物相容性,为适合组织工程的LCC材料的制备开发了新方法。最后对银杏LCC分离处理,得到可溶性银杏LCC,并制成不同浓度与人体肝细胞L-02培养研究。利用FT-IR和HPLC对LCC的化学结构和主要成分含量进行分析。然后将不同浓度(0.1%、0.5%、1.0%)的可溶性银杏LCC与肝细胞培养。培养过程中人工计数且结合倒置显微镜观察了解细胞的生长情况。并收集代谢液对其进行成分检测,从而了解细胞的代谢活性。研究结果表明,与空白样相比,实验组(浓度0.1%-0.5%)培养的细胞在前三天生长较好,而浓度1.0%的实验组由于半乳糖在体系中浓度过高,反而遏制了细胞的生长。通过测定培养液的白蛋白量(ALB)、合成尿素量(BUN)和消耗葡萄糖量(GLUCOSE),发现细胞的代谢活性在第3天有一个最高值。结果表明:可溶性LCC浓度为0.1%、0.5%时,培养到第3天时肝细胞的代谢活性为最佳。
郭伟[7](2013)在《丝素蛋白基大孔微载体共培养C3A细胞治疗大鼠急性肝衰竭的实验研究》文中指出研究背景肝脏是人体最重要的脏器之一,担负着人体分泌胆汁、凝血、新陈代谢、吞噬或免疫作用、解毒、调节水与电解质等一系列复杂的生理功能。急性肝功能衰竭是以快速进展的严重肝功能损害引起严重肝功能不全疾病,严重危及人类生命。各种原因引起的急性肝功能衰竭,常规治疗病死率高达60-80%。目前临床上急性肝功能衰竭的有效治疗手段主要包括三种:原位肝移植、生物人工肝支持系统以及肝细胞移植。随着肝脏移植技术的发展及免疫抑制剂的使用,目前肝脏移植已经被认为是治疗各种终末期肝病及急性肝衰竭唯一有效的治疗手段。但因为肝器官移植受到供体器官短缺、手术风险大、治疗费用高、术后免疫排斥导致供肝功能丧失以及终生需要服用免疫抑制剂治疗等因素的限制,决定了其在我国广泛应用仍有一定的困难。以体外培养的肝细胞为核心构建的生物型人工肝支持系统是一种理想的替代治疗方法,但是因生物反应器价格昂贵、供肝细胞来源以及其治疗过程中可能产生的血流动力学紊乱等因素制约了其临床广泛应用。肝细胞移植具有技术简单,容易操作,对患者创伤小、费用相对低廉、肝细胞在体外培养后减少了细胞表面的抗原性,可以降低免疫排斥反应、移植肝细胞可以发挥肝脏解毒、合成功能等特殊优势。相关试验研究已证明肝细胞移植可延长急性肝衰竭患者供体等待时间,明显改善患者的肝功能水平,由于肝脏的再生能力和潜力很大,在接受肝细胞移植后,部分患者残存的肝脏得以再生,肝功能可以恢复至正常水平。因此,肝细胞移植已被认为是对终末期肝疾病及急性肝衰竭的一种具有良好发展前景的治疗方法。但是,它需要解决的问题仍有很多,主要包括细胞来源问题和高密度高活性肝细胞培养问题。肝细胞的质与量是肝细胞移植研究中的关键问题,如何方便地获取高密度、高质量、高活性的肝细胞已成为肝细胞移植成功需要解决的重要问题。以生物支架材料大孔微载体为核心的三维肝细胞培养有望解决此难题。主要利用微载体悬浮培养技术来实现肝细胞的高密度培养及扩增,使细胞在数量上及功能上都能达到临床应用的要求。利用微载体悬浮培养技术进行种子细胞的扩增和用来充当体内细胞治疗的传输载体,近年来在肝细胞移植、生物人工肝及组织工程领域的应用研究正日趋升温。相比于实心微载体,大孔微载体的明显优势在于为细胞生长、粘附、增殖提供了足够的空间和更大的面积,有利于营养物质的进入和代谢产物的排出,从而提高了细胞代谢活性和培养密度。然而,目前市售的微载体的主要成分多见于明胶、葡聚糖、纤维素等,缺乏肝细胞特异性,细胞生长较为缓慢,不容易黏附于微载体表面;而且随着培养时间的延长,细胞容易脱落、死亡,从而降低了细胞培养密度和活性。随着对组织工程支架材料的深入研究,研究人员发现对高分子材料进行适当的化学改性、表面修饰等处理,以增强其力学特性,生物相容性及肝特异性,可诱导和提高肝细胞在支架上的黏附和增殖行为。在肝组织工程支架方面,半乳糖基是肝细胞表面去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor, ASGPR)的特异性配体,是肝细胞识别的相应位点并能产生特异性相互作用。以半乳糖基修饰各种天然原材料的和人工聚合物,通过聚合物链上的半乳糖基和肝细胞表面去唾液酸糖蛋白受体之间独特的分子识别功能,优化支架的肝细胞特异性,提高肝细胞的特异功能。在肝组织工程细胞外基质支架材料上接枝半乳糖基,可诱导和提高肝细胞在细胞外基质支架上的粘附和增殖行为。我们的前期研究工作中,以生物相容性良好的天然高分子材料丝素蛋白、壳聚糖、乳糖酸为原料,把半乳糖基引入壳聚糖中,应用乳化-化学交联将丝素蛋白与半乳糖基化壳聚糖复合,经过极性溶液处理、冷冻干燥等处理,制备出了一种肝细胞特异性丝素蛋白/半乳糖基化壳聚糖大孔微载体。成功建立了丝素蛋白/半乳糖基壳聚糖大孔微载体制备技术,扫描电子显微镜观察该大孔微载体表面及内部呈多孔结构,开口向外,呈喇叭状,孔的分布均匀,适合于肝细胞高密度培养。并通过1HNMR谱、FITR谱表征,证实半乳糖基已经成功接枝到支架材料之中。该支架材料中引入了肝细胞表面去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)的特异性配体一半乳糖基,成功制备出了一种具有肝细胞特异性的高性能的大孔微载体。体外丝素蛋白/乳糖基壳聚糖大孔微载体与肝细胞系C3A细胞悬浮培养实验表明肝细胞能与大孔微载体特异性黏附、细胞围绕微载体聚集生长,并表现出很好的活力。然而,体内环境相对于体外环境更为复杂,SF/GC大孔微载体C3A细胞复合物在体内能否有效存活?能否对动物急性肝衰竭模型进行有效的提高生存率、改善肝功能、减轻肝脏损伤?这些问题的深入探讨无疑将有助于细胞移植技术的发展。