一、牦牛布氏杆菌病免疫中菌苗的研究和应用情况（论文文献综述）
孟克达拉[1]（2019）在《牦牛布氏杆菌病防控》文中认为牦牛布鲁氏杆菌病是由布鲁氏杆菌感染引起的一种人畜共患病。该种疾病对牦牛养殖产业造成的危害巨大,严重影响牦牛养殖产业的健康发展,如果没有采取有效措施进行针对性地扑杀无害化处理,很容易造成疫情的快速传播蔓延。该文主要结合实际工作经验,分析牦牛布鲁氏杆菌病的流行特点、临床症状、病理学变化、诊断方法以及防控措施,以更好地防控该种疾病。
李宏艳[2]（2019）在《布鲁氏菌VirB12的重组表达及其用于标记疫苗细胞免疫鉴别研究》文中认为研究背景:布鲁氏菌病（简称布病）是一种严重危害畜牧业的人兽共患病,动物布病主要依赖疫苗免疫来预防和控制。目前,国内疫苗株主要有3种,分别是S2（主要用于猪布鲁氏防疫）、A19（用于牛布鲁氏防疫）、M5-90（用于绵羊布鲁氏防疫）。这些疫苗在预防和控制动物布鲁氏菌传播中发挥了重要作用。在这些疫苗的实际应用中,也存在一些问题。而血清学监测是动物布病诊断最主要的技术手段,主要有常用的虎红平板凝集、试管凝集等方法,但是这些方法无法区分哪些是自然感染抗体,哪些是免疫抗体,给防疫工作的开展带来很大困难。基因标记疫苗被认为是解决布病疫苗免疫与自然感染鉴别诊断难题的新型疫苗形式。由天康生物股份有限公司研发的A19-ΔVirB12基因标记疫苗,其毒力与母本株相比降低,具有良好的保护作用。利用VirB12蛋白能够进行血清学诊断。本研究旨在通过体外重组表达VirB12蛋白,分析VirB12蛋白的细胞免疫特性,并探讨其在疫苗免疫与自然感染中鉴别的可行性。研究方法:提取细菌基因组DNA,根据NCBI上登录的布鲁氏菌A19菌株virB12基因序列,使用分子生物学软件prime premier 5.0设计并合成了1对扩增virB12基因的引物。利用PCR方法扩增出virB12基因,并克隆到pET-28a质粒载体上,转化到大肠杆菌BL21（DE3）中,用IPTG进行诱导表达,表达产物经镍柱纯化,并对纯化后的表达产物进行免疫印迹鉴定。布鲁氏菌A19-ΔVirB12菌株与亲本株布鲁氏菌A19株及牛种强毒2308株相比缺少了virB12基因,A19-ΔVirB12菌株在生长过程中不表达对应的VirB12蛋白,动物在免疫接种后无法产生VirB12抗体及对应的免疫记忆,本实验通过体外提取A19菌株和A19-ΔVirB12菌株免疫后试验动物的外周血淋巴细胞,培养后用VirB12蛋白作为抗原刺激淋巴细胞,然后检测IFN-γ,对A19菌株和A19-ΔVirB12菌株进行免疫鉴别。研究结果:本试验成功构建了布鲁氏菌A19菌株virB12基因的原核表达载体,诱导表达的VirB12蛋白经纯化后获得了纯度较高的重组蛋白,免疫印记试验显示该重组蛋白有较好的反应原性,与布鲁氏菌野毒阳性血清有反应,与A19-ΔVirB12菌株免疫血清无反应。采用纯化的VirB12蛋白进行的体外IFN-γ检测,结果显示,A19菌株免疫组与A19-ΔVirB12菌株免疫组的外周血淋巴细胞（PBMC）经VirB12刺激后产生的IFN-γ存在显着差异（P<0.001）,表明通过这种体外PBMC细胞提取及VirB12蛋白刺激可以鉴别区分A19菌株与A19-ΔVirB12菌株免疫。结论:本研究成功构建了VirB12蛋白的原核表达菌株,经纯化后的VirB12蛋白可以作为刺激抗原,在体外IFN-γ水平上可实现对A19菌株免疫与A19-ΔVirB12菌株免疫进行区分,为布氏菌病的防控及净化提供新的方法和思路。
宋前进[3]（2019）在《羊种布鲁菌Rev.1菌株eryA基因的克隆表达及单抗制备》文中指出布鲁菌病是全球重大的人兽共患病,近年来我国布鲁菌病呈上升趋势,给我国经济造成了巨大损失。本研究通过分析羊种布鲁菌Rev.I株的基因结构、功能及作为诊断抗原的可能性,对eryA基因进行生物信息学分析及原核表达和单克隆抗体的制备。结果表明,本试验成功克隆并表达了 eryA基因;经Western-Blot检测,表达蛋白可与标准阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性;生物信息学分析显示,该蛋白没有跨膜区结构,无信号肽,二级结构中α-螺旋比重最大;抗原表位分析显示,该蛋白含有较多的抗原决定簇。用纯化的蛋白免疫小鼠后采取小鼠脾细胞进行融合后筛选出分泌IgG抗体的杂交瘤细胞,经扩大培养后对小鼠进行腹腔注射,收集腹水并纯化,纯化后的抗体经BCA方法测定及SDS-PAGE检测发现得到高纯度的抗体。通过对eryA基因的研究,为布病检测方法的建立奠定基础。
杜玮[4]（2018）在《Myostatin DNA疫苗及前肽蛋白免疫动物对肌肉生长的影响》文中研究说明Myostatin,肌肉生长抑制素,是肌肉生长发育的抑制因子。本研究针对Myostatin前肽和成熟肽分别制备拮抗剂与疫苗,从细胞和动物个体水平验证这两种生物制剂对绵羊骨骼肌发育的影响。主要研究内容及结果如下:1.绵羊Myostatin前肽对成肌细胞分化的作用。构建和包装Myostatin前肽过表达慢病毒载体,制备慢病毒,分别用慢病毒感染C2C12细胞,检测Myostatin前肽对C2C12细胞分化的影响。结果对照组和试验组肌管融合率分别为5.62%和9.38%,试验组的肌管融合率显着高于对照组（P<0.05）。结果表明Myostatin前肽基因的过表达可能抑制了Myostatin,从而促进了肌管的形成。