一、大鼠颌下腺GnRH受体基因的体外扩增及基因序列分析（论文文献综述）
刘国凤[1]（2015）在《池蝶蚌表皮生长因子受体底物15（Eps15）基因的分子特征及表达分析》文中认为本研究利用实验室已有的池蝶蚌（Hyriopsis schlegelii）转录组数据中表皮生长因子受体底物15（Eps15）基因的部分序列,设计池蝶蚌Eps15基因（Hs-Eps15）基因的特异性引物,并以池蝶蚌性腺组织cDNA为模板进行PCR扩增。将扩增产物克隆到pMD19-T载体中,然后转进大肠杆菌DH5α,经测序获得Hs-Eps15基因的部分中间片段,继而通过PCR和3’-RACE PCR最终克隆出Eps15基因序列,其cDNA全长3382bp,包括923bp的3’-UTR,具有24bp长的polyA尾巴及加尾信号AATAA,开放阅读框（Open reading frame,ORF）为2454bp,编码817个氨基酸。对Hs-Eps15蛋白结构域分析得知,N端部分主要由三个EH（Eps15homology）结构域组成,无信号肽,而C端部分最显着的特征是存在多次DPF（谷氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸）重复序列;利用相关生物学软件分析得到其分子量约为88.67kDa,理论等电点为4.88;二级结构预测中显示无规则卷曲和α-螺旋最多,分别占41.74%和41.49%,延伸链占9.55,β-折叠最少。采用MEGA4.0软件邻位相连法（NJ）建立系统进化树分析同源性表明,在众多物种中,池蝶蚌的Eps15基因与太平洋牡蛎（Crassostrea gigas）的同源性最高（约64%）。通过荧光定量PCR技术检测分析Hs-Eps15基因在池蝶蚌不同组织中m RNA的表达情况。结果表明:该基因在池蝶蚌心脏、卵巢、精巢、肠、肝胰腺、肾脏、鳃、闭壳肌、外套膜、斧足和血液11个组织中均有表达,其中在精巢中表达量最高,在卵巢中次之,而在心脏、鳃和血液中表达量较低,其中心脏中最低。由此推测池蝶蚌中以Eps15为底物的EGFR通路会影响精子的产生和发育,也会作为池蝶蚌卵巢局部重要的调节因子,影响卵泡生长发育及成熟。根据已得到的Hs-Eps15基因的全长cDNA序列,经NCBI中比对获知序列N端有3个EH结构域,选取这段完整且具有代表性结构域的序列,并对此设计扩增该完整结构域的引物,pEASYTM-E1-Hs-Eps15重组表达质粒,然后转进E.coil BL21（DE3）表达感受态细胞中,经IPTG诱导蛋白表达,得到了分子量约为32.6kDa的融合蛋白。采用Ni-NTA树脂亲和层析法纯化表达产物,SDS-PAGE检测显示获得了纯净的融合蛋白,Bradford法测定蛋白浓度及含量,测定结果显示蛋白浓度符合制备多克隆抗体的要求。利用纯化的Hs-Eps15融合蛋白作为抗原免疫日本长耳兔,制备多克隆抗体,ELISA间接法检测抗血清效价在1:512000以上。经Western blotting检测得知制备的多克隆抗血清能够特异性识别纯化的Hs-Eps15融合蛋白。最后做池蝶蚌成熟性腺及肝胰腺的冰冻切片,用制备的兔抗血清对Hs-Eps15蛋白在细胞内表达进行免疫荧光定位,结果发现在池蝶蚌的精子中,Eps15蛋白主要分布在精子头部位置,在池蝶蚌卵细胞中,Eps15蛋白主要分布在细胞核膜上,而在肝胰腺细胞中Eps15蛋白主要分布在核膜和胞质中,为从蛋白水平研究Hs-Eps15的功能及此信号通路上其他相关蛋白的定位奠定了基础。
丁朝阳[2]（2009）在《INHA、GnRHR基因多态性与母猪部分繁殖性状的关联性研究》文中研究说明在现代动物育种实践中,应用分子标记辅助选择（Marker-assistedselection,MAS）对低遗传力性状、限性性状或表达较晚的性状进行选择具有非常重要的意义。利用这种方法进行繁殖性状选择的前提是必须找到尽可能多的分子标记。本研究选取抑制素α（Inhibinα,INHA）基因和促性腺激素释放激素受体（Gonadotropin releasing hormone receptor,GnRHR）为候选基因,分析它们在大白猪、长白猪、宁乡猪、桃源猪、大围子猪、沙子岭猪、海南五指山猪中的多态性,并对不同基因型、合并基因型以及基因型互作与部分繁殖性状的关系进行了探索。主要研究结果如下:1、INHA基因外显子Ⅱ检测到2个突变位点。首先,利用PCR-RFLP技术证实,INHA基因在长白、大白猪以及地方品种中存在外显子ⅡG262A位点突变,该位点引起Hin6Ⅰ限制性内切酶酶切位点的改变。研究发现G等位基因为优势等位基因,GG型为优势基因型。其次,利用不对称PCR-SSCP结合测序发现外显子ⅡA852G位点产生突变（GenBank登录号:EU847280）,研究结果表明B为优势基因,BB为优势基因型。此外,对两个多态位点进行了基因型合并分析,BBGG基因型为优势合并基因型,在大白猪中BBGG基因型猪的产仔数要比BCGG基因型高0.7头,而在长白猪中BBGG基因型比BCGG高2.0头。合并基因型的遗传效应并不是各基因效应的简单相加,但却要稍高于最好的单个基因型效应。随后,对引物扩增片段3进行PCR-SSCP分析,并未发现多态位点。所得到的两个位点均处于群体基因位点连锁不平衡状态。2、利用PCR-SSCP技术对GnRHR基因5’调控区、外显子Ⅰ和外显子Ⅱ进行了检测,结合测序发现5’-UTR端310bp处有一个A→C的突变位点。研究结果表明,D为优势基因,DE为优势基因型,群体处于连锁平衡状态。