基于研究现状以及本课题组前期的工作结果,本实验拟采用丝素蛋白/乳糖基壳聚糖大孔微载体C3A细胞悬浮培养形成的复合物腹腔内移植的方法,以观察SF/GC大孔微载体C3A细胞复合物对急性肝功能衰竭的治疗效果。本研究旨在探讨SF/GC大孔微载体C3A细胞复合物在动物急性肝衰模型体内移植的可行性,为今后临床上更好的应用细胞移植技术治疗急性肝衰竭提供必要的理论和实验依据。目的以肝细胞系C3A细胞为移植细胞,以丝素蛋白/乳糖基化壳聚糖大孔微载体为载体,对C3A细胞行大孔微载体粘附培养、检测其生物学特性,探讨将丝素蛋白/乳糖基化壳聚糖大孔微载体粘附培养C3A细胞复合物植入到切除80%肝组织的急性肝功能衰竭大鼠模型腹腔内,观察存活率,检测肝功能水平及观察肝脏组织学变化,评价其对急性肝衰大鼠的治疗效果,为将来临床应用提供必要的理论和实验依据。方法首先采用冷冻干燥法制备丝素蛋白/半乳糖基壳聚糖大孔微载体,与肝细胞系C3A细胞进行粘附共培养,对其生物相容性及细胞功能进行检测,确定行大孔微载体C3A复合体移植的最佳时期。然后切除大鼠80%肝脏组织构建SD大鼠急性肝功能衰竭模型。最后大鼠肝衰模型建立后分别将培养72h的丝素蛋白/半乳糖基化壳聚糖大孔微载体C3A细胞复合物(A组)、C3A细胞悬液2mL(含6.0×107个C3A细胞,B组)植入到急性肝功能衰竭大鼠腹腔内。观察移植后大鼠1周内存活率,检测血清白蛋白(ALB)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)肝功能指标,检查肝脏组织学变化。结果大孔微载体C3A细胞共培养第3天上清液中葡萄糖消耗及白蛋白浓度最高。丝素蛋白/乳糖基壳聚糖大孔微载体C3A细胞复合物对急性肝衰竭模型动物的实验显示,移植后1周急性肝衰竭大鼠的存活率分析比较:微载体组动物的生存率明显高于其他两组,A组为50%,B组为40%,C组为10%,各移植组高于对照组(P<0.05)。移植后1周内,微载体组肝功能各项指标水平逐渐下降,移植术后第7天肝功能各项指标逐渐接近正常水平,与移植第1日有显着统计学差异(P<0.05)。对照组肝功能各项指标水平无明显下降趋势,ALT水平于移植术后第1日达最高峰。肝组织切片形态学观察示大孔微载体C3A细胞复合物组移植第7天后肝脏病理有不同程度的恢复,较其他两组有明显改善。结论以丝素蛋白、壳聚糖、乳糖酸为原料制备的丝素蛋白/乳糖基化壳聚糖大孔微载体表面及内部为多孔结构,孔的分布均匀,具有肝细胞特异性,适合肝细胞高密度培养,是较为理想的细胞载体材料。大孔微载体与C3A细胞共培养能更好的维持培养的C3A细胞活性及功能,以第3天的功能较好,适合应用移植。通过切除大鼠80%肝脏组织能成功构建大鼠急性肝衰竭模型。丝素蛋白/乳糖基化壳聚糖大孔微载体具有良好的生物相容性,应用丝素蛋白/乳糖基化壳聚糖大孔微载体培养C3A细胞腹腔内移植治疗急性肝衰竭大鼠能提高生存率,改善肝功能,减轻肝脏病理改变。
李琳[8](2012)在《冷冻干燥法制备细胞微载体研究》文中研究表明肝功能衰竭是临床上极具挑战性的一种病症,虽然肝移植可挽救许多肝病末期的患者的生命,但是由于肝脏供体的短缺等原因,许多患者在等待肝移植的过程中死亡。20世纪逐渐发展的生物人工肝支持系统,主要是用来为肝衰竭患者提供体外肝脏功能支持的方法,经过多年的发展,生物人工肝技术已经逐渐成熟,成为肝衰竭患者治疗的新方法之一。本课题旨在研究生物人工肝中肝细胞培养所需的微载体的制备工艺,制备出性能良好的多孔微载体,并培养肝细胞,验证其良好的生物相容性,为临床上肝病的治疗打下基础。1.以壳聚糖为基质,通过共混法引入海藻酸钠或N-羧丙酰壳聚糖钠,采用乳液冷冻干燥法,并结合正戊醇和醋酸铵作致孔剂来制备海藻酸钠/壳聚糖多孔微载体和N-羧丙酰壳聚糖钠/壳聚糖微载体,在该微载体上培养人肝细胞L-02。2.用扫描电子显微镜观察微载体的微观结构形貌,以吸水率、体外降解率、MTT比色等指标,综合评价海藻酸钠/壳聚糖微载体和N-羧丙酰壳聚糖钠/壳聚糖微载体的性能及生物活性。3.对于N-羧丙酰壳聚糖钠/壳聚糖微载体,选择的致孔剂不同,所得的微载体的表观形貌也不同。以正戊醇为致孔剂,冻干得到的微载体孔径为3-55m,孔隙率为88%;而以正戊醇和醋酸铵两种致孔剂得到的支架孔径为15-55m,孔隙率为94%。两种方法得到的支架硬度高,溶胀性良好,吸水率高,两种空白N-羧丙酰壳聚糖钠/壳聚糖支架在体外可完全降解。光学显微镜观察L-02人肝细胞在N-羧丙酰壳聚糖钠/壳聚糖支架上生长良好。4.对于海藻酸钠/壳聚糖微载体,以正戊醇为致孔剂,冻干得到的微载体孔径为3-50m,孔隙率为89%;以正戊醇和醋酸铵两种致孔剂制孔得到的微载体孔径为15-55m,孔隙率为95%。且两种方法得到的微载体硬度高,溶胀性良好,吸水率高,空白海藻酸钠/壳聚糖微载体在体外可完全降解。光学显微镜观察L-02人肝细胞在海藻酸钠/壳聚糖微载体上生长良好。综上所述,本课题所制备的多孔微载体具有良好的生物学性能,可满足生物人工肝对肝细胞培养的要求。
丁舒,崔元璐,叶磊,姚康德[9](2012)在《基于微载体技术的生物人工肝研究进展》文中进行了进一步梳理在无法进行肝移植的情况下,肝衰竭的发病率和死亡率均较高.人工肝支持系统,特别是生物人工肝,则可促进肝衰竭恢复或作为肝移植的过渡辅助.生物人工肝中含肝细胞的生物反应器可提供生物转化和肝脏的合成功能.所使用的肝细胞既可以为人肝细胞也可以为异种肝细胞(动物源性).病人的血液或血浆循环通过生物反应器,由肝细胞代谢去除毒素并产生所需化学成分后,再返回病人体内.随着人类及猪肝细胞长期培养增殖的成功,以及具有充分生物相容性的微载体的发展,单位体积内培养肝细胞的密度在当前已经可以满足生物人工肝系统的需要.以生长在微载体上的肝细胞填充而成的中空纤维生物反应器已得到广泛使用,在不久的将来,生物人工肝支持系统成为肝衰竭治疗的有效方法具有良好前景.
