人参总皂苷对K562细胞Fas及其可溶性受体的影响

一、人参总皂甙对K562细胞Fas及其可溶性受体的影响（论文文献综述）

罗赟飞,吴迪炯,叶宝东,张翔,周郁鸿^[1]（2014）在《人参皂苷在血液系统疾病中应用及机制研究进展》文中研究说明人参皂苷（ginsenosides,GS）作为天然植物人参的提取物,在血液系统疾病的治疗中得到了广泛的研究及应用。就国内外学者对GS在促进造血、阻滞细胞周期、诱导定向分化、诱导凋亡、抑制肿瘤新生血管及淋巴管、免疫调节及逆转耐药及提高对化疗药物敏感性中的相关研究现状进行综述,并对其进一步研究及临床应用作了展望。

龙轩^[2]（2008）在《人参总皂苷对人红白血病细胞株（K562）JAK2、STAT5表达的影响》文中研究说明目的:白血病是人类好发的的恶性肿瘤,是由于造血干细胞增殖分化异常而导致的恶性增殖性疾病。迄今白血病的治疗仍主要采用传统的大剂量联合化疗,但此疗法副作用大,复发率高,而且对正常机体免疫与造血系统有极大的损害。许多中草药可以从蛋白质和分子水平影响造血干细胞的增殖与分化,从而达到重建、恢复造血机能的目的。人参总皂苷（Total saponins of pannax ginseng,TSPG）是人参的主要药理活性成分,我们既往研究表明:TSPG既能促进造血干/祖细胞增殖分化及其信号转导,又能抑制白血病细胞增殖,并可诱导白血病细胞凋亡和向较成熟细胞分化,但其作用机制尚不清楚。鉴于JAK2/STAT5信号途径调控白血病细胞增殖、分化和凋亡中的重要性,我们推测JAK2、STAT5可能参与了TSPG对K562细胞的增殖、分化或凋亡调控。本研究采用免疫细胞化学、Western blotting和ELISA等方法,初步探讨TSPG对K562细胞JAK2、STAT5表达的影响,为发现与寻找TSPG调控白血病细胞增殖、分化或凋亡的分子靶点奠定基础,为临床治疗血液学疾病提供指导。方法:1、体外培养人红白粒系白血病细胞株K562。2、采用免疫细胞化学检测TSPG对K562细胞JAK2、STAT5表达的影响。3、ELISA测定TSPG作用K562细胞前后细胞质JAK2和细胞质、细胞核中STAT5蛋白表达含量的变化。4、采用Western blotting检测TSPG对K562细胞的细胞质JAK2和细胞质、细胞核中STAT5蛋白表达的影响。结果:1、免疫细胞化学染色;用JAK2抗体显示K562细胞JAK2表达,可见对照组K562细胞胞质呈棕褐色;经TSPG 200 mg/L作用12 h后,K562细胞胞质着色变浅。实验组K562细胞胞质平均光密度值0.178±0.08显着低于对照组0.245±0.06（P＜0.05）。2、ELISA及Western blotting检测提示随着TSPG作用K562细胞时间的延长,细胞质中JAK2的表达逐渐减弱。3、免疫细胞化学染色;用STAT5抗体显示K562细胞STAT5表达,可见对照组K562细胞的细胞质和细胞核着色浅淡;经TSPG 200 mg/L作用12h后,K562细胞的细胞质和细胞核着色明显加深,表达增强。4、ELISA及Western blotting检测提示随着TSPG作用K562细胞时间的延长,细胞质和细胞核中STAT5的表达都逐渐增强。结论:1、TSPG降低K562细胞JAK2蛋白的表达,可能与TSPG诱导K562细胞的凋亡及抑制其生长有关。2、TSPG能增强K562细胞STAT5的表达,可能是TSPG诱导K562细胞向红系细胞分化的作用机制之一。