SSCP检测结果表明,扩增产物P2在本实验所使用的样本中未发现有基因型差异,但挑选扩增产物测序后,测序结果与GenBank登录的序列有差异,在外显子Ⅰ1075位点存在一个A碱基插入,1138位存在一个A→C的突变（提交GenBank,获得序列号EU847281）。在扩增产物P3、P4、P5均未发现有突变位点。表明在外显子Ⅰ和外显子Ⅱ均未有多态性位点。3、对所检测的INHA基因两个多态位点和GnRHR基因的一个多态位点的各基因型进行了互作效应的分析。研究INHA基因G262A位点基因型与GnRHR基因A310C位点基因型互作效应时发现,基因型的互作效应在大白猪中极显着（P＜0.01）,在长白猪中总产仔数和产活仔数也达到了显着水平（P＜0.05）,在初生窝重达到了极显着水平（P＜0.01）。各基因互作型间差异显着,由大到小依次为:AGDD基因互作型＞GGDE基因互作型＞AGEE基因互作型＞AADE基因互作型＞GGDD基因互作型＞AAEE基因互作型＞AADD基因互作型＞AGDE基因互作型＞GGEE基因互作型。AGDD基因互作型比单独的AG基因型和DD基因型的产仔数、产活仔数都要高。说明互作效应提高了繁殖性能。其次,在分析INHA基因A852G位点基因型与GnRHR基因A310C位点基因型互作效应时发现,各基因型互作对总产仔数、产活仔数和初生窝重影响不显着（P＞0.05）。基因型互作效应在大白猪中的总产仔数性状上差异不显着,各基因互作型间存在差异,由大到小依次为:CCDE基因互作型＞BCDD基因互作型＞BBDE基因互作型＞BBDD基因互作型＞CCDD基因互作型＞BCDE基因互作型＞BBEE基因互作型＞BCEE基因互作型＞CCEE基因互作型。
曹宏伟[3]（2008）在《进食和去势对大鼠空肠、胰腺促性腺激素释放激素及其受体表达影响的研究》文中研究说明研究表明促性腺激素释放激素（GnRH）类似物应用于前列腺癌患者行去势治疗时可导致患者出现糖代谢紊乱;我们先前的研究显示在与葡萄糖代谢密切相关的消化系统广泛存在GnRH及其受体,进食以及去势是否会影响肠道和胰腺合成分泌GnRH,后者是否会以自分泌或旁分泌的方式作用于肠道和胰腺GnRH受体（GnRH-R）,并通过影响、运动功能或调节其它肠道激素如:胰高血糖素、胰高血糖素样多肽-1（GLP-1）等的分泌而对葡萄糖代谢产生影响,这些问题的探讨有利于深入理解肠胰系统GnRH在糖代谢中的作用。第一部分手术去势和皮下注射GnRH类似物对大鼠空肠、胰腺GnRH及其受体表达的免疫组织化学定位目的:了解手术去势和皮下注射GnRH类似物12周对雄性SD大鼠空肠及胰腺GnRH及其受体免疫组织化学定位的影响,为进一步研究GnRH类似物在临床应用中出现的葡萄糖代谢紊乱的机制奠定基础。方法:采用免疫组织化学方法观察了手术去势和皮下注射GnRH类似物亮丙瑞林（100ug/Kg）12周后大鼠在灌葡萄糖（2 g/Kg）后3 h时GnRH及其受体蛋白的免疫组织化学定位。结果:1.免疫组织化学结果显示手术去势大鼠空肠、胰腺GnRH及其受体分布与正常大鼠相同。2.免疫组织化学结果显示皮下注射GnRH类似物组大鼠空肠、胰腺GnRH及其受体分布与正常大鼠相同。结论:手术去势和皮下注射GnRH类似物12周对大鼠空肠、胰腺GnRH及其受体分布可能无影响。第二部分灌服葡萄糖溶液后大鼠空肠和胰腺GnRH及其受体mRNA的表达目的:通过观察灌服葡萄糖溶液后不同时间点SD大鼠空肠和胰腺GnRH及其受体mRNA表达的变化,以期了解肠胰系统GnRH与糖代谢之间的关系。方法:采用实时荧光定量PCR方法,观察了SD大鼠灌服葡萄糖（2 g/Kg）0 min,15min,30min时空肠和胰腺的GnRH及其受体mRNA的表达。结果:1.与空腹组相比,灌服葡萄糖15min组和30min组大鼠空肠GnRH mRNA相对表达量降低（P<0.05）,而GnRH受体mRNA表达量在三组间无差异。2.与空腹组相比,灌服葡萄糖后15min组大鼠胰腺GnRH mRNA表达量降低（P<0.05）,灌服葡萄糖后30min时胰腺GnRH mRNA表达量与空腹组比较未见差异,同时GnRH受体在三组间无差异。结论:本研究首次对SD大鼠在灌葡萄糖（2g/Kg）后不同时间点的GnRH及其受体mRNA在肠道和胰腺表达的差异进行了比较,发现灌服葡萄糖早期大鼠空肠和胰腺GnRH mRNA相对表达量降低,说明空肠和胰腺的GnRH可能与葡萄糖代谢有关,其相关机制有待进一步研究。第三部分手术去势对大鼠空肠、胰腺GnRH及其受体mRNA表达的影响目的:了解手术去势12周后雄性SD大鼠空肠及胰腺GnRH及其受体表达的变化,为进一步研究GnRH类似物在临床应用中出现葡萄糖代谢紊乱的机制奠定基础。方法:采用实时荧光定量PCR方法,观察了手术去势12周对大鼠空肠和胰腺GnRH及其受体mRNA在灌服葡萄糖（2 g/Kg）3h时表达的影响。结果:去势大鼠空肠和胰腺GnRH、GnRH受体mRNA的相对表达量与对照组相比未见差异。结论:手术去势对大鼠灌服葡萄糖（2 g/Kg）3 h时GnRH及其受体mRNA在空肠、胰腺的表达无影响。第四部分皮下注射GnRH类似物对大鼠空肠、胰腺GnRH及其受体mRNA表达的影响目的:探讨皮下注射GnRH类似物亮丙瑞林（100ug/Kg）12周后大鼠空肠、胰腺GnRH及其受体、胰高血糖素原（PG）和GLP-1受体mRNA表达的变化,为深入研究GnRH类似物在临床应用中出现的葡萄糖代谢紊乱的机制奠定基础。