2.Myostatin前肽蛋白在毕赤酵母中的表达。根据毕赤酵母密码子的偏嗜性及Myostatin前肽蛋白特定位点突变后生物学活性增强的特性,完成对羊Myostatin前肽基因序列的密码子优化,并将第76位的天冬氨酸（Asp）突变成丙氨酸（Ala）。将修饰后的Myostatin前肽基因克隆至酵母表达载体pPIC9K,构建酵母表达重组质粒pPIC9K-Msp。用电转化把重组质粒转入毕赤酵母GS115中,通过G418的抗性加压筛选得到高拷贝的转化子,经甲醇诱导、SDS-PAGE及Western-bolt分析,证实Myostatin前肽蛋白在毕赤酵母中获得了表达,产物大小约28KD,与预期大小相符。3.Myostatin前肽蛋白在大肠杆菌中的表达。设计含有SalⅠ和BamHⅠ酶切位点的引物,扩增密码子优化且第76位天冬氨酸突变为丙氨酸的Myostatin前肽基因,并将其克隆至pMD18-T载体中,测序后经SalⅠ和BamHⅠ双酶切,将目的片段插入到原核表达质粒pMAL/c5x的多克隆位点,构建麦芽糖结合蛋白（MBP）与突变型Myostatin前肽基因的融合表达质粒pMAL/c5x-sMSTNProM。将重组表达质粒转化DH5α感受态细胞,筛选并鉴定的阳性重组菌经IPTG诱导表达了可溶性的融合蛋白,SDS-PAGE电泳结果表明该重组目的蛋白大小约为75KD,与预期大小相符。该蛋白的成功表达为后续的动物试验奠定了基础。4.Myostatin前肽蛋白对羔羊肌肉生长的影响,由于Myostatin前肽蛋白在毕赤酵母中的表达量低,无法满足动物试验要求,因此本次免疫中选择在大肠杆菌中大量表达突变型Myostatin前肽蛋白免疫绵羊。选择7日龄左右的阿勒泰羔羊10只,随机分为2个组（试验组和对照组各5只）,试验羔羊平均体重经过统计分析差异不显着,试验组注射突变型Myostatin前肽蛋白,注射剂量为0.5ml/只（Myostatin前肽蛋白浓度800μg/ml）,对照组注射相同剂量的PBS,自试验羔羊7日龄开始进行肌肉注射,整个试验期共注射三次,每次间隔一周,试验期间测定试验羔羊生长发育,饲喂至4月龄进行屠宰,取腓肠肌样品进行H&E染色,观察肌纤维的直径大小,Realtime-PCR检测Myostatin信号通路相关基因的表达。结果试验组羔羊体重、腿围、优质肉块重量（股二头肌、腓肠肌、半腱肌、股外侧肌）与对照组相比均无显着性差异;试验组平均单个肌束肌纤维细胞横断面积为1163.01μM2,显着大于对照组的845.09μM2（P<0.05）;试验组Myostatin、Smad3、p21表达量均低于对照组,而Myf5、MyoD、Myogenin的表达量均高于对照组,其中MyoD的表达量显着高于对照组（P<0.05）。实验结果表明Myostatin前肽蛋白对Myostatin起到了抑制作用,促进了肌肉生长。5.Myostatin成熟肽核酸疫苗的制备及对小鼠肌肉生长的影响。利用人工合成DNA的方法获得了密码子优化的乙肝表面抗原（HBsAg S）基因和羊Myostatin成熟肽的融合基因片段SM,将该融合基因SM克隆至基因疫苗专用载体pVAX1中,构建pV-SM重组质粒,并在BALB/c小鼠进行动物试验。选择出生20天左右、体重13-15g的雌性BALB/c小鼠20只,随机分成2个组（试验组和对照组各1个）试验组免疫Myostatin成熟肽核酸疫苗,共计免疫三次,每次免疫间隔一周,每次免疫剂量25μl（Myostatin成熟肽核酸疫苗浓度800μg/ml）,对照组注射相同剂量的灭菌生理盐水。试验期间测定试验小鼠体重,饲喂75天取腓肠肌样品进行H&E染色,测定肌纤维直径以及抗体水平,并利用Realtime-PCR检测Myostatin信号通路下游及相关基因的表达。结果显示:试验组小鼠平均胴体重10.82±0.55g,显着高于对照组的8.28±0.29g（P<0.05）;试验组平均单个肌纤维横断面面积为1257.43±58.48μM2,极显着的大于对照组的988.48±44.97μM2（P<0.01）;试验组Myf5、MyoD、Myogenin的表达量均显着高于对照组（P<0.05）,Myostatin、Smad3表达量低于对照组,但经过统计分析,差异不显着（P>0.05）。6.Myostatin成熟肽核酸疫苗对羔羊肌肉生长的影响。将7日龄阿勒泰母羔羊20只随机分为2个组,试验组和对照组各10只,试验组平均体重7.75±0.52kg,对照组7.88±0.63kg,经过统计分析差异不显着（P>0.05）。试验组免疫Myostatin成熟肽核酸疫苗,共免疫三次,每次免疫间隔一周,每次免疫剂量0.5ml（Myostatin成熟肽核酸疫苗浓度800μg/ml）,对照组注射相同剂量的灭菌生理盐水。试验期间测定试验羔羊体重,饲喂155日龄进行屠宰,取腓肠肌样品进行H&E染色,测定肌纤维直径及抗体水平,并利用Realtime-PCR检测Myostatin信号通路下游及相关基因的表达。结果显示:羔羊饲喂至155日龄时,试验组平均体重高于对照组,但经过统计分析差异不显着（P>0.05）;试验组平均胴体重为12.94±0.67kg,显着高于对照组的10.55±0.84kg（P<0.05）;试验组平均单个肌纤维横断面积为815.00±12.67μM2,极显着高于对照组469.61±8.05μM2（P<0.01）;试验组Myostatin的表达量极显着低于对照组（P<0.01）;试验组Smad3的表达量显着低于对照组（P<0.05）;试验组MyoD的表达量显着高于对照组（P<0.05）;试验组其他各项指标Myf5、Myogenin、p21的表达量均高于对照组,但统计分析差异不显着（P>0.05）。结论:成功制备了突变型Myostatin前肽蛋白和Myostatin成熟肽核酸疫苗,并完成细胞分化和动物试验,证实了Myostatin前肽蛋白和Myostatin成熟肽核酸疫苗能抑制Myostatin的功能,具有促进动物肌肉生长的作用或趋势。