赵晓威[10](2010)在《肝靶向性壳聚糖基纳米载药体系的研究与应用》文中指出目的:阐述肝靶向性壳聚糖基纳米载药体系的研究和应用。方法:采用电子检索的方式,在万方数据库中检索2002-12/2010-02有关肝靶向性壳聚糖基纳米的研究文章,关键词为"壳聚糖基纳米载药体系,肝靶向性,研究,应用"。排除重复研究、普通综述或Meta分析类文章,筛选纳入18篇文献进行阐述。结果:壳聚糖纳米粒是一种天然无毒的非病毒药物载体,有良好的生物相容性和生物可降解性,可提高药物的稳定性,可靶向释放药物,增加药物的吸收等,达到控释和靶向治疗的作用。载药壳聚糖纳米粒的制备有离子交联法、沉淀法、超声乳化法、反相微乳法、静电纺丝法、反相悬浮交联法、逆相蒸发一短时超声法、还原胺化法等8种不同方法。用于肝脏组织工程如肝移植、人工肝,能维持和提高肝细胞活性和功能,有利于肝细胞生长;肝脏肿瘤治疗中使药物靶向释放于肿瘤部位,更有效抑制肿瘤细胞、降低毒副作用等。结论:肝靶向性壳聚糖基纳米载药体系是一种安全、高效的靶向性基因载体,但它的研究还需不断深入。
二、THE PREPARATION OF FRUCTOSE-MODIFIED CHITOSAN MICROCARRIERS AND CULTURE OF PRIMARY RAT HEPATOCYTES(论文开题报告)
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、THE PREPARATION OF FRUCTOSE-MODIFIED CHITOSAN MICROCARRIERS AND CULTURE OF PRIMARY RAT HEPATOCYTES(论文提纲范文)
(1)口服次血红素六肽改善2型糖尿病肝脏胰岛素抵抗的机制研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
ABSTRACT |
英文缩略词 |
第1章 绪论 |
1.1 糖尿病 |
1.1.1 糖尿病简介及流行性 |
1.1.2 糖尿病的诊断标准 |
1.2 2型糖尿病简介 |
1.2.1 2型糖尿病的发生机制 |
1.2.2 2型糖尿病并发症 |
1.2.3 2型糖尿病的临床药物 |
1.3 胰岛素抵抗 |
1.3.1 胰岛素信号转导 |
1.3.2 胰岛素抵抗的病理机制 |
1.3.3 氧化应激与胰岛素抵抗 |
1.4 次血红素六肽 |
1.4.1 次血红素六肽设计及其优点 |
1.4.2 次血红素六肽的稳定性 |
1.5 蛋白多肽类药物的口服给药 |
1.5.1 蛋白多肽类药物在2型糖尿病治疗中的应用 |
1.5.2 影响蛋白多肽类药物口服吸收生物利用度的屏障 |
1.5.3 提高蛋白多肽类药物口服生物利用度的策略 |
1.5.4 羧甲基壳聚糖 |
1.6 立题依据及实验设计 |
1.6.1 立题依据 |
1.6.2 实验思路 |
1.6.3 实验路线 |
第2章 口服DHHP-6抗2型糖尿病的研究 |
2.1 引言 |
2.2 实验材料与仪器 |
2.2.1 实验材料 |
2.2.2 实验动物 |
2.2.3 实验仪器 |
2.3 实验方法 |
2.3.1 DhHP-6的合成与纯化 |
2.3.2 2型糖尿病小鼠模型的建立及给药 |
2.3.3 小鼠体重和血糖测定 |
2.3.4 口服葡萄糖耐受实验(OGTT) |
2.3.5 胰岛素抵抗实验(ITT) |
2.3.6 血清指标测定 |
2.3.7 抗氧化酶酶活/含量测定 |
2.3.8 肝功能指标测定 |
2.3.9 胰岛、肝脏及肾脏组织化学染色 |
2.3.10 统计学分析 |
2.4 结果与讨论 |
2.4.1 DhHP-6的合成、纯化与鉴定 |
2.4.2 DhHP-6能够降低2型糖尿病小鼠血糖 |
2.4.3 DhHP-6能够增强2型糖尿病小鼠对胰岛素的敏感性 |
2.4.4 DhHP-6能够促进2型糖尿病小鼠胰岛素分泌 |
2.4.5 DhHP-6能够改善2型糖尿病小鼠的葡萄糖耐受 |
2.4.6 DhHP-6能够维持2型糖尿病小鼠氧化与抗氧化系统平衡 |
2.4.7 DhHP-6能够改善2型糖尿病小鼠的血脂紊乱 |
2.4.8 DhHP-6能够保护2型糖尿病小鼠的肝脏功能 |
2.4.9 DhHP-6能够维持2型糖尿病小鼠肝脏组织的结构完整 |
2.4.10 DhHP-6能够维持2型糖尿病小鼠肾小球的结构完整 |
2.4.11 DhHP-6能够保护2型糖尿病小鼠胰岛组织的结构完整 |
2.5 小结 |
第3章 DHHP-6改善2型糖尿病肝脏胰岛素抵抗的作用机制研究 |
3.1 引言 |
3.2 实验材料与仪器 |
3.2.1 实验材料 |
3.2.2 实验仪器 |
3.3 实验方法 |
3.3.1 肝脏匀浆及相关因子检测 |
3.3.2 肝脏总蛋白提取及样品处理 |
3.3.3 细胞培养 |
3.3.4 DhHP-6对HepG2 细胞毒性实验 |
3.3.5 HepG2细胞胰岛素抵抗模型的构建 |
3.3.6 葡萄糖吸收检测 |
3.3.7 糖原合成检测 |
3.3.8 糖原PAS染色 |
3.3.9 ROS含量检测 |
3.3.10 线粒体膜电位检测 |
3.3.11 线粒体压力检测 |
3.3.12 糖酵解压力检测 |
3.3.13 细胞蛋白提取及样品处理 |
3.3.14 western blot检测 |
3.3.15 统计学分析 |
3.4 结果与讨论 |
3.4.1 DhHP-6能够促进2型糖尿病小鼠糖代谢相关酶的表达 |
3.4.2 DhHP-6有利于2型糖尿病小鼠肝脏糖原的合成 |
3.4.3 DhHP-6能够激活2型糖尿病小鼠的胰岛素信号通路 |
3.4.4 DhHP-6 能够激活2 型糖尿病小鼠的AMPK信号通路 |
3.4.5 DhHP-6 能够激活2 型糖尿病小鼠的Nrf2-Keap1 信号通路 |