方法:采用实时荧光定量PCR方法,研究了皮下注射GnRH类似物亮丙瑞林（100ug/Kg）12周后大鼠空肠及胰腺GnRH及其受体、胰高血糖素原和GLP-1受体mRNA在灌服葡萄糖（2 g/Kg）3 h时的表达差异。结果:1.与皮下注射生理盐水组大鼠相比较,皮下注射GnRH组在灌服葡萄糖（2g/Kg）前空腹血糖升高（P<0.05）,其余各时间点血糖相比较均未见差异,同时皮下注射GnRH类似物组的胰岛素水平在灌葡萄糖（2g/Kg）0h和0.5h时显着升高（P<0.05）,其余各时间点胰岛素水平未见差异。2.空肠和胰腺GnRH及其受体、胰高血糖素原（PG）和GLP-1受体mRNA表达量在两组间无差异。3.包括GnRH类似物注射组和对照组在内的所有大鼠的空肠GnRH mRNA表达量与胰高血糖素原mRNA的表达量呈正相关（r=0.959, P<0.01）。结论:皮下注射GnRH类似物12周使大鼠空腹血糖和胰岛素升高以及灌糖后早期胰岛素分泌增加,结合大鼠空肠GnRH mRNA表达量与胰高血糖素原mRNA的表达量呈正相关,提示GnRH类似物影响糖代谢的机制可能与肠胰系统的GnRH有关,其作用机制有待进一步研究。小结:本实验显示,灌服葡萄糖早期大鼠空肠和胰腺GnRH mRNA相对表达量下降;皮下注射GnRH12周使大鼠空腹血糖升高,同时使大鼠空腹和早期胰岛素分泌增加,但手术去势大鼠无此改变。结合皮下注射GnRH大鼠和正常大鼠中空肠GnRH mRNA表达量与胰高血糖素原mRNA的表达量呈正相关的证据,提示肠胰系统的GnRH可能与糖代谢有关,同时临床报道的GnRH类似物影响糖代谢的机制也可能与其有关,其作用机制有待进一步研究。
陈榕[4]（2008）在《促性腺激素释放激素及其受体在糖尿病大鼠肠道、胰腺中表达的研究》文中研究说明有研究表明药理剂量的促性腺激素释放激素（GnRH）类似物即可导致糖代谢紊乱,而在与葡萄糖代谢密切相关的消化系统又广泛存在GnRH及其受体。肠道和胰腺合成分泌的GnRH是否与葡萄糖代谢有关,其是否会以自分泌或旁分泌的方式作用于肠道和胰腺GnRH受体（GnRH-R）,并通过影响肠道吸收、运动功能或调节其他肠道激素如:胰高血糖素、胰高血糖素样多肽-1（GLP-1）等的分泌而对葡萄糖代谢产生影响,这些问题尚有待探讨。目的:探讨肠道和胰腺的GnRH及其受体、胰高血糖素原（PG）和GLP-1受体在糖尿病病理状态下的变化,肠道、胰腺GnRH及其受体、胰高血糖素原和GLP-1受体的表达之间的相关性,为进一步研究GnRH类似物在临床应用中出现的葡萄糖代谢紊乱的机制以及糖尿病的病理生理过程奠定基础。方法:采用免疫组织化学方法观察了自发性2型糖尿病GK大鼠肠道和胰腺GnRH及其受体蛋白的表达及分布特点,并采用实时荧光定量PCR方法,研究了GK大鼠及正常Wistar大鼠GnRH及其受体、胰高血糖素原和GLP-1受体的mRNA在不同肠段和胰腺在灌服葡萄糖（2 g/kg）后3 h时的表达差异。结果:1、免疫组织化学染色显示糖尿病GK大鼠空肠、回肠、结肠和胰腺均有GnRH及GnRH-R表达,且其分布特点与正常大鼠相一致。2、糖尿病大鼠空肠GnRH、GnRH-R、胰高血糖素原和GLP-1受体的mRNA相对表达量均低于正常大鼠（P<0.05）。3、糖尿病大鼠回肠GnRH mRNA表达量低于正常大鼠（P<0.05）,回肠GnRH-R、胰高血糖素原和GLP-1受体的mRNA表达量在两组间差异无统计学意义。4、糖尿病大鼠结肠GLP-1受体mRNA相对表达量显着低于正常大鼠（P<0.05）,而结肠GnRH及其受体和胰高血糖素原的mRNA表达量在两组间差异无统计学意义。5、糖尿病大鼠胰腺胰高血糖素原和GLP-1受体mRNA相对表达量显着低于正常大鼠（P<0.05）,而胰腺GnRH和GnRH-R mRNA表达量在两组间差异无统计学意义。6、大鼠空肠GnRH mRNA表达量与胰高血糖素原mRNA的表达量呈正相关（r=0.883,P<0.05）,大鼠空肠GnRH mRNA相对表达量与其空腹血糖、OGTT 3h血糖值均呈负相关（r=-0.72和r=-0.82,P<0.05）,大鼠回肠GnRH mRNA相对表达量与其OGTT 3h血糖值呈负相关（r=-0.9,P<0.05）,大鼠空肠GnRH-R与GLP-1受体mRNA相对表达量呈正相关（r=0.91,P<0.05）。结论:糖尿病大鼠肠道和胰腺GnRH及其受体免疫阳性物质分布与正常大鼠相一致。糖尿病大鼠部分肠道GnRH及其受体mRNA在灌服葡萄糖（2 g/kg）后3 h时下调,大鼠空肠GnRH与胰高血糖素原mRNA的表达量,以及空肠、回肠的GnRH mRNA水平与OGTT 3 h血糖值均呈现较好的相关性,提示空肠和回肠的GnRH可能与葡萄糖代谢关系密切,其相关机制有待进一步研究。