王一飞,贡嘎,程少龙,索朗斯珠[5]（2018）在《西藏牦牛布氏杆菌病流行病学调查》文中研究说明本研究旨为了了解牦牛布氏杆菌病在西藏牦牛群中的血清抗体分布情况,本团队2016年先后从西藏:拉萨、林芝、日喀则、昌都、那曲、山南、阿里地区共采集牦牛血清572份,选用酶联免疫吸附试验（ELISA）法进行血清抗体检测。结果表明西藏牦牛布氏杆菌病血清抗体总阳性率达到17.66%,其中林芝市为24.18%、那曲市7.69%、山南市11.54%、拉萨市15.38%、阿里地区14.29%、日喀则市26.37%、昌都市19.78%,结果说明西藏各地区牦牛群中布氏杆菌病的血清抗体阳性现象均有分布,应引起重视。
姜岳[6]（2018）在《布鲁氏菌的EF-Tu蛋白单克隆抗体制备及其识别表位的鉴定》文中研究指明布鲁氏菌病（Brucellosis）是一种细菌性的临床上常以长期发热、多汗、关节炎、淋巴结与肝脾肿大为特征,而且还容易造成动物的流产、不孕及睾丸炎等疾病人畜共患病,由布氏菌属的胞内细菌引起,在世界许多地方仍是一个严重的农业、全球健康和经济问题。近几年布鲁氏菌病流行趋势日趋严重,我国在防控布鲁氏菌病疫情的形式上也不容乐观。细菌EF-Tu参与蛋白质的合成,介导氨酰-tRNA进入核糖体的空位,是一种重要的延伸因子,在原核生物中广泛存在,而且高度保守。最近的研究表明,EF-Tu是一种重要的多功能蛋白,不仅仅是作为蛋白翻译因子起作用,而且更重要的是EF-Tu参与许多重要的细胞和疾病过程,包括信号传导、翻译控制、凋亡、细胞骨架组成等。但目前很少有研究表明这种蛋白质在布鲁氏菌中的作用。其中一个重要的原因是目前还没有专门的工具来识别这种蛋白质。本研究利用原核表达的EF-Tu蛋白免疫BALB/c小鼠,免疫的BALB/c小鼠抗体效价达到单克隆抗体制备的标准后,经细胞融合、间接ELISA筛选、5次亚克隆获得1株稳定分泌单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞,命名为BD6。应用Western-blot与间接荧光免疫的方法鉴定其特异识别布鲁氏菌EF-Tu蛋白。继而用肽扫描法筛选并鉴定了其抗原表位110QTREHIL116。生物信息分析表明,该抗原决定区位于一个高亲水性的区域,并形成了阿尔法螺旋体的一部分。最后,我们利用BD6 MAb识别的抗原表位作为检测抗原,对50例临床牛血清进行Dot blot检测,与RBPT和Brucella-Ab C-ELISA两种检测方法相比,阳性吻合率100%,阴性吻合率95%,Dot blot检测结果具有很高的符合率。这些发现将为研究布鲁氏菌的抗原结构提供了有用的信息,并且可能对布鲁氏菌感染的抗原决定簇疫苗的开发或对布鲁氏菌的诊断具有重大价值,为研究布鲁氏菌EF-Tu蛋白的潜在功能提供了强有力的工具。
王兴童,韩凌霞[7]（2018）在《兽用疫苗中替代方法的研究进展》文中认为本文介绍了兽用疫苗效力检验和安全检验中替代方法的应用及研究进展,并提出适合建立替代方法的兽用疫苗,以期为我国兽用疫苗替代方法研究提供思路。
姚馨[8]（2017）在《景泰县羊布鲁氏菌病流行病学监测分析及防控措施》文中研究指明布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的人兽共患传染病,严重危害人类健康,给畜牧业生产造成了巨大的直接和间接的经济损失,近年来国内外该病疫情均呈现回升势头,控制该病蔓延势在必行。景泰县地处甘肃、宁夏、内蒙古三省交界地带,做好该地区布鲁氏菌流行病学调查不仅可以反映出三省布鲁氏菌病发病情况,而且有助于为相关地区建立布鲁氏菌的防控措施提供参考。此次流行病学监测分析采集了景泰县2014-2015年未经免疫的羊血清66934份,采用虎红平板凝集试验（Ross-Bengal Plate Agglutination Test,RBPT）和试管凝集试验（Standard Tube Agglutination Test,SAT）的血清学检测方法共检测出阳性数3129份,阳性率高达4.67%。其中2014年检测21116份血清样品,阳性646份,阳性率为3.06%;2015年检测45818份血清样品,阳性2483份,阳性率5.42%。2015年阳性率5.42%显着高于2014年3.06%。从羊的品种来讲,本地区山羊饲养量109213只明显低于绵羊饲养量612721只,但山羊感染布鲁氏菌病的阳性率6.95%显着高于绵羊阳性率4.40%;按不同饲养方式（种畜场、散户、规模场）的检测结果显示,大规模养羊场感染率最高,阳性率7.92%,其次为散养户阳性率5.50%,最少的为种畜场,阳性率3.91%。养殖户对布鲁氏菌病认知程度不够,并缺乏有效的防控措施,加之羊只的频繁交易和大量流通等原因是造成本病严重流行的主要原因;而山羊感染率高于绵羊主要与其饲养方式有关。通过对景泰县羊布鲁氏菌病监测分析,掌握了2014年-2015年布鲁氏菌病的流行趋势,流行规律和特点,为景泰县防控家畜布鲁氏菌病提供了参考资料。