3.4.6 HepG2细胞胰岛素抵抗模型的构建 |
3.4.7 DhHP-6 能够促进HepG2 细胞胰岛素抵抗模型葡萄糖吸收及糖原合成 |
3.4.8 DhHP-6 能够抑制HepG2 细胞胰岛素抵抗模型ROS的生成 |
3.4.9 DhHP-6 能够降低HepG2 细胞胰岛素抵抗模型的线粒体膜电位 |
3.4.10 DhHP-6 能够缓解HepG2 细胞胰岛素抵抗模型的线粒体压力 |
3.4.11 DhHP-6 能够改善HepG2 细胞胰岛素抵抗模型的糖酵解压力 |
3.4.12 DhHP-6 能够激活HepG2 细胞胰岛素抵抗模型的PI3K/AKT信号通路 |
3.4.13 DhHP-6 能够激活HepG2 细胞胰岛素抵抗模型的AMPK信号通路 |
3.4.14 DhHP-6 通过PI3K/AKT/Nrf2-Keap1 信号通路改善HepG2细胞胰岛素抵抗 |
3.4.15 DhHP-6 通过AMPK/Nrf2-Keap1 信号通路改善HepG2 细胞胰岛素抵抗 |
3.5 小结 |
第4章 DHHP-6-细胞穿膜肽-叶酸-羧甲基壳聚糖微球制备 |
4.1 引言 |
4.2 实验材料与仪器 |
4.2.1 实验材料 |
4.2.2 实验仪器 |
4.3 实验方法 |
4.3.1 细胞穿膜肽的合成及纯化 |
4.3.2 叶酸-羧甲基壳聚糖的合成及表征 |
4.3.3 Caco-2细胞培养 |
4.3.4 细胞毒性实验 |
4.3.5 Caco-2细胞吸收模型的建立 |
4.3.6 DhHP-6-细胞穿膜肽-叶酸-羧甲基壳聚糖微球的制备 |
4.3.7 DhHP-6-细胞穿膜肽-叶酸-羧甲基壳聚糖微球包封率、载药量的测定 |
4.3.8 单因素试验 |
4.3.9 正交试验 |
4.3.10 DhHP-6-细胞穿膜肽-叶酸-羧甲基壳聚糖微球体外释放 |
4.3.11 统计学分析 |
4.4 结果与讨论 |
4.4.1 细胞穿膜肽的合成、纯化及鉴定 |
4.4.2 叶酸-羧甲基壳聚糖表征 |
4.4.3 细胞穿膜肽、DhHP-6及羧甲基壳聚糖/叶酸-羧甲基壳聚糖毒性检测 |
4.4.4 细胞粘附能力检测 |
4.4.5 细胞穿膜肽的筛选 |
4.4.6 单因素试验结果 |
4.4.7 正交试验结果 |
4.4.8 DhHP-6-细胞穿膜肽-叶酸-羧甲基壳聚糖微球粒径检测 |
4.4.9 DhHP-6-细胞穿膜肽-叶酸-羧甲基壳聚糖微球形貌观察 |
4.4.10 DhHP-6-细胞穿膜肽-叶酸-羧甲基壳聚糖微球体外释放 |
4.4.11 DhHP-6-细胞穿膜肽-叶酸-羧甲基壳聚糖微球Caco-2 细胞模型吸收能力测定 |
4.5 小结 |
第5章 总结与创新点 |
参考文献 |
作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
致谢 |
(2)聚合物短纤维作为可注射药物载体和细胞球培养支架的研究(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
第一章 绪论 |
1.1 三维类组织的体外构建 |
1.1.1 体内组织和器官的结构特点 |
1.1.2 体外构建三维类组织的方法 |
1.1.3 体外构建三维类组织的应用 |
1.2 细胞球体 |
1.2.1 细胞球体的特点 |
1.2.2 细胞球体的构建方式 |
1.2.3 细胞球体用于药物筛选体外模型 |
1.2.4 细胞球体用于组织修复和细胞治疗 |
1.3 电纺丝纤维的生物医学应用 |
1.3.1 电纺纤维的特点 |
1.3.2 电纺纤维作为药物载体的研究现状 |
1.3.3 电纺纤维作为组织工程的支架 |
1.4 课题的立题意义和研究内容 |
1.4.1 研究目的和意义 |
1.4.2 研究内容 |
1.4.3 论文的创新点 |
第二章 短纤维培养原代肝细胞球体用于体外药物筛选 |
2.1 实验部分 |
2.1.1 实验材料 |
2.1.2 短纤维的制备 |
2.1.3 短纤维表面修饰半乳糖和RGD |
2.1.4 短纤维的表征 |
2.1.5 短纤维与原代肝细胞的共培养 |
2.1.6 原代肝细胞球体的表征 |
2.1.7 原代肝细胞球体功能的测定 |
2.1.8 原代肝细胞球体药物代谢表征 |
2.1.9 药物代谢的诱导和抑制实验 |
2.1.10 数据统计分析 |
2.2 结果与讨论 |
2.2.1 短纤维的表征 |
2.2.2 短纤维长度对肝细胞球体功能的影响 |
2.2.3 短纤维长度对原代肝细胞球体形貌的影响 |
2.2.4 半乳糖和RGD接枝密度对肝细胞球体功能的影响 |
2.2.5 表征原代肝细胞球体 |
2.2.6 原代肝细胞球体用于药物代谢研究 |
2.2.7 诱导剂和抑制剂对原代肝细胞球体药物代谢的影响 |
2.3 本章小结 |
第三章 原代肝细胞和HepG2细胞球体作为体外葡萄糖和脂质代谢模型 |
3.1 实验部分 |
3.1.1 实验材料 |
3.1.2 短纤维的制备和表征 |
3.1.3 原代肝细胞和人肝癌细胞球体培养 |
3.1.4 肝细胞球体的表征 |
3.1.5 肝细胞球体的功能和活力表征 |
3.1.6 肝细胞球体研究葡萄糖代谢 |
3.1.7 肝细胞球体研究脂质代谢 |
3.1.8 肝细胞球状体的酶活性分析 |
3.1.9 肝细胞球体的激素响应和药物敏感性表征 |
3.1.10 肝细胞球体葡萄糖代谢和脂质代谢相关基因的表达 |
3.1.11 数据统计分析 |
3.2 结果与讨论 |
3.2.1 肝细胞球体的表征 |
3.2.2 肝细胞球体肝特异性功能的表征 |
3.2.3 肝细胞球状体的葡萄糖代谢 |
3.2.4 肝细胞球体对葡萄糖代谢激素的响应 |
3.2.5 肝细胞球体的脂质代谢表征 |
3.2.6 肝细胞球体的PEPCK和AMPK酶活性 |