陈承祯[5]（2007）在《能量代谢相关因子对奶牛肝糖异生的调控作用》文中进行了进一步梳理能量负平衡是奶牛酮病发生的基础,低血糖、高酮体是其特征,瘦蛋白（LP）、神经肽Y（NPY）、高血糖素（GLN）、胰岛素（INS）、胰岛素样生长因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）等是调节体内糖代谢的主要神经内分泌因子。本研究通过体外牛肝细胞原代培养实验和酮病病牛与健康牛的体内实验,运用荧光定量逆转录PCR（RT-PCR）方法,探讨了能量代谢相关因子对奶牛肝糖异生的调控作用。在体外牛肝细胞原代培养实验中,往体外培养的犊牛肝细胞中添加不同浓度的上述神经内分泌因子,检测其丙酮酸羧化酶（pyruvate carboxylase,PC）和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK）基因表达及其活性。结果表明,培养液中添加LP、INS和IGF-Ⅰ显着下调了PC和PEPCKR的基因表达及活性（p<0.05）,而添加NPY和GLN则显着上调了PC和PEPCK的基因表达及活性（p<0.05）。体内实验中,选择产奶量、分娩日期相近的酮病病牛和健康牛各5头做对照试验,检测其循环血液神经内分泌因子含量和肝组织的PC mRNA和PEPCK mRNA的丰度及其活性,并分析它们与神经内分泌因子含量的相关性。结果表明,病牛与健康牛之间的PC与PEPCK的基因表达及活性差异显着,酮病病牛的肝糖异生能力得到了加强（p<0.05）;酮病病牛肝组织中的PC活性与循环血液中的GLU、LP、NPY含量呈正相关,其中与LP相关性显着（p<0.05）,与GLU、NPY相关性极显着（p<0.01）;PC活性与GLN、INS含量呈负相关,但相关性不显着。酮病病牛肝组织中的PEPCK活性与循环血液中的GLU、LP、NPY含量呈正相关,其中与GLU相关性显着（p<0.05）,与NPY相关性极显着（p<0.01）;PEPCK活性与GLN、INS含量呈负相关,但相关性不显着。酮病病牛肝组织中的PC基因表达与循环血液中的GLU、LP、NPY、GLN含量呈负相关,其中与GLU、NPY相关性极显着（p<0.01）;与INS含量呈正相关,但相关性不显着。酮病病牛肝组织中的PEPCK基因表达与循环血液中的GLU、LP、NPY含量呈负相关,且相关性极显着（p<0.01）;与GLN、INS含量呈负相关,其中与INS含量相关性显着（p<0.05）。
房保海[6]（2006）在《牙鲆促性腺激素释放激素及其免疫影响的研究》文中指出促性腺激素释放激素（GnRH）是下丘脑-垂体-性腺轴的关键信息分子,在脊椎动物生殖神经内分泌调控中特别是在刺激促性腺激素的合成和释放方面具有至关重要的调节作用,是神经-免疫-内分泌三大调节系统之间互相联系的信使之一,鱼类GnRH及其受体结构和生物学功能逐渐成为神经内分泌和生殖生物学研究的热点之一。牙鲆（Paralichthys olivaceus）,属硬骨鱼纲,鲽形目,鲆科（Bothidae）,是中国重要的海水养殖鱼类,关于牙鲆GnRH及其受体的分子生殖内分泌研究未见报道,了解牙鲆GnRH及其受体的类型、分布和作用,对阐明牙鲆神经-生殖-内分泌的相互调控具有有十分重要的意义。本论文的研究结果如下:（1）本文采用免疫组织化学技术检测了GnRH和NPY在性成熟牙鲆组织内的分布。表明:GnRH阳性细胞分布于脑、垂体、胃、肠、卵巢等神经、消化和生殖器官;NPY在延脑、大脑、卵巢中检测到了阳性反应细胞。（2）采用RACE技术获得牙鲆607 bp全长cGnRH-II cDNA,编码95个氨基酸的前体肽。该cGnRH-II前体肽包含有23个氨基酸残基的信号肽、cGnRH-II成熟十肽（QHWSHGWYPG）、一个3肽（Gly-Lys-Arg）加工位点和49个氨基酸残基的促性腺激素释放激素相关肽（GAP）。前体氨基酸序列同源性分析表明,牙鲆cGnRH-II前体与条斑星鲽（barfin flounder）相似性最高为97.6%,其次是军曹鱼科、丽鱼科和鲷科鱼类;与哺乳动物、爬行动物和两栖动物同源性较低。RT-PCR检测显示,cGnRH-II基因在牙鲆肾脏、脑、垂体、鳃和卵巢中表达;以肾脏中表达水平最高。（3）克隆获得了牙鲆395 bp全长sbGnRH cDNA,编码98个氨基酸的sbGnRH前体。该sbGnRH前体肽包含有26个氨基酸残基的信号肽、sGnRH成熟十肽（QHWSYGLSPG）、一个三肽（Gly-Lys-Arg）加工位点和59个氨基酸残基组成的GAP。前体氨基酸序列同源性分析表明,牙鲆sbGnRH与条斑星鲽的同源性最高为86.7%。RT-PCR检测显示,sbGnRH基因在牙鲆脑、胃、脾脏、眼、垂体、肌肉、肠、卵巢中皆有表达。（4）利用3′-RACE技术克隆得到了牙鲆391 bp sGnRH cDNA 3′-末端片段序
付建芳,黄威权,王世鄂,初晨宇[7]（2004）在《大鼠下颌下腺卵泡刺激素、黄体生成素的分布及与促性腺激素释放激素受体的共定位研究》文中指出目的 研究卵泡刺激素 （FSH）和黄体生成素 （LH）在大鼠下颌下腺中的定位、分布及与促性腺激素释放激素受体 （GnRHR）共定位的关系。 方法 采用邻片免疫组织化学共定位方法。 结果 大鼠颌下腺浆液性腺泡上皮细胞、分泌管、排泄管及颗粒曲管上皮细胞均呈FSH和LH免疫反应阳性 ,阳性颗粒分布在细胞质内 ,细胞核阴性。邻片共定位结果显示颌下腺GnRHR免疫反应阳性细胞同样呈FSH免疫反应阳性 ,大部分的GnRHR免疫反应阳性细胞呈LH免疫反应阳性 ,小部分呈免疫反应阴性。两种免疫反应阳性物质均分布在细胞质内 ,细胞核阴性。 结论 大鼠下颌下腺浆液性腺泡上皮细胞、分泌管、排泄管和颗粒曲管上皮细胞可能以自分泌或旁分泌的GnRH调节自身合成与分泌FSH和LH。