林元清[9]（2018）在《青海海东地区奶牛布鲁氏菌病与结核流行病学调查》文中指出奶牛布鲁氏菌病是由布鲁氏菌属细菌引起的人兽共患的常见传染病,牛结核是由牛分枝杆菌引起的一种人兽共患的慢性传染病,我国将其列为二类动物疫病。有效地预防、控制和消灭奶牛布鲁氏菌病和结核,对保障畜牧业健康发展和人民群众身体健康具有十分重要的意义。本研究主要内容是使用虎红平板凝集实验、试管凝集试验和提纯结核菌素皮内变态反应试验以及ELISA方法对青海海东地区奶牛布鲁氏菌病和结核进行检测,结合流行病学调查,分析该地区奶牛布鲁氏菌病和结核的流行,为今后青海省海东地区奶牛布鲁氏菌病和结核的防控提供依据。1.奶牛布鲁氏菌病检测及流行病学调查采用虎红平板凝集试验和试管凝集试验对2015年青海海东地区养殖的部分奶牛场采集的3 270头份血清进行布鲁氏菌病检测,虎红平板凝集试验初筛出阳性89份,用试管凝集试验复检,检出阳性79份,可疑3份。确定阳性率为2.51%。通过流行病学调查青海海东地区20092015年间奶牛布病的流行情况,结果显示阳性率先呈下降趋势,自2013年开始逐年反弹。2.奶牛结核检测及流行病学调查采用结核菌素皮内变态反应试验方法对2015年青海海东地区部分奶牛场3270头奶牛进行检测,检出阳性40头,阳性率为1.22%。通过流行病学调查青海海东地区20092015年间奶牛结核的流行情况,结果显示,2009-2015年奶牛结核监测阳性率呈逐渐下降的趋势,近两年略有反弹。3.结论历年监测结果和现场调查表明,青海海东地区奶牛布病和结核总体流行率保持在较低水平,但近年来布病和结核感染率反弹趋势,对消费者的身体健康和畜牧业的健康发展造成威胁,针对乳制品社会需求量的激增、奶牛养殖规模快速发展、交易流通频繁、跨区调运监管不严、阳性畜淘汰不力等问题,提出了综合性的防控措施,包括免疫、加强检疫、定时监测、消毒管理、阳性扑杀等,在严格扑杀病畜,提高补贴额度和投入,加大流通环节的检疫和监管,提高和改进检测手段,加强培训宣传等方面提出改进,以期使青海海东地区的奶牛“两病”得到进一步的控制。
王海兄[10]（2017）在《牛羊布鲁氏菌病综合防治技术及存在问题》文中研究说明牛羊养殖业是祁连县畜牧业支柱产业,由于布氏杆菌病是多年严重威胁,使连县畜牧业生产造成牛羊大范围流产,生产性能下降,严重妨碍牲畜调运和畜产卫生质量安全,给畜牧业生产造成重大损失。为了进一步防治牛羊布鲁氏菌病,从综合防治技术内容和技术来源、综合防治的关键技术、路线、管理方法、防治技术成果
二、牦牛布氏杆菌病免疫中菌苗的研究和应用情况（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、牦牛布氏杆菌病免疫中菌苗的研究和应用情况（论文提纲范文）
（1）牦牛布氏杆菌病防控（论文提纲范文）
| 0 引言 |
| 1 流行病学 |
| 2 临床表现 |
| 3 病理学变化 |
| 4 实验室诊断 |
| 5 防治 |
| 5.1 紧急处理 |
| 5.2 预防 |
| 6 结束语 |
（2）布鲁氏菌VirB12的重组表达及其用于标记疫苗细胞免疫鉴别研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 1.1 布鲁氏菌病简介 |
| 1.2 本研究的目的与意义 |
| 第二章 布鲁氏菌VirB12 的原核表达纯化 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 VirB12 蛋白的细胞免疫特性及其对标记疫苗免疫的鉴别区分 |
| 3.1 材料 |
| 3.2 方法 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（3）羊种布鲁菌Rev.1菌株eryA基因的克隆表达及单抗制备（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 1.0 布鲁菌病 |
| 1.1 布鲁菌病的流行现状 |
| 1.1.1 布鲁菌病世界范围的流行情况 |
| 1.1.2 布鲁菌病在我国的流行情况 |
| 1.2 病原学 |
| 1.3 布鲁菌病的临床症状 |
| 1.4 布鲁菌的致病机制 |
| 1.5 布鲁菌疫苗的现状 |
| 1.6 布鲁菌病的诊断及防控 |
| 1.6.1 布鲁菌的诊断方法 |
| 1.6.2 布鲁菌病的防控 |
| 1.7 布鲁菌相关基因的研究进展 |
| 1.7.1 布鲁菌毒力基因的研究进展 |
| 1.7.2 赤藓糖醇基因(ery)的研究进展 |
| 1.8 单克隆抗体的介绍 |
| 1.9 研究的目的及意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 菌株与试剂 |
| 2.1.2 主要仪器设备 |
| 2.1.3 溶液配制 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 eryA蛋白的生物信息学分析 |
| 2.2.2 eryA基因的克隆、表达及蛋白纯化 |
| 2.2.3 杂交瘤细胞的制备及筛选 |
| 2.2.4 单克隆抗体的制备及纯化 |
| 3 结果 |
| 3.1 目的蛋白生物信息学分析 |
| 3.2 eryA基因的克隆、表达及纯化 |
| 3.2.1 目的片段扩增及原核质粒构建 |
| 3.2.2 重组蛋白的SDS-PAGE电泳检测 |