3.2.7 肝细胞球体对血糖调节药物和降脂药物的响应 |
3.3 本章小结 |
第四章 瘤内注射载药短纤维的抗肿瘤效果 |
4.1 实验部分 |
4.1.1 实验材料 |
4.1.2 载药短纤维的制备 |
4.1.3 载药短纤维的表征 |
4.1.4 载药短纤维的体外药物释放 |
4.1.5 载药短纤维的细胞毒性和细胞凋亡 |
4.1.6 瘤内注射载药短纤维对肿瘤进行治疗 |
4.1.7 载药短纤维的体内抗肿瘤效果 |
4.1.8 药物和短纤维在组织及肿瘤内的分布 |
4.1.9 肿瘤组织学分析 |
4.1.10 数据统计分析 |
4.2 结果与讨论 |
4.2.1 载药短纤维的表征 |
4.2.2 载药短纤维的体外药物释放 |
4.2.3 载药短纤维的细胞毒性和细胞凋亡 |
4.2.4 短纤维释放的药物在组织中的分布 |
4.2.5 纤维释放药物和载药短纤维在肿瘤中的空间分布 |
4.2.6 载药短纤维抑制肿瘤生长 |
4.2.7 载药短纤维对动物存活率和体重的影响 |
4.2.8 载药短纤维对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响 |
4.3 本章小结 |
第五章 体外三维培养MCF-7细胞球体构建类肿瘤模型 |
5.1 实验部分 |
5.1.1 实验材料 |
5.1.2 载药短纤维的制备 |
5.1.3 载药短纤维的表征 |
5.1.4 载药短纤维促肿瘤细胞增殖 |
5.1.5 肿瘤细胞球体的培养 |
5.1.6 肿瘤细胞球体的表征 |
5.1.7 肿瘤细胞球体的基因表达分析 |
5.1.8 肿瘤细胞球体的致瘤性 |
5.1.9 数据统计分析 |
5.2 结果与讨论 |
5.2.1 药物浓度对肿瘤细胞增殖的影响 |
5.2.2 载药短纤维的表征 |
5.2.3 载药短纤维对肿瘤细胞增殖的影响 |
5.2.4 肿瘤细胞球体的表征 |
5.2.5 肿瘤细胞球体的组织学评价 |
5.2.6 肿瘤细胞球体的增殖效果 |
5.2.7 肿瘤细胞球体恶性肿瘤因子基因的表达 |
5.2.8 表征肿瘤细胞球体的上皮间充质转化和癌症干细胞表型 |
5.2.9 肿瘤细胞球体在体内的成瘤表征 |
5.3 本章小结 |
第六章 可注射凝胶携载干细胞球体和短纤维用于软骨缺损和关节炎的治疗 |
6.1 实验部分 |
6.1.1 实验材料 |
6.1.2 载药短纤维的制备 |
6.1.3 短纤维的表征 |
6.1.4 水凝胶的制备 |
6.1.5 可注射凝胶的表征 |
6.1.6 载药短纤维及凝胶包裹载药短纤维的药物释放 |
6.1.7 干细胞球的体外培养 |
6.1.8 干细胞球体的体外软骨分化 |
6.1.9 软骨缺损和关节炎的治疗 |
6.1.10 软骨缺损的修复效果和组织学评价 |
6.1.11 修复缺损软骨的生物化学和生物力学分析 |
6.1.12 检测关节炎中的炎症表达 |
6.1.13 数据统计分析 |
6.2 结果与讨论 |
6.2.1 水凝胶的表征 |
6.2.2 短纤维增强水凝胶力学强度的表征 |
6.2.3 水凝胶的形貌表征 |
6.2.4 短纤维和水凝胶性质对BMSC分化成软骨的影响 |
6.2.5 考察骨髓间充质干细胞体外软骨分化效果 |
6.2.6 缺损软骨修复效果的评估 |
6.2.7 修复软骨组织的生物化学和生物力学分析 |
6.2.8 塞来昔布体外药物释放及细胞毒性 |
6.2.9 关节炎中炎症的抑制效果 |
6.2.10 骨关节炎的治疗效果 |
6.3 本章小结 |
全文总结 |
致谢 |
参考文献 |
攻读博士期间发表的论文 |
(3)甘草次酸受体介导的雷公藤内酯醇纳米粒对原位肝癌治疗的研究(论文提纲范文)
英文缩略词表 |
中文摘要 |
Abstract |
前言 |
第一章 GA-CTS/TPL纳米粒的制备 |
1 仪器与材料 |
1.1 仪器 |
1.2 试剂 |
2 实验方法 |
2.1 甘草次酸壳聚糖载体材料的合成 |
2.2 甘草次酸受体修饰的载体材料的表征 |
2.3 GA-CTS/TPL纳米粒的制备 |
2.4 建立体外分析方法学 |
2.5 载药量、包封率的测定 |
2.6 GA-CTS/TPL纳米粒的表征 |
2.7 体外释放试验 |
3 结果与讨论 |
3.1 甘草次酸受体修饰的载体材料的表征 |
3.2 体外分析方法学 |
3.3 包封率和载药量的测定 |
3.4 GA-CTS/TPL纳米粒的表征 |
3.5 体外释放试验结果 |
本章小结 |
第二章 GA-CTS/TPL纳米粒的抗肿瘤药效学研究 |
第一节 GA-CTS/TPL纳米粒体外抗肿瘤细胞学研究 |
1 材料与仪器 |
1.1 药品与试剂 |
1.2 仪器 |
1.3 细胞株与培养条件 |
1.4 溶液的配制 |
2 实验方法 |
2.1 MTT法考察GA-CTS/TPL纳米粒对多种肿瘤细胞的抑制作用 |
3 实验结果与讨论 |
3.1 MTT法考察GA-CTS/TPL纳米粒对多种肿瘤细胞的抑制作用 |
第二节 GA-CTS纳米粒细胞摄取机制的研究 |
1 材料与仪器 |
1.1 药品与试剂 |
1.2 仪器 |
1.3 细胞株与培养条件 |
2 实验方法 |
2.1 FITC的激发波长和发射波长的确定 |
2.2 FITC标记的GA-CTS纳米粒的制备 |
2.3 粒径和电位的测定 |
2.4 FITC的标记率 |
2.5 荧光显微镜观察GA-CTS纳米粒与肝癌细胞的亲和力 |
3 实验结果与讨论 |
3.1 FITC的激发波长和发射波长的确定 |
3.2 激光粒径仪测定粒径及Zeta电位 |
3.3 FITC标记率的测定 |
3.4 荧光显微镜观测纳米粒的细胞摄取 |
第三节 GA-CTS/TPL纳米粒对裸鼠肝原位移植瘤的抗肿瘤药效学研究 |
1 材料 |
1.1 药物与试剂 |
1.2 裸鼠和细胞株 |
1.3 实验仪器 |