高彬[8]（2004）在《大鼠肠道L细胞的表达及GnRH对其功能的影响》文中认为促性腺激素释放激素（GnRH）是由下丘脑神经元分泌的一种十肽激素，它经下丘脑垂体门脉系统进入垂体前叶，与垂体前叶促性腺激素细胞上的促性腺激素释放激素受体（GnRHR）结合，刺激卵泡刺激素（FSH）和黄体生成素（LH）的合成与分泌，进而调节性腺的发育与配子的形成。随着研究的深入，人们逐渐发现在下丘脑-垂体-性腺轴外，GnRH及其受体还存在于其它正常组织（胰腺、卵巢、胎盘等）、肿瘤组织（乳腺癌、肝癌、胰腺癌等）、免疫系统（如T、B淋巴细胞），对这些组织和恶性肿瘤的生长起调控作用。我校的一系列研究显示大鼠胃肠道中存在GnRH免疫反应阳性细胞和其受体的mRNA。大鼠胃内以自分泌或外分泌方式释放的GnRH对胃酸的分泌起重要的调节作用，GnRH类似物可以明显促进大鼠颌下腺对神经生长因子的分泌。 另一方面，胰高血糖素的前体为无活性的胰高血糖素原，其分子序列的第33～61氨基酸为胰高血糖素。由肠道上皮细胞（L细胞即EG细胞）生成和分泌的类似胰高血糖素的物质叫肠高血糖素（enteroglucagon），所以用一般免疫法测定胰高血糖素时免疫阳性反应物可包括胰高血糖素、胰高血糖素原、肠高血糖素3种分子。血浆中的胰高血糖素来源于胰岛A细胞，它具有很强的促进糖原分解和糖异生作用，使血糖明显升高，与胰岛B细胞分泌常四军压大月卜祠叮d匕学位论文的胰岛素相拮抗，其分泌受血糖等多种因素的调节。先前的研究中，我们发现豚鼠胰腺胰岛内GnRH受体免疫反应阳性细胞与胰岛内分泌胰高血糖素的A细胞分布相一致，GnRH阳性细胞则位于胰腺外分泌部，它有可能通过胰岛A细胞上的GnRH受体实现对胰高血糖素的调节。那么GnRH与胃肠道内的胰高血糖素之间是否存在有一定关系呢?目前，尚未见报道。 为了解肠道中肠高血糖素与GnRH的关系，本研究以免疫组织化学法观察了肠道中L细胞的分布及其与G创良H受体分布的关系，并以体外组织孵育和体内回肠灌注的方法观察了GnRH对L细胞的调节作用。主要研究结果如下: 1.免疫组织化学SABC方法显示，胃、十二指肠、空肠内未见胰高血糖素免疫反应阳性细胞，而结肠和回肠内可见胰高血糖素样免疫反应阳性细胞，邻片免疫组织化学结果显示肠道内胰高血糖素免疫反应阳性细胞同样呈GnRH受体免疫反应阳性。提示大鼠胃肠道内只有回肠和结肠存在胰高血糖素细胞（EG细胞）。回肠内的胰高血糖素细胞可能存在GnRH受体，GnRH可能以自分泌或旁分泌的方式对肠道内EG细胞所分泌的胰高血糖素免疫反应阳性物质进行调节。 2.应用1.0x10一弓mol/L一1.ox10--slnol/L浓度的GnRH类似物阿拉瑞林对回肠组织块进行体外孵育，各实验组培养液胰高血糖素样阳性物质的含量呈现升高达峰值后再下降的趋势。单因素方差分析显示实验组与对照组相比（阿拉瑞林1. 0x10一smol/L除外）均具有统计学差异。提示在一定浓度范围内，GnRH可能对大鼠回肠L细胞分泌的胰高血糖素免疫反应阳性物质呈现双向调节作用。 3.给大鼠回肠灌注浓度为1.0x10一4mol/L的GnRH类似物阿拉瑞林时，回肠液及血中胰高血糖素免疫反应阳性物质的含量均显着增加，与对照组相比具有显着性差异。提示当GnRH类似物浓度常四军医大月卜祠咬d匕学位勺仑j忆为1.Oxlo一4m01/L时，可能以自分泌或旁分泌的方式在体内促进回肠L细胞分泌胰高血糖素样免疫反应阳性物质。因此在1.Ox10一4mol/L浓度下，不论是体内还是体外GnRH都可能对肠道分泌胰高血糖素样免疫反应阳性物质表现促进作用。 结论:大鼠胃肠道内的GnRH可能对回肠和结肠的胰高血糖素免疫反应阳性细胞具有调节作用。
陈蕾,孙绪德,赵晶,杨安钢,黄威权[9]（2003）在《培养的大鼠胃壁细胞促性腺激素释放激素的定位、克隆及序列分析》文中认为目的 研究培养的大鼠胃壁细胞GnRH的定位及其基因序列。 方法 应用免疫组织化学和原位杂交的方法进行定位研究 ;从壁细胞中提取总RNA ,应用RT PCR的方法扩增GnRH基因 ,并对产物进行纯化回收 ,连接入pUC19载体中扩增 ,经PCR和酶切鉴定后进行序列分析。 结果 大鼠胃壁细胞呈GnRH免疫反应性阳性物质位于细胞质 ,细胞核为阴性 ;壁细胞内亦可检测到GnRHmRNA杂交信号 ,信号物质位于细胞质 ,细胞核为阴性 ;同样从大鼠胃壁细胞中扩增出GnRH基因的特异性条带 ,经序列分析发现 ,扩增产物的基因序列与文献报道的大鼠下丘脑的完全一致。 结论 大鼠胃粘膜壁细胞能表达GnRH基因 ,其序列和下丘脑的完全一致 ,并能自身合成GnRH ,说明GnRH可能以自分泌或以旁分泌的方式参与胃壁细胞功能的调节。
陈蕾[10]（2002）在《大鼠胃平滑肌细胞、壁细胞GnRH及其受体的研究》文中进行了进一步梳理促性腺激素释放激素（gonadotropin-releasing hormone，GnRH）是由下丘脑神经元分泌的一种含有十个氨基酸的肽类激素，经下丘脑-垂体-门脉系统进入垂体前叶，作用于垂体前叶的促性腺激素分泌细胞，刺激卵泡刺激素（follicle stimulating hormone，FSH）和黄体生成素（luteinizing hormone，LH）的分泌，从而调节性腺的发育与配子的形成。已有大量证据表明，GnRH及其受体可广泛存在于下丘脑-垂体轴之外，如免疫系统（T、B淋巴细胞）、生殖系统（卵巢、输卵管、前列腺、睾丸及胎盘等处）以及一些恶性肿瘤（乳腺癌、肺癌、胰腺癌及肝癌等），对这些组织和器官及恶性肿瘤的生长起调控作用。 我们先前的研究表明，在大鼠的消化系统广泛存在有GnRH及其受体，并且其受体的基因序列与垂体的基因序列一致，说明大鼠的消化系统能自身合成GnRH及其受体，同时这些组织或细胞是GnRH作用的靶细胞，如GnRH类似物可明显促进大鼠颌下腺对神经生长因子的分泌。那么，在培养的大鼠胃平滑肌细胞、胃粘膜壁细胞是否存在有GnRH及其受体，其GnRH的基因序列怎样?GnRH对它们的功能影响如何?均未见报道。