王萍^[3]（2007）在《人参总皂苷和小檗碱对肿瘤主动性免疫逃逸机制的影响》文中提出免疫逃逸（immune escape）在肿瘤的发生、发展过程中有着重要的作用,其机制复杂,涉及肿瘤和宿主两方面。从肿瘤角度来说,一方面,肿瘤抗原的缺失、MHC分子的改变、共刺激分子的缺乏等可以使肿瘤免受宿主免疫细胞的识别,从而逃脱抗肿瘤免疫反应;另一方面,肿瘤也可以通过“Fas反击机制”、免疫抑制性分子的分泌等机制主动影响抗肿瘤免疫细胞的增殖活化或功能。人参总皂苷（Gs）、小檗碱（Ber）分别是补益药人参和清热解毒药黄连等的组分,抗肿瘤作用明显。Gs和Ber的抗肿瘤作用机制主要是抑制增殖、诱导凋亡,抑制侵袭和转移,诱导分化等方面,在肿瘤免疫逃逸机制方面的研究尚未见报道。本研究观察了Gs和Ber对人肺癌PG细胞抑制Jurkat T淋巴细胞增殖和促进其凋亡的影响,以及对PG细胞FasL、Fas分子的表达及其TGF-β1、PGE2分泌的作用,以探讨Gs和Ber对肿瘤细胞主动性免疫逃逸机制的影响,为Gs和Ber的抗肿瘤作用机制扩展新的研究内容,并为药物的合理运用提供实验依据。本研究运用人参总皂苷和小檗碱处理肺癌PG细胞24h后进行实验,分组如下:Control组（PG细胞未经药物处理）,Gs组（PG细胞经100μg/ml人参总皂苷处理）和Ber组（PG细胞经10μg/ml小檗碱处理）。1.首先建立PG细胞与Jurkat T细胞的共培养体系,观察Jurkat T细胞的生长状况和增殖情况。（1）倒置显微镜下直接观察到,Jurkat T细胞在单独培养情况下成团生长,而Jurkat T细胞与PG细胞共培养24h后呈散在生长;Jurkat T细胞与Gs组和Ber组PG细胞共培养后数目均较Control组明显减少。（2）台盼兰拒染实验结果显示,共培养6h、24h后,Jurkat T细胞活细胞数目明显减少,与单独培养组（Jurkat T组）有统计学差异（P<0.05）;而Jurkat T细胞与Gs组PG细胞共培养6h、24h后其生长抑制均较Control组明显,Jurkat T细胞与Ber组PG细胞共培养24h后其生长抑制也与Control组有统计学差异（P<0.01）;（3）PG细胞培养上清液与Jurkat T细胞孵育实验结果表明,各组PG细胞培养上清液与T细胞悬液（细胞数不变）的体积比为2:1、1:1、0.5:1时,Jurkat T细胞的生长均受到抑制,大部分组与阴性对照组（Jurkat T组）比较有统计学差异,且呈体积依赖性;各不同体积比组中,Gs组、Ber组与Control组比较均无差异。结果提示,PG细胞对Jurkat T细胞的生长有抑制作用,此作用在人参总皂苷和小檗碱处理PG细胞后更为显着。2.分别用形态学方法和流式细胞术观察和检测了共培养体系中Jurkat T细胞的凋亡。（1）Giemsa染色结果显示,单独培养的Jurkat T细胞形态均一,呈球形,核大,几乎占据整个胞浆,呈均匀的紫黑色;共培养组Jurkat T细胞形态不均一,不规则细胞增多,核可见裂纹及固缩现象;（2）在荧光显微镜下,吖啶橙染色显示:单独培养组Jurkat T细胞的细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光,圆形,形态均一,胞浆呈橘红色或荧光不明显;共培养组Jurkat T细胞形态不均一,可见细胞核绿色荧光呈半月型等固缩形态,并可见呈现弱荧光的细胞。（3）流式细胞术检测结果表明,Jurkat T细胞在单独培养条件下的自然凋亡率较低（早期凋亡率为:5.57%,中晚凋亡率为:4.67%）,而各共培养组均表现出较高的凋亡率（早期凋亡率>10%,而中晚期凋亡率为50%左右）,两者不管在早期或中晚期差异均有极显着性;而共培养Gs组的Jurkat T细胞早期凋亡率为15.79%,与Control组比较（11.40%）有统计学差异（P<0.05）,Ber组凋亡率与对照组无差异;而Gs组、Ber组Jurkat T细胞的中晚期凋亡率与Control组比较差异不明显,但Gs组与Ber组的总凋亡率,即各期凋亡率总和,与Control组比较均有差异（P<0.01,P<0.05）。结果提示,PG细胞可以诱导Jurkat T细胞的凋亡,Gs和Ber均可以促进PG细胞诱导Jurkat T细胞的凋亡。3.免疫细胞化学法检测PG细胞FasL、Fas分子的表达。结果如下（1）肺癌PG细胞有FasL分子的表达,主要分布在胞浆;Gs和Ber均可使PG细胞FasL分子的阳性表达增强。（2）Fas分子在PG细胞也有表达,主要分布在胞浆,胞膜亦有表达;Gs和Ber对Fas分子表达无明显影响。（3）FasL、Fas分子表达的图像分析结果表明,Gs和Ber对FasL分子的表达有上调作用,与对照组比较差异有显着性（P<0.05, P<0.01）;Gs对Fas的表达亦有上调作用,而Ber无影响。结果提示,PG细胞有FasL、Fas分子的表达;Gs和Ber能促进FasL和/或Fas的表达。4.运用ELISA法和放射性免疫法分别检测PG细胞培养上清液中转化生长因子β1（TGF-β1）和前列腺素E2（PGE2）的含量。结果显示,PG细胞可分泌TGF-β1和PGE2,100μg/mlGs和5μg/ml、2.5μg/ml Ber均可以促进TGF-β1的分泌;但Gs和Ber各浓度组均对PGE2的分泌无影响。结果提示,PG细胞能分泌TGF-β1和PGE2,Gs和Ber可以促进TGF-β1的分泌,而对PGE2无影响。上述结果表明,肺癌PG细胞能抑制共培养的Jurkat T细胞的增殖并诱导其凋亡,而Gs和Ber能增强肿瘤PG细胞的这种作用,其机制可能与Gs和Ber上调PG细胞凋亡相关分子FasL、Fas的表达以及增加免疫抑制性细胞因子TGF-β1的分泌有关。因此推断,人参总皂苷和小檗碱在抗肿瘤的同时也有可能促进肿瘤的免疫逃逸。