2 实验方法 |
2.1 裸鼠肝原位移植瘤模型的建立 |
2.2 肝肾功能相关指标的测定 |
2.3 统计处理 |
3 实验结果与讨论 |
3.1 GA-CTS/TPL纳米粒对裸鼠肝原位移植瘤的抗肿瘤作用 |
3.2 肝肾相关指标的测定 |
本章小结 |
第三章 GA-CTS/TPL纳米粒在肝原位移植瘤小鼠体内的药动学研究 |
第一节 GA-CTS/TPL纳米粒在肝原位移植瘤小鼠体内的血浆药动学研究 |
1 材料与仪器 |
1.1 试药与试剂 |
1.2 仪器 |
1.3 动物 |
2 实验方法 |
2.1 LC-MS测定方法分析血浆样品 |
2.2 肝原位移植瘤小鼠模型的建立 |
2.3 肝原位移植瘤小鼠体内的药动学研究 |
2.4 统计处理 |
3 结果与讨论 |
3.1 肝原位移植瘤小鼠体内的血浆方法学验证结果 |
3.2 GA-CTS/TPL纳米粒在肝原位移植瘤小鼠体内的药动学研究 |
第二节 GA-CTS/TPL纳米粒在肝原位移植瘤小鼠体内的组织分研究 |
1 材料与仪器 |
1.1 试药与试剂 |
1.2 仪器 |
1.3 动物 |
2 实验方法 |
2.1 组织体内分析方法的建立 |
2.2 组织样品处理 |
2.3 肝原位移植瘤小鼠的组织分布方法学 |
2.4 GA-CTS/TPL纳米粒在肝原位移植瘤小鼠体内的组织分布 |
2.5 统计处理 |
3 实验结果与讨论 |
3.1 组织方法学验证结果 |
3.2 GA-CTS/TPL纳米粒在肝原位移植瘤小鼠体内的组织分布 |
3.3 肝原位移植瘤小鼠组织分布靶向评价 |
本章小结 |
全文总结 |
参考文献 |
文献综述 |
参考文献 |
致谢 |
(4)微载体/细胞复合物的共形微囊治疗肝损伤和骨质疏松的研究(论文提纲范文)
致谢 |
摘要 |
Abstract |
缩略语表 |
1 绪论 |
1.1 细胞的共形微囊 |
1.2 细胞的微载体培养 |
1.3 聚乙二醇(PEG)/葡聚糖双水相乳化系统 |
1.4 海藻酸-壳聚糖交联反应 |
1.5 本文的内容和意义 |
2 微载体的ACA共形微囊制备与性能表征 |
2.1 前言 |
2.2 仪器与试剂 |
2.2.1 仪器 |
2.2.2 试剂 |
2.3 实验方法 |
2.3.1 主要溶液配制 |
2.3.2 玻璃器皿的硅化与Cytodex-3微载体预处理 |
2.3.3 Cytodex-3的ACA共形微囊制备 |
2.3.4 Cytodex-3的共形微囊与BSA溶液共孵育 |
2.3.5 Cytodex-3的共形微囊与IgG溶液共孵育 |
2.3.6 挤压法测定共形微囊机械稳定性 |
2.3.7 球磨法测定共形微囊机械稳定性 |
2.3.8 原子力显微镜测定表面粗糙度 |
2.3.9 统计学分析 |
2.4 结果与讨论 |
2.4.1 Cytodex-3共形微囊的BSA透过性 |
2.4.2 Cytodex-3共形微囊对IgG的阻隔能力 |
2.4.3 Cytodex-3共形微囊的机械稳定性 |
2.4.4 Cytodex-3共形微囊的囊膜表面形貌 |
2.5 本章小结 |
3 microC/L02的ACA共形微囊治疗肝损伤研究 |
3.1 前言 |
3.2 实验材料 |
3.2.1 细胞和动物 |
3.2.2 仪器 |
3.2.3 试剂 |
3.3 实验方法 |
3.3.1 主要溶液配制 |
3.3.2 L02细胞免疫荧光染色 |
3.3.3 L02细胞在Cytodex-3上的培养 |
3.3.4 microC/L02的ACA共形微囊制备及WST-1检测 |
3.3.5 microC/L02共形微囊的CFDA-SE/PI染色 |
3.3.6 microC/L02共形微囊的体外肝功能检测 |
3.3.7 肝损伤大鼠模型制备 |
3.3.8 microC/L02共形微囊移植 |
3.3.9 大鼠血清、肝组织样本采集与处理 |
3.3.10 移植共形微囊回收与CFDA-SE/PI染色 |
3.3.11 统计学分析 |
3.4 结果与讨论 |
3.4.1 L02细胞鉴定 |
3.4.2 L02细胞在Cytodex-3上的生长 |
3.4.3 microC/L02共形微囊化后细胞的存活及活性变化 |
3.4.4 microC/L02共形微囊的白蛋白分泌和尿素合成水平 |
3.4.5 大鼠血清ALT、ALB和TBIL随共形微囊移植时间的变化 |
3.4.6 肝组织HE染色图 |
3.4.7 回收的移植微囊 |
3.5 本章小结 |
4 microC/rCHO-IGF-1的ACA共形微囊治疗骨质疏松症研究 |
4.1 前言 |
4.2 实验材料 |
4.2.1 细胞、菌株和动物 |
4.2.2 仪器 |
4.2.3 试剂 |
4.3 实验方法 |
4.3.1 主要溶液配制 |
4.3.2 真核表达载体pEGFP-N1-IGF-1的构建、鉴定与转化反应 |
4.3.3 重组质粒的扩增、抽提 |
4.3.4 重组pEGFP-N1-IGF-1质粒转染CHO细胞 |
4.3.5 细胞单克隆筛选 |
4.3.6 ELISA检测单克隆细胞株的IGF-1分泌 |
4.3.7 重组细胞rCHO-IGF-1的免疫荧光染色 |
4.3.8 重组细胞rCHO-IGF-1在Cytodex-3上的培养 |
4.3.9 microC/rCHO-IGF-1的ACA共形微囊制备及CFDA-SE/PI染色 |
4.3.10 microC/rCHO-IGF-1共形微囊的CCK-8检测 |
4.3.11 microC/rCHO-IGF-1共形微囊的IGF-1分泌 |
4.3.12 原代大鼠颅顶骨成骨细胞分离 |
4.3.13 原代大鼠颅顶骨成骨细胞鉴定 |
4.3.14 microC/rCHO-IGF-1共形微囊培养上清对成骨细胞的促分化作用 |
4.3.15 骨质疏松大鼠模型制备 |
4.3.16 共形微囊移植、采样与处理 |