| 3.2.3 Western-Blot检测 |
| 3.2.4 蛋白质纯化 |
| 3.3 杂交瘤细胞的筛选与培养 |
| 3.3.1 免疫后效价的测定 |
| 3.3.2 融合后IgG类型阳性杂交瘤细胞株的筛选 |
| 3.4 eryA抗体的纯化 |
| 3.4.1 SDS-PAGE检测结果 |
| 3.4.2 用BCA法测定蛋白含量 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
（4）Myostatin DNA疫苗及前肽蛋白免疫动物对肌肉生长的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩写词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1 研究目的与意义 |
| 2 国内外研究进展 |
| 2.1 Myostatin基因研究进展 |
| 2.1.1 Myostatin的发现与研究进展 |
| 2.1.2 Myostatin基因的分子结构及同源性 |
| 2.1.3 Myostatin蛋白的合成及生物学特性 |
| 2.1.4 Myostatin的信号通路 |
| 2.1.5 Myostatin基因的生物学功能 |
| 2.1.6 Myostatin拮抗剂的研究进展 |
| 2.1.7 Myostatin抗体的研究进展 |
| 2.2 疫苗研究进展 |
| 2.2.1 传统疫苗 |
| 2.2.2 核酸疫苗 |
| 2.2.3 核酸疫苗的免疫机理 |
| 2.2.4 乙肝表面抗原增强免疫原性的研究 |
| 3 研究内容与技术路线 |
| 第二章 试验研究 |
| 试验一 绵羊Myostatin前肽对成肌细胞的分化作用 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验试剂 |
| 1.2 慢病毒载体、包装细胞和菌株 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.3.1 Myostatin前肽过表达慢病毒重组质粒的构建及制备 |
| 1.3.2 包装细胞株293T细胞的培养 |
| 1.3.3 Myostatin前肽过表达慢病毒的包装 |
| 1.3.4 滴度检测 |
| 1.3.5 C2C12细胞培养及转染 |
| 1.3.6 成肌细胞分化诱导及其指标测定 |
| 1.3.7 Westernblot检测蛋白表达 |
| 2 结果 |
| 2.1 Myostatin前肽克隆 |
| 2.2 Myostatin前肽过表达慢病毒载体的构建和鉴定 |
| 2.3 WB检测结果 |
| 2.4 滴度结果 |
| 2.5 过表达Myostatin前肽对成肌细胞的分化 |
| 2.5.1 免疫荧光检测结果 |
| 2.5.2 肌管融合率的测定 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 试验二 Myostatin前肽蛋白在毕赤酵母中的表达 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 菌株和质粒 |
| 1.1.2 工具酶和生化试剂 |
| 1.1.3 培养基 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 Myostatin前肽蛋白密码子优化及突变 |
| 1.2.2 pPIC9K-Msp重组质粒的构建 |
| 1.2.3 电转化毕赤酵母GS115 |
| 1.2.4 压力筛选 |
| 1.2.5 重组酵母转化子的诱导表达 |
| 1.2.6 WesternBlot鉴定Myostatin前肽的表达 |
| 2 结果 |
| 2.1 重组质粒pPIC9K-Msp的构建及酶切鉴定 |
| 2.2 压力筛选 |
| 2.3 重组质粒pPIC9K-Msp的PCR鉴定 |
| 2.4 表达产物SDS-PAGE和Westernblot鉴定 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 试验三 Myostatin前肽蛋白在大肠杆菌中的表达 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 菌株和质粒 |
| 1.1.2 工具酶和生化试剂 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 引物的设计 |
| 1.2.2 PCR扩增 |
| 1.2.3 PCR产物胶回收 |
| 1.2.4 克隆载体pMD18-M的构建 |
| 1.2.5 重组质粒的构建 |
| 1.2.6 目的蛋白表达 |
| 1.2.7 目的蛋白的纯化 |
| 2 结果 |
| 2.1 质粒构建 |
| 2.2 绵羊突变型Myostatin前肽蛋白序列的扩增 |
| 2.3 蛋白表达产物的分析 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 试验四 Myostatin前肽蛋白对羔羊肌肉生长的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验动物选择 |
| 1.2 试验时间地点 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.3.1 实验设计 |