张威^[4]（2007）在《珍珠菜提取物抗白血病作用及其机制研究》文中认为目的:研究珍珠菜（Lysimachia Clethroides Duby）提取物（ZE4）的抗白血病作用,初步探讨其可能的作用机制。方法:采用药效活性跟踪法进行提取物抗肿瘤活性筛选,建立小鼠白血病L1210的体内模型,观察ZE4的体内抗白血病作用。用不同浓度的ZE4处理人慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞,采用MTT法和3H-TdR测定ZE4对K562细胞的增殖抑制作用;用流式细胞仪检测药物对K562细胞周期的影响;用单细胞凝胶电泳分析ZE4对K562细胞DNA的损伤;Hoechst33258荧光染色观察DNA片断化的凋亡征象;通过流式细胞仪和Western blot观察ZE4诱导的K562细胞死亡中的分子机制结果:珍珠菜提取物ZE4有明显的体内抗白血病作用;MTT法和3H-TdR结果表明,ZE4对K562细胞的增长有显着的抑制作用,并呈浓度和时间依赖性。流式细胞仪检测到给药后K562细胞发生G2/M期或G0/G1期的阻滞和凋亡的发生。单细胞凝胶电泳显示给药后的K562细胞出现明显的彗尾状DNA溢漏。Hoechst33258染色结果显示给药后的K562细胞核体积变小、皱缩,可见致密荧光,染色体DNA呈浓染的团块状、颗粒状分布。流式细胞仪检测到给药后K562细胞凋亡受体fas表达增高,Western blot结果显示药物诱导K562细胞Trail、DR5蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调。结论:珍珠菜提取物ZE4有明显的体内外抗白血病作用,其作用机制可能是通过调节一系列的凋亡相关因子诱导细胞发生凋亡和对细胞DNA直接杀伤的共同结果。