4.3.17 统计学分析 |
4.4 结果与讨论 |
4.4.1 重组pEGFP-N1-IGF-1质粒酶切鉴定 |
4.4.2 IGF-1测序图谱 |
4.4.3 重组细胞rCHO-IGF-1单克隆株的IGF-1表达 |
4.4.4 重组细胞rCHO-IGF-1的免疫荧光鉴定 |
4.4.5 重组细胞rCHO-IGF-1在Cytodex-3上的生长 |
4.4.6 microC/rCHO-IGF-1共形微囊化后细胞的存活及活性变化 |
4.4.7 microC/rCHO-IGF-1共形微囊培养上清中的IGF-1水平 |
4.4.8 原代大鼠颅顶骨成骨细胞的形态观察与ALP染色鉴定 |
4.4.9 microC/rCHO-IGF-1共形微囊培养上清促进成骨细胞的分化 |
4.4.10 大鼠血清ALP、钙、磷、IGF-1水平和股骨的骨密度值 |
4.4.11 回收的microC/rCHO-IGF-1共形微囊 |
4.4.12 大鼠股骨HE染色图 |
4.5 本章小结 |
5 全文总结 |
参考文献 |
综述 |
参考文献 |
作者简历 |
攻读硕士学位期间完成的论文 |
(5)仿ECM纳米纤维结构壳聚糖微球构建软骨样组织工程复合体的体外实验研究(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
英文缩略语表 |
前言 |
第一部分仿 ECM 结构的壳聚糖纳米纤维微球的制备 |
1.1 引言 |
1.2 材料与方法 |
1.3 结果 |
1.4 讨论 |
1.5 小结 |
第二部分 仿ECM结构壳聚糖纳米纤维微球为载体利用bottom-up方案体外构建类软骨样组织工程复合体的实验研究 |
2.1 前言 |
2.2 材料与方法 |
2.3 实验结果 |
2.4 讨论 |
2.5 小结 |
全文总结 |
参考文献 |
附录一 |
附录二 |
附录三 |
致谢 |
攻读学位期间发表的学术论文目录 |
(6)LCC基生物材料的制备及其与人体肝细胞生物相容性的研究(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
第1章 绪论 |
1.1 组织工程简介 |
1.2 生物材料与三维支架 |
1.3 木素-碳水化合物复合体 |
1.4 木素-碳水化合物复合体与动物细胞的结合能力 |
1.5 天然LCC的生理活性和生物相容性 |
1.6 木素-碳水化合物复合体生物相容性尚需解决问题 |
1.7 肝细胞培养方式 |
1.7.1 单层培养法 |
1.7.2 双层胶原培养法 |
1.7.3 微载体点附培养法 |
1.7.4 微囊包裹培养法 |
1.7.5 中空纤维培养法 |
1.8 本研究的目的意义及主要内容 |
1.8.1 本研究的目的意义 |
1.8.2 本研究的主要内容 |
1.8.2.1 LCC基凝胶材料的制备 |
1.8.2.2 合成LCC纸浆材料的制备 |
1.8.2.3 取不同浓度梯度的可溶性银杏LCC用于细胞培养 |
1.8.2.4 LCC生物载体材料支持下人肝细胞体外培养的研究 |
第2章 LCC基凝胶材料在人肝细胞培养中应用的研究 |
2.1 引言 |
2.2 原料与实验 |
2.2.1 实验试剂和仪器 |
2.2.2 原料准备 |
2.2.2.1 原料粉末的准备 |
2.2.2.2 LCC的提取 |
2.2.3 成分测定 |
2.2.3.1 糖分析 |
2.2.3.2 木素含量分析 |
2.2.4 人肝细胞L-02体外培养 |
2.2.4.1 LCC基多孔凝胶材料的制备 |
2.2.4.2 凝胶材料在缓冲溶液中的稳定性 |
2.2.4.3 凝胶材料的吸水溶胀率 |
2.2.4.4 细胞悬液的制备 |
2.2.4.5 人肝细胞L-02的接种 |
2.2.4.6 细胞计数 |
2.2.4.7 倒置显微镜下的观察 |
2.2.4.8 扫描电子显微镜下的观察 |
2.2.5 人肝细胞代谢活性的检测 |
2.2.5.1 培养的人体肝细胞L-02分泌白蛋白含量的测定 |
2.2.5.2 培养的人肝细胞L-02合成尿素含量的测定 |
2.2.5.3 培养的人肝细胞L-02消耗葡萄糖含量的测定 |
2.3 结果与讨论 |
2.3.1 成分分析 |
2.3.2 凝胶材料在缓冲溶液中的稳定性 |
2.3.3 凝胶材料的吸水溶胀率 |
2.3.4 扫描电镜观察生物载体的形态 |
2.3.5 人肝细胞L-02计数结果 |
2.3.6 倒置相差生物显微镜下观察的结果 |
2.3.7 扫描电子显微镜下观察 |
2.3.8 代谢活性检测的结果 |
2.3.8.1 白蛋白的测定结果 |
2.3.8.2 血尿素氮的测定结果 |
2.3.8.3 葡萄糖的测定结果 |
2.4 实验小结 |
第3章 合成LCC纸浆材料在人肝细胞培养中应用的研究 |
3.1 引言 |
3.2 实验 |
3.2.1 实验试剂 |
3.2.2 合成LCC纸浆材料的制备 |
3.2.2.1 合成步骤 |
3.2.2.2 红外光谱检测 |
3.2.2.3 13C-NMR固态核磁共振波谱 |
3.2.2.4 纸浆材料的成分分析 |
3.2.2.5 扫描电镜观察纸浆表面形态 |
3.2.2.6 载体比表面积与孔径测定 |
3.2.3 人肝细胞L-02计数 |
3.2.4 倒置相差生物显微镜下观察 |
3.2.5 扫描电子显微镜下观察 |
3.2.6 代谢活性检测的结果 |
3.3 实验结果与讨论 |
3.3.1 红外光谱分析 |
3.3.2 核磁共振波谱分析 |
3.3.3 纸浆材料的成分分析 |
3.3.4 扫描电镜观察纸浆材料表面形态 |
3.3.5 比表面积测定结果 |
3.3.6 细胞计数结果 |
3.3.7 倒置相差生物显微镜下观察结果 |
3.3.8 扫描电子显微镜下观察 |
3.3.9 代谢活性检测的结果 |