因此我们 第囚军匡大学谬玄学伍沦文在先前研究的基础上，进行了以下研究：D」首先对大鼠的胃平滑肌细胞进行了分离培养及鉴定，并采用免疫细胞化学、原位杂交技术在培养的平滑肌细胞上原位检测GnRH受体的表达；［2］运用放射免疫分析法检测了GnRH类似物对大鼠胃平滑肌细胞PKC酶活性的影响，然后运用激光共聚焦技术检测了GnRH类似物对胃平滑肌细胞内Ca’”浓度的影响，以探讨胃平滑肌细胞内 GnRH受体介导的信号转导机制：［3］GnRH类似物对培养的胃平滑肌细胞处理后，分别采用＊T比色法、’H－TdR掺入法、检测PCNA法和流式细胞仪技术观察GnRH类似物对平滑肌细胞增殖情况及细胞周期分布的影响：「d对大鼠的胃壁细胞进行了分离培养及鉴定，运用形态学研究的方法检测了GnRH及其受体在培养的胃壁细胞上的分布，并运用RT－PCR、基因克隆测序等技术对壁细胞分泌的GnRH基因序列进行了研究；［5］ 用激光共聚焦技术检测GnRH类似物对培养的大鼠胃壁细胞内Ca’”浓度的影响，同时检测了GnRH类似物对在体大鼠胃酸分泌的作用，进一步了解GnRH对消化系统功能的调节，为先前提出GnRH也是一种胃肠激素的新观点提供更直接的实验依据。主要研究结果如下： 1．运用免疫细胞化学和原位杂交的方法发现，培养的大鼠胃平滑肌细胞含有GnRH受体免疫反应阳性物质，同样含有GnRH受体InRNA杂交信号，二者均位于细胞浆内，胞核为阴性，说明培养的胃平滑肌细胞能表达GnRH受体，是Gs作用的靶细胞。 2．运用放射性同位素的方法检测了GnRH类似物（阿拉瑞林）对大鼠胃平滑肌细胞PKC ＆活性的影响，发现阿拉瑞林可使培养的大鼠胃平滑肌细胞中PKC活性明显升高，3Inin时达高峰，10Inin后作用明显降低，且成剂量依赖性；同时发现在无外CaZ”时，阿拉瑞林也可使PKC活性升高， ．5－ 第回军皿大学傅士学伍论文但不如有外钙存在时高o＜0．05卜因此PKC活性的增高，并不完全依赖细胞外C八 它可以动员胞内＊“的释放激活PKC。 3．阿拉瑞林可使胞内叨”浓度升高，说明＊”参与了GnRH类似物阿拉瑞林对胃平滑肌细胞作用的细胞内分子转导过程，而细胞内＊扩的升高既源于细胞内钙的释放又源于细胞外钙的内流，外钙的内流主要是通过L－type钙通道实现的，内钙的释放不是通过RyRs受体，而是通过IP3受体实现的。 4．细胞的增殖实验表明，随着阿拉瑞林浓度的增大，与未用药的对照组相比，发现其M17’吸光度K值)逐渐降低（＜0刀5）；P CNCNA表达的平均荧光值逐渐减弱o＜0刀5)：大鼠胃平滑肌细胞的’付＊皿参入量依次减少(P＜(、05卜 且药物浓度越大，此三者下降越明显。在细胞周期中，与对照组相比，GI期细胞所占比例明显增加(P＜．05h S期细胞所占比例明显减少，且随药物浓度的增加而逐渐减少o＜0刀5卜说明＊nRH类似物可明显抑制大鼠胃平滑肌细胞的增殖作用，其作用途径可能是通过平滑肌细胞自身GnRH受体的直接介导而实现的。 5．运用细胞培养技术对大鼠的胃粘膜壁细胞进行了分离与培养，然后采用形态学的研究方法，研究了GnRH及其受体在大鼠胃粘膜壁细胞中的表达，发现胃粘膜壁细胞中含有GnRH蛋白和GnRll－mRNA，H者均定位于细胞浆内，并且发现GnRH受体蛋白及其GnRH受体的IuRNA也定位于细胞浆内，这提示大鼠胃粘膜壁细胞可自身合成和分泌GnRH，在胃粘膜壁细胞GDRH可能以自分泌的方式调节壁细胞的功能。 6．我们从培养的大鼠壁细胞中提取总RNA，应用RT－PCR的方法扩增Gngu基因，并对产洲行纯化回收，连接入pUC19 ＆体中扩增，经eR和酶切鉴定后进行序列分析。结果发现胃壁细胞中GnRH的基因序列与下丘脑的完全一致。 ．6．
二、大鼠颌下腺GnRH受体基因的体外扩增及基因序列分析（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、大鼠颌下腺GnRH受体基因的体外扩增及基因序列分析（论文提纲范文）
（1）池蝶蚌表皮生长因子受体底物15（Eps15）基因的分子特征及表达分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 实验器材及试剂 |
| 第1章 前言 |
| 1 表皮生长因子（EGF） |
| 2 表皮生长因子受体（EGFR） |
| 3 表皮生长因子受体底物 15（Eps15） |
| 4 本课题研究的目的、内容及意义 |
| 第2章 池蝶蚌Eps15基因的c DNA序列克隆及分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 池蝶蚌总RNA的提取 |
| 1.2.2 基因组DNA的消化处理 |
| 1.2.3 反转录PCR合成c DNA |
| 1.2.4 引物设计 |
| 1.2.5 池蝶蚌Eps15基因c DNA序列的克隆 |
| 1.2.6 目的片段的回收、连接、转化与测序 |
| 1.2.7 序列拼接及分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 总RNA的提取 |
| 2.2 池蝶蚌Eps15基因c DNA序列扩增结果及鉴定 |
| 2.3 池蝶蚌Eps15基因c DNA序列的基本分析 |
| 2.4 池蝶蚌Eps15基因的生物信息学分析 |
| 2.4.1 氨基酸组成及理化性质分析 |
| 2.4.2 蛋白质亲疏水性及信号肽 |
| 2.4.3 亚细胞定位预测分析 |
| 2.4.4 跨膜区结构预测分析 |