| 1.3.2 屠宰实验 |
| 1.3.3 测定指标 |
| 1.3.4 采集样品 |
| 1.3.5 HE染色切片制作程序 |
| 1.3.6 荧光定量PCR |
| 1.3.7 数据处理与统计分析 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 注射Myostatin前肽重组蛋白对羔羊肌肉生长的作用 |
| 2.2 利用Myostatin前肽重组蛋白动物模型,研究肌肉纤维增大的生理和分子机制 |
| 2.3 注射Myostatin前肽后对Myostatin信号通路下游及相关基因的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 试验五 Myostatin成熟肽核酸疫苗的制备及对小鼠肌肉生长的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 菌株和质粒 |
| 1.1.2 工具酶和生化试剂 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 细菌基因组DNA的提取 |
| 1.2.2 核酸疫苗pV-SM的构建 |
| 1.2.3 质粒的大量培养及抽提纯化 |
| 1.2.4 实验动物的选择 |
| 1.2.5 免疫方法 |
| 1.2.6 样品采集 |
| 1.2.7 组织切片 |
| 1.2.8 荧光定量PCR |
| 1.2.9 抗体检测 |
| 1.2.10 数据处理与统计分析 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 Myostatin成熟肽核酸疫苗的制备 |
| 2.2 免疫Myostatin成熟肽核酸疫苗后对实验小鼠体重的影响 |
| 2.3 免疫Myostatin成熟肽核酸疫苗后对实验小鼠肌纤维的影响 |
| 2.4 免疫小鼠抗血清的检测 |
| 2.5 免疫Myostatin成熟肽核酸疫苗后对小鼠Myostatin信号通路下游相关基因影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 对BALB/c小鼠肌肉生长的影响 |
| 3.2 Myostatin成熟肽核酸疫苗产生免疫应答的机制 |
| 4 小结 |
| 试验六 Myostatin成熟肽核酸疫苗对羔羊肌肉生长的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 试验动物的选择 |
| 1.2.2 免疫方法 |
| 1.2.3 屠宰实验 |
| 1.2.4 测定指标 |
| 1.2.5 采集样品 |
| 1.2.6 组织切片 |
| 1.2.7 荧光定量PCR |
| 1.2.8 抗体检测 |
| 1.2.9 数据处理与统计分析 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 免疫Myostatin成熟肽核酸疫苗后对实验羔羊体重的影响 |
| 2.2 免疫Myostatin核酸疫苗后对实验羔羊肌纤维的影响 |
| 2.3 免疫羔羊抗血清的检测 |
| 2.4 免疫Myostatin成熟肽核酸疫苗后对羔羊Myostatin信号通路下游相关基因影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 载体的选择 |
| 3.2 试验动物的选择 |
| 3.3 对羔羊肌肉生长的影响 |
| 4 小结 |
| 第三章 结论 |
| 第四章 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 附录1 主要仪器设备 |
| 附录2 溶液及培养基配置 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
| 石河子大学博士研究生学位论文导师评阅表 |
（5）西藏牦牛布氏杆菌病流行病学调查（论文提纲范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 血清 |
| 1.2 检测试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 1.4 试验方法 |
| 1.5 数据统计分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论与防治措施 |
| 4.1 结论 |
| 4.2 防治措施建议 |
（6）布鲁氏菌的EF-Tu蛋白单克隆抗体制备及其识别表位的鉴定（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1.前言 |
| 1.1 布鲁氏菌病概述 |
| 1.2 布鲁氏菌病诊断技术研究进展 |
| 1.2.1 病原学诊断 |
| 1.2.2 血清学诊断技术 |
| 1.2.3 荧光偏振技术(FPA) |
| 1.2.4 分子生物学技术 |
| 1.3 单克隆抗体原理与应用 |
| 1.4 细菌EF-Tu蛋白研究进展 |
| 1.5 本研究目的及意义 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物、载体和菌株 |
| 2.1.2 主要试剂及试剂盒 |