3.3.9.1 白蛋白的测定结果 |
3.3.9.2 血尿素氮的测定结果 |
3.3.9.3 葡萄糖的测定结果 |
3.4 实验小结 |
第4章 不同浓度梯度的LCC应用于人体肝细胞培养 |
4.1 引言 |
4.2 原料与实验 |
4.2.1 实验试剂 |
4.2.2 银杏LCC的分离 |
4.2.3 成分测定 |
4.2.4 不同浓度梯度的银杏可溶性LCC用于细胞培养 |
4.2.4.1 含LCC培养液的制备 |
4.2.4.2 细胞悬液的制备 |
4.2.4.3 细胞培养过程 |
4.2.4.4 细胞计数 |
4.2.4.5 倒置显微镜下的观察 |
4.3 实验结果及分析 |
4.3.1 成分分析 |
4.3.2 培养的人肝细胞L-02计数结果 |
4.3.3 倒置显微镜下观察结果 |
4.3.4 培养的人肝细胞L-02代谢活性检测结果 |
4.4 实验小结 |
第5章 结论 |
5.1 本研究的主要成果 |
5.2 本研究的创新之处 |
5.3 下一步工作计划 |
参考文献 |
致谢 |
附录一 攻读硕士学位间参与的科研及发表的文章 |
(7)丝素蛋白基大孔微载体共培养C3A细胞治疗大鼠急性肝衰竭的实验研究(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
第一章 绪论 |
一 急性肝功能衰竭的修复机制与临床治疗 |
二 肝细胞来源 |
三 微载体培养技术 |
四 论文工作的提出 |
第二章 丝素蛋白基大孔微载体C3A细胞复合物的构建及细胞功能检测 |
前言 |
一 实验试剂与实验设备 |
二 实验方法 |
三 实验结果 |
四 结论 |
五 讨论 |
第三章 SF/GC大孔微载体C3A细胞复合物治疗大鼠急性肝衰模型作用的研究 |
前言 |
一 实验材料与试剂 |
二 实验方法 |
三 实验结果 |
四 结论 |
五 讨论 |
参考文献 |
附图 |
附录 |
攻读学位期间成果 |
致谢 |
(8)冷冻干燥法制备细胞微载体研究(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
第一章 绪论 |
1.1 人工肝的研究进展 |
1.2 制备细胞微载体常用的材料 |
1.2.1 壳聚糖 |
1.2.2 羧化壳聚糖 |
1.2.3 海藻酸钠 |
1.3 细胞微载体的制备技术 |
1.4 目前研究热点及立题意义 |
1.5 研究内容 |
第二章 冷冻干燥法制备多孔微载体及其性能表征 |
2.1 冷冻干燥法制备多孔微载体 |
2.1.1 冷冻干燥法的原理 |
2.1.2 冷冻干燥过程的参数设计 |
2.1.3 实验仪器和材料 |
2.1.4 N-羧丙酰壳聚糖钠/壳聚糖多孔微载体的制备 |
2.1.5 海藻酸钠/壳聚糖多孔微载体的制备 |
2.1.6 微载体制备的影响因素分析 |
2.2 多孔微载体的性能表征 |
2.3 结果与分析 |
2.3.1 N-羧丙酰壳聚糖钠/壳聚糖多孔微载体的性能表征 |
2.3.2 海藻酸钠/壳聚糖多孔微载体的性能表征 |
2.4 本章小结 |
第三章 三维多孔微载体/肝细胞复合体的构建及生物学特性检测 |
3.1 三维多孔微载体/肝细胞复合体的构建 |
3.2 壳聚糖微载体/肝细胞复合体的生物学特性检测 |
3.3 结果与分析 |
3.4 本章总结 |
第四章 结论与展望 |
4.1 研究结论 |
4.2 展望 |
参考文献 |
在读期间公开发表的论文和承担科研项目及取得成果 |
致谢 |
(9)基于微载体技术的生物人工肝研究进展(论文提纲范文)
1 生物人工肝的特点及其用于肝衰竭治疗的研究 |
2 微载体技术在生物人工肝中的应用 |
2.1 微载体附着培养肝细胞用于生物人工肝 |
2.2 微载体在构建生物反应器中的应用 |
3 构建生物人工肝应用的细胞材料 |
4 微载体技术存在的问题及解决策略 |
5 结论与展望 |
(10)肝靶向性壳聚糖基纳米载药体系的研究与应用(论文提纲范文)
0 引言 |
1 资料和方法 |
1.1 资料的纳入与排除标准 |
1.2 资料提取策略 |
2 结果 |
2.1研究人群/对象 |
2.2 结果分析 |
2.2.1 制备方法研究 |
2.2.2 在肝脏组织工程中的应用 |
3 讨论 |
四、THE PREPARATION OF FRUCTOSE-MODIFIED CHITOSAN MICROCARRIERS AND CULTURE OF PRIMARY RAT HEPATOCYTES(论文参考文献)
- [1]口服次血红素六肽改善2型糖尿病肝脏胰岛素抵抗的机制研究[D]. 汪凯. 吉林大学, 2020(03)
- [2]聚合物短纤维作为可注射药物载体和细胞球培养支架的研究[D]. 韦佼君. 西南交通大学, 2018
- [3]甘草次酸受体介导的雷公藤内酯醇纳米粒对原位肝癌治疗的研究[D]. 戴雅彬. 福建医科大学, 2017(04)
- [4]微载体/细胞复合物的共形微囊治疗肝损伤和骨质疏松的研究[D]. 贺颖. 浙江大学, 2016(05)
- [5]仿ECM纳米纤维结构壳聚糖微球构建软骨样组织工程复合体的体外实验研究[D]. 周咏. 上海交通大学, 2016
- [6]LCC基生物材料的制备及其与人体肝细胞生物相容性的研究[D]. 杨静. 湖北工业大学, 2015(08)
- [7]丝素蛋白基大孔微载体共培养C3A细胞治疗大鼠急性肝衰竭的实验研究[D]. 郭伟. 南方医科大学, 2013(03)
- [8]冷冻干燥法制备细胞微载体研究[D]. 李琳. 上海理工大学, 2012(02)
- [9]基于微载体技术的生物人工肝研究进展[J]. 丁舒,崔元璐,叶磊,姚康德. 科学通报, 2012(14)
- [10]肝靶向性壳聚糖基纳米载药体系的研究与应用[J]. 赵晓威. 中国组织工程研究与临床康复, 2010(38)