| 2.4.5 蛋白质二级结构预测分析 |
| 2.4.6 基因Hs-Eps15的系统进化分析 |
| 3 讨论 |
| 第3章 池蝶蚌Eps15基因在不同组织中的表达分析 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 池蝶蚌各组织总RNA提取 |
| 1.2.2 基因组DNA消化处理 |
| 1.2.3 反转录PCR合成c DNA |
| 1.2.4 引物设计 |
| 1.2.5 荧光定量PCR |
| 2 结果 |
| 2.1 总RNA提取 |
| 2.2 引物效果及反转录效果检测 |
| 2.3 池蝶蚌Eps15基因的组织表达谱分析 |
| 3 讨论 |
| 第4章 池蝶蚌Eps15蛋白的原核表达及免疫荧光定位 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 表达引物设计 |
| 1.2.2 重组表达载体的构建 |
| 1.2.3 融合蛋白的表达及纯化 |
| 1.2.4 蛋白浓度测定 |
| 1.2.5 多克隆抗体的制备 |
| 1.2.6 ELISA间接法测定多克隆抗体效价 |
| 1.2.7 Western blot检测Hs-Eps15多克隆抗体 |
| 1.2.8 Hs-Eps15蛋白在池蝶蚌组织中的细胞定位 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 PCR扩增目的表达片段 |
| 2.2 阳性重组质粒的筛选 |
| 2.3 重组质粒提取结果 |
| 2.4 融合蛋白的诱导表达 |
| 2.5 融合蛋白的纯化及浓缩 |
| 2.6 Bradford法测定融合蛋白浓度 |
| 2.7 ELISA间接法测定多克隆抗血清效价 |
| 2.8 Western blot检测抗体特异性 |
| 2.9 HE染色 |
| 2.10 免疫荧光定位 |
| 3 讨论 |
| 第5章 结论与展望 |
| 1 结论 |
| 2 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
（2）INHA、GnRHR基因多态性与母猪部分繁殖性状的关联性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 文献综述 |
| 1 研究目的、意义 |
| 2 国内外研究进展 |
| 2.1 INHA基因研究进展 |
| 2.2 GnRHR基因研究进展 |
| 3 SNPs标记 |
| 4 PCR-RFLP技术 |
| 5 PCR-SSCP技术 |
| 6 不对称PCR-SSCP技术 |
| 第二部分 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 试验用猪及耳样 |
| 1.2 资料收集 |
| 1.3 主要仪器和设备 |
| 1.4 主要药品和试剂 |
| 1.5 试剂配制 |
| 1.6 主要分子生物学分析工具软件 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 猪基因组DNA的提取 |
| 2.2 PCR-RFLP技术 |
| 2.3 PCR-SSCP分析技术 |
| 2.4 不对称PCR-SSCP分析 |
| 3 猪INHA基因PCR扩增 |
| 3.1 PCR扩增引物的设计与合成 |
| 3.2 PCR扩增反应条件 |
| 4 猪GnRHR基因PCR扩增 |
| 4.1 PCR扩增引物的设计与合成 |
| 4.2 PCR扩增反应条件 |
| 5 统计分析方法 |
| 5.1 群体基因频率和基因型频率的计算 |
| 5.2 INHA基因和GnRHR基因位点Hardy-Weinberg平衡性检验 |
| 5.3 群体内遗传变异的度量指标—杂合度 |
| 5.4 有效等位基因数(Effective Number of Alleles,Ne) |
| 5.5 多态信息含量(Polymorphic Information Content,PIC)的计算 |
| 5.6 INHA基因、GnRHR基因位点与母猪繁殖性状关系的研究 |
| 5.7 INHA基因两突变位点基因型的合并效应的研究 |
| 5.8 INHA基因与GnRHR基因互作效应的研究 |
| 第三部分 结果与分析 |
| 1 PCR扩增产物 |
| 2 猪INHA基因多态性的检测 |
| 2.1 INHA基因引物1扩增产物的PCR-RFLP分析 |
| 2.2 PCR-RFLP检测结果 |
| 2.3 对G262A突变位点的基因频率分布的群体遗传学分析 |
| 3 猪INHA基因A852G位点不对称PCR-SSCP分析 |
| 3.1 不对称PCR-SSCP检测结果 |
| 3.2 不同带型个体PCR产物回收测序 |
| 3.3 对INHA基因A852G位点的基因频率分布的群体遗传学分析 |
| 4 PCR-SSCP分析 |
| 4.1 猪INHA基因P3的PCR-SSCP分析 |
| 4.2 猪GnRHR基因扩增产物的PCR-SSCP分析 |
| 5 INHA基因两个突变位点的基因型合并与繁殖性状的相关性分析 |
| 6 INHA基因和GnRHR基因多态位点的互作效应分析 |
| 6.1 INHA基因G262A与GnRHR基因A310C基因互作对母猪部分繁殖性状的影响 |
| 6.2 INHA基因A852G与GnRHR基因A310C基因互作对母猪部分繁殖性状的影响 |