陈婷梅^[5]（2007）在《人胱抑素C抗体制备和检测方法建立及其方法学评价》文中研究表明胱抑素C （cystatin C, Cys C）即半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白,其血清浓度测定是优于传统的血尿素、尿酸、肌酐和内生肌酐清除率测定的新的肾功能评价指标。2002年FDA网上公布了26个在检验医学有重大突破的全新检测项目,血清（浆）Cys C测定便是其中之一。但目前临床试验室测定Cys C均为需要昂贵特殊仪器和试剂盒的方法,制约了其推广应用。目的:构建人Cys C的原核表达载体,将纯化的Cys C重组蛋白免疫大白兔,制备Cys C抗血清,为建立Cys C的检测方法奠定基础;用自制的Cys C抗血清,建立可在自动生化分析仪上定量测定血清Cys C的颗粒增强透射免疫分析法（ particle enhanced turbidimetric immunoassay, PETIA）,并进行方法学评价,,为该法的临床应用奠定基础;用纯化的重组Cys C蛋白免疫Balb/c小鼠,制备Cys C单克隆抗体,为进一步建立Cys C其他免疫学测定方法,以及研究Cys C的其他生物学作用和机制提供基础。方法:1.采用RT-PCR技术,从细胞中扩增Cys C目的基因,并将其克隆到pET32a（+）原核表达载体,构建重组Cys C原核表达质粒pET32a（+）/Cys C。2.将构建的重组表达质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）,诱导重组蛋白表达,表达蛋白经镍离子亲和层析系统纯化,并进行鉴定。3.用纯化重组蛋白免疫大白兔,制备Cys C抗血清。4.采用自制提纯的Cys C抗血清包被乳胶颗粒,建立可在自动生化分析仪上定量测定Cys C的PETIA,并将此法与进口商品化试剂盒进行比对实验,以及进行准确度、精密度、线性范围、检测限、干扰试验等方法学评价试验。5.用纯化重组的Cys C蛋白免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经过克隆化和筛选,建立稳定分泌抗Cys C的杂交瘤细胞株,并通过动物体内诱生腹水大量制备单克隆抗体。结果:1.经基因克隆及重组技术,获得了35 kD的Cys C融合蛋白,其表达形式为不溶性包涵体,此包涵体蛋白经Ni2+亲和层析能有效纯化;以该蛋白免疫大白兔制备了Cys C抗血清。2.采用自制提纯的Cys C抗血清包被乳胶颗粒,建立了可在自动生化分析仪上定量测定Cys C的PETIA,方法学评价实验显示该法具有较好的检测性能指标,并与进口的商品试剂盒有很好的可比性,符合临床应用要求。3.采用杂交瘤技术,建立了稳定分泌抗Cys C单克隆抗体的2株杂交瘤细胞株,将其中1株细胞注射于小鼠腹腔,得到了富含Cys C单克隆抗体的小鼠腹水。结论:1.经基因重组技术获得了35 kD的Cys C融合蛋白,利用此蛋白抗原制备得到兔抗人Cys C抗血清（多克隆抗体）,并成功制备了鼠抗人Cys C单克隆抗体。2.采用自制的Cys C抗血清,建立了在自动生化分析仪上定量测定Cys C的PETIA,该法具有较好的性能指标,与商品化进口试剂盒有很好的可比性,符合临床应用要求。