| 2.1.3 主要仪器设备 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 EF-Tu的克隆构建与原核表达 |
| 2.2.2 EF-Tu重组蛋白的表达和纯化 |
| 2.2.3 EF-Tu蛋白单克隆抗体的制备 |
| 2.2.4 单克隆抗体鉴定 |
| 2.2.5 EF-Tu蛋白抗原表位的筛选与鉴定 |
| 2.2.6 表位蛋白的初步应用 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 EF-Tu基因的克隆 |
| 3.1.1 布鲁氏菌tufA基因的PCR扩增 |
| 3.1.2 质粒转化top10后菌落PCR结果 |
| 3.1.3 重组质粒酶切鉴定结果 |
| 3.1.4 GST融合蛋白载体酶切检测 |
| 3.1.5 GST-FE-Tu蛋白的诱导表达与纯化 |
| 3.1.6 布鲁氏菌EF-tu蛋白的原核表达及纯化 |
| 3.2 抗马耳他型布鲁氏菌EF-TuMAb的制备 |
| 3.2.1 免疫实验动物 |
| 3.2.2 杂交瘤细胞的筛选 |
| 3.2.3 MAb效价及亚型测定 |
| 3.3 抗B. melitensis EF-TuMAb的鉴定 |
| 3.3.1 Western-blot鉴定 |
| 3.3.2 间接荧光免疫鉴定 |
| 3.4 EF-Tu抗原表位筛选与鉴定 |
| 3.4.1 EF-Tu抗原表位筛选 |
| 3.4.2 抗原表位中心序列的确认 |
| 3.4.3 表位的空间位置和抗原指数 |
| 3.5 Dot-blot进行临床牛血清的检测 |
| 4.讨论 |
| 5.结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（7）兽用疫苗中替代方法的研究进展（论文提纲范文）
| 1 现有兽用疫苗效力检验和安全性检验中的替代技术 |
| 2 国内、外兽用疫苗已被批准的效力检验替代技术 |
| 3 国内、外兽用疫苗中替代技术的使用情况比较 |
| 4 展望 |
（8）景泰县羊布鲁氏菌病流行病学监测分析及防控措施（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Summary |
| 缩略词中英文对照表 |
| 第1章 布鲁氏菌病概述 |
| 1.1 布鲁氏菌病的发现历程与分布情况 |
| 1.1.2 布鲁氏菌病的分布与经济损失 |
| 1.2 布鲁氏菌病的病原学特点 |
| 1.2.1 形态和染色特性 |
| 1.2.2 培养和生化特性 |
| 1.2.3 布鲁氏菌生物型划分 |
| 1.2.4 布鲁氏菌的抗原结构 |
| 1.2.5 布鲁氏菌的毒力 |
| 1.2.6 布鲁氏菌的抵抗力 |
| 1.2.7 布鲁氏菌的致病性 |
| 1.3 布鲁氏菌病的流行病学概况 |
| 1.3.1 易感动物 |
| 1.3.2 传染源 |
| 1.3.3 传播途径 |
| 1.3.4 流行特点 |
| 1.4 布鲁氏菌病的发病机理和病理变化 |
| 1.5 布鲁氏菌病的临床症状 |
| 1.6 布鲁氏菌病的剖检病变 |
| 1.7 布鲁氏菌病的病原学诊断 |
| 1.7.1 采集样品 |
| 1.7.2 病原菌的分离与鉴定 |
| 1.7.3 布鲁氏菌病的诊断方法 |
| 第2章 景泰县羊布鲁氏菌病流行病学监测分析 |
| 前言 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 实验试剂 |
| 2.1.2 调查对象 |
| 2.1.3 调查地点 |
| 2.1.4 采样数量 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 血清样品的收集 |
| 2.2.2 血清样品的制备 |
| 2.2.3 血清样品制备注意事项 |
| 2.2.4 虎红平板凝集试验(RBPT) |
| 2.2.5 试管凝集试验(SAT) |
| 2.3 结果分析 |
| 2.3.1 2014 年与2015年布鲁氏菌病检测数据对比 |
| 2.3.2 山羊与绵羊的阳性率对比分析 |
| 2.3.3 不同饲养方式下,羊只感染率的检测结果比较(2015年度) |
| 2.3.4 2014 年和2015年各乡镇羊布鲁氏菌病检测结果 |
| 2.4 讨论 |
| 第3章 景泰县羊布鲁氏菌病防控现状、对策及建议 |
| 3.1 景泰县羊布鲁氏菌病的防控现状及存在问题 |
| 3.1.1 国家对布鲁氏菌病的防控措施尚不完善 |
| 3.1.2 羊只交易、繁殖及其他环节防控不严 |
| 3.1.3 养殖人员对本病的危害认识不足,缺乏专业的防控知识 |
| 3.1.4 检疫工作有待进一步加强 |
| 3.2 防控对策 |
| 3.2.1 因地制宜,制定适合本地区的综合防控措施 |
| 3.2.2 加强动物卫生检疫监督 |
| 3.2.3 加强基层兽医防护培训,提高全民防控该病的意识 |
| 3.2.4 强制淘汰检疫阳性动物 |
| 3.2.5 加强羊只饲养管理,推广行之有效的免疫程序 |
| 第4章 全文结论 |
| 4.1 景泰县羊2014-2015年流行病学监测分析结果 |
| 4.2 景泰县家畜布鲁氏菌病防控现状与存在的问题 |
| 4.3 对于景泰县的情况提出的防控措施 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 导师简介 |