付本懂^[6]（2006）在《人参皂苷抗马立克氏病肿瘤形成作用及其机制研究》文中研究指明恶性肿瘤是危害人类及动物健康的最严重疾病之一,为了探索人参皂苷抗肿瘤作用及其机理,本课题以鸡马立克氏病肿瘤细胞系-MSB-1为体外研究对象,对MSB-1细胞的主要生物学特性、马立克氏病致瘤相关基因-meq基因在不同病变组织中的变化、人参总皂苷对MSB-1细胞的增殖抑制作用及其机制等方面进行了深入研究。结果发现,以一定浓度的MSB-1细胞接种马立克氏病易感鸡群可以产生典型的马立克氏病临床症状和病理变化,经琼脂扩散实验和meq基因PCR扩增得以鉴定;马立克氏病致瘤相关基因-meq基因在马立克氏病病毒由体内向体外转移的过程中缺失了一段长为180 bp的DNA序列;人参总皂苷对MSB-1细胞确有增殖抑制作用,并呈时间-剂量依赖性,经流式细胞术、电镜形态学观察、荧光检测以及L-meq基因半定量RT-PCR分析发现,其增殖抑制机理可能与人参总皂苷抑制MSB-1细胞DNA合成、诱导部分细胞发生凋亡以及显着提高L-meq基因mRNA丰度有关。

曹唯希,陈婷梅,刘琼,王亚平,姜蓉^[7]（2004）在《人参总皂甙对K562细胞Fas及其可溶性受体的影响》文中指出目的 :研究人参总皂甙 （TSPG）诱导K5 6 2细胞凋亡的机理。方法 :采用形态学观察、原位末端标记法 （TUNEL）观察不同浓度人参总皂甙对K5 6 2白血病细胞凋亡的影响 ;用免疫组化法检测TSPG诱导K5 6 2细胞凋亡中Fas表达情况 ,并采用酶联免疫吸附法 （ELISA）检测可溶性Fas（sFas）。结果 :5 0、10 0 μg/mlTSPG可诱导K5 6 2细胞凋亡 ;同时实验组Fas表达明显增高 （P <0 .0 1） ,而sfas无明显变化。结论 :TSPG诱导K5 6 2细胞凋亡与其诱导细胞Fas高表达有关。

二、人参总皂甙对K562细胞Fas及其可溶性受体的影响（论文开题报告）

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、人参总皂甙对K562细胞Fas及其可溶性受体的影响（论文提纲范文）

（1）人参皂苷在血液系统疾病中应用及机制研究进展（论文提纲范文）

（2）人参总皂苷对人红白血病细胞株（K562）JAK2、STAT5表达的影响（论文提纲范文）

（3）人参总皂苷和小檗碱对肿瘤主动性免疫逃逸机制的影响（论文提纲范文）

（4）珍珠菜提取物抗白血病作用及其机制研究（论文提纲范文）

（5）人胱抑素C抗体制备和检测方法建立及其方法学评价（论文提纲范文）

（6）人参皂苷抗马立克氏病肿瘤形成作用及其机制研究（论文提纲范文）

（7）人参总皂甙对K562细胞Fas及其可溶性受体的影响（论文提纲范文）

四、人参总皂甙对K562细胞Fas及其可溶性受体的影响（论文参考文献）

• [1]人参皂苷在血液系统疾病中应用及机制研究进展[J]. 罗赟飞,吴迪炯,叶宝东,张翔,周郁鸿. 中华中医药学刊, 2014(07)
• [2]人参总皂苷对人红白血病细胞株（K562）JAK2、STAT5表达的影响[D]. 龙轩. 重庆医科大学, 2008(01)
• [3]人参总皂苷和小檗碱对肿瘤主动性免疫逃逸机制的影响[D]. 王萍. 北京中医药大学, 2007(02)
• [4]珍珠菜提取物抗白血病作用及其机制研究[D]. 张威. 苏州大学, 2007(03)
• [5]人胱抑素C抗体制备和检测方法建立及其方法学评价[D]. 陈婷梅. 重庆医科大学, 2007(02)
• [6]人参皂苷抗马立克氏病肿瘤形成作用及其机制研究[D]. 付本懂. 吉林大学, 2006(09)
• [7]人参总皂甙对K562细胞Fas及其可溶性受体的影响[J]. 曹唯希,陈婷梅,刘琼,王亚平,姜蓉. 重庆医科大学学报, 2004(06)

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