（9）青海海东地区奶牛布鲁氏菌病与结核流行病学调查（论文提纲范文）
| 摘要 |
| SUMMARY |
| 第一章 文献综述 |
| 1 奶牛布鲁氏菌病 |
| 1.1 病原学特征 |
| 1.2 流行病学特征 |
| 1.2.1 流行特征 |
| 1.2.2 布鲁氏菌的流行因素 |
| 1.2.3 生物分型 |
| 1.3 发病机理 |
| 1.4 临床症状与病理变化 |
| 1.5 诊断方法 |
| 1.5.1 病原学检测 |
| 1.5.2 血清学检测 |
| 1.5.3 其他方法 |
| 1.6 防治 |
| 2 奶牛结核 |
| 2.1 病原学特征 |
| 2.2 流行病学特征 |
| 2.2.1 流行特征 |
| 2.2.2 传染源、传播途径和易感动物 |
| 2.3 免疫和致病机理 |
| 2.4 临床症状和病理变化 |
| 2.5 诊断 |
| 2.5.1 病原学方法 |
| 2.5.2 免疫学方法 |
| 2.5.3 分子生物学方法 |
| 2.6 防制 |
| 3 研究的目的和意义 |
| 第二章 奶牛布鲁氏菌病的流行病学调查 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 血清 |
| 1.1.2 诊断试剂 |
| 1.1.3 奶牛场选择 |
| 1.1.4 其他 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 虎红平板凝集试验 |
| 1.2.2 试管凝集试验 |
| 1.2.3 ELISA检测方法 |
| 1.2.4 流行病学调查 |
| 2 结果 |
| 2.1 检测结果 |
| 2.2 调查结果 |
| 2.2.1 现场调查结果 |
| 2.2.2 海东地区奶牛布病防控情况 |
| 3 讨论 |
| 3.1 奶牛布病流行趋势 |
| 3.2 奶牛布病调查分析 |
| 3.3 检测方法 |
| 3.4 奶牛布病防控建议 |
| 3.4.1 分区制定防控策略,分类指导布病防控 |
| 3.4.2 加大布病监测力度,积极开展评估净化 |
| 3.4.3 加强检疫监督及消毒管理 |
| 3.4.4 保障经费投入,加强宣传教育 |
| 第三章 奶牛结核的流行病学调查 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 检测试剂 |
| 1.1.2 实验奶牛 |
| 1.1.3 其他 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 提纯结核菌素皮内变态反应试验(TST) |
| 1.2.2 ELISA检测方法 |
| 1.2.3 统计学方法 |
| 1.2.4 流行病学调查 |
| 2 结果 |
| 2.1 检测结果 |
| 2.2 调查结果 |
| 2.2.1 现场调查结果 |
| 2.2.2 海东地区奶牛结核防控情况 |
| 3 讨论 |
| 3.1 奶牛结核流行趋势 |
| 3.2 奶牛结核调查及分析 |
| 3.3 检测方法 |
| 3.4 奶牛结核防控建议 |
| 3.4.1 加强检疫监管 |
| 3.4.2 加大投入,净化疫源 |
| 3.4.3 加强养殖管理,促进疫病净化 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
| 导师简历 |
（10）牛羊布鲁氏菌病综合防治技术及存在问题（论文提纲范文）
| 1 基本情况 |
| 2 综合防治技术内容和技术来源 |
| 3 综合防治的关键技术、路线、管理方法 |
| 3.1 综合防治关键技术 |
| 3.2 综合防治技术路线 |
| 3.3 综合防治管理方法 |
| 4 综合防治规模及技术成果 |
| 4.1 实施规模 |
| 4.2 综合防治技术成果 |
| 5 综合防治技术结论 |
| 6 问题讨论 |
| 6.1 布病综合防治技术具有长期性 |
| 6.2 病畜扑杀补偿机制尚未健全 |
| 6.3 流行病学调查工作还需加强 |
四、牦牛布氏杆菌病免疫中菌苗的研究和应用情况（论文参考文献）
- [1]牦牛布氏杆菌病防控[J]. 孟克达拉. 畜牧兽医科学(电子版), 2019(24)
- [2]布鲁氏菌VirB12的重组表达及其用于标记疫苗细胞免疫鉴别研究[D]. 李宏艳. 沈阳农业大学, 2019(02)
- [3]羊种布鲁菌Rev.1菌株eryA基因的克隆表达及单抗制备[D]. 宋前进. 内蒙古农业大学, 2019(01)
- [4]Myostatin DNA疫苗及前肽蛋白免疫动物对肌肉生长的影响[D]. 杜玮. 石河子大学, 2018(02)
- [5]西藏牦牛布氏杆菌病流行病学调查[J]. 王一飞,贡嘎,程少龙,索朗斯珠. 高原农业, 2018(03)
- [6]布鲁氏菌的EF-Tu蛋白单克隆抗体制备及其识别表位的鉴定[D]. 姜岳. 山东农业大学, 2018(09)
- [7]兽用疫苗中替代方法的研究进展[J]. 王兴童,韩凌霞. 实验动物科学, 2018(01)
- [8]景泰县羊布鲁氏菌病流行病学监测分析及防控措施[D]. 姚馨. 甘肃农业大学, 2017(01)
- [9]青海海东地区奶牛布鲁氏菌病与结核流行病学调查[D]. 林元清. 甘肃农业大学, 2018(11)
- [10]牛羊布鲁氏菌病综合防治技术及存在问题[J]. 王海兄. 山东畜牧兽医, 2017(06)