| 第四部分 讨论与结论 |
| 1 关于实验方法 |
| 1.1 影响SSCP检测的因素 |
| 1.2 SSCP分析方法的优化——不对称PCR-SSCP分析 |
| 1.3 关于引物设计 |
| 2 关于实验结果 |
| 2.1 INHA基因和GnRHR基因各位点的遗传结构分析 |
| 2.2 基因多态性与母猪繁殖性能的分析 |
| 参考文献 |
| 附录:提交GeneBank序列 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（3）进食和去势对大鼠空肠、胰腺促性腺激素释放激素及其受体表达影响的研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 一、促性腺激素释放激素及其受体 |
| 二、GnRH类似物与糖代谢的关系 |
| 三、肠道与糖代谢的关系 |
| 三、去势对糖代谢的影响 |
| 正文 |
| 第一部分 手术去势和皮下注射GnRH类似物对大鼠空肠、胰腺GnRH及其受体免疫组织化学研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 灌服葡萄糖溶液对大鼠空肠、胰腺GnRH及其受体mRNA相对表达量的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第三部分 手术去势对大鼠空肠、胰腺GnRH及其受体mRNA表达的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第四部分 皮下注射GnRH类似物对大鼠胰腺、肠道GnRH及其受体mRNA表达的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
（4）促性腺激素释放激素及其受体在糖尿病大鼠肠道、胰腺中表达的研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 正文 |
| 实验一 糖尿病大鼠肠道、胰腺GnRH及其受体免疫组织化学定位研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验二糖尿病大鼠肠道、胰腺GnRH及其受体、胰高血糖素原、 GLP-1 受体mRNA表达的研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
（5）能量代谢相关因子对奶牛肝糖异生的调控作用（论文提纲范文）
| 提要 |
| 前言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 奶牛的糖代谢 |
| 1 葡萄糖对奶牛营养的重要性 |
| 2 奶牛体内葡萄糖的来源 |
| 3 奶牛体内葡萄糖的更新与去路 |
| 4 围产期奶牛的糖代谢特点 |
| 5 结束语 |
| 第二章 酮病病牛的酮体代谢特点 |
| 1 机体酮体的形成及代谢障碍 |
| 2 奶牛酮病的发病机制 |
| 3 结束语 |
| 第三章 神经内分泌因子对肝糖异生的影响 |
| 1 神经系统对血糖的调节作用 |
| 2 代谢信号对血糖的调节作用 |
| 3 结束语 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第一章 LP、NPY 对牛肝细胞PC mRNA、PEPCK mRNA 丰度及其活性的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二章 GLN、INS、IGF-Ⅰ对牛肝细胞PC m RNA、PEPCK mRNA 丰度及其活性的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 围产期能量负平衡对奶牛肝组织PC mRNA、PEPCK mRNA 丰度及其活性的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间发表的学术论文 |
| 附录1 PEPCK 测序图谱及序列分析 |
| 附录2 PC 测序图谱及序列分析 |
| 附录3 β-actin 测序图谱及序列分析 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 致谢 |
| 导师简介 |
| 作者简介 |
（6）牙鲆促性腺激素释放激素及其免疫影响的研究（论文提纲范文）
| 独创声明 |
| 学位论文版权使用授权书 |
| 英文缩略语注释 |
| 摘 要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1 促性腺激素释放激素的研究进展 |
| 1.1 GnRH 的发现 |
| 1.2 GnRH 一级结构 |
| 1.3 GnRH 肽的功能 |
| 1.4 GnRH 分子的分类与系统进化 |
| 1.5 GnRH 肽的功能域和构象 |
| 2 促性腺激素释放激素受体的研究进展 |
| 2.1 GnRH 受体的系统进化 |
| 2.2 GnRH 受体的结构特征 |
| 2.3 GnRH 受体的三级结构 |
| 2.4 type I GnRH 受体中GnRH 结合位点 |
| 3 促性腺激素释放激素的激活机制 |
| 3.1 TM II/VII 中 Asn~(87)/Asp~(318) 的相互作用 |
| 3.2 Asp~(138)/Arg~(139) 在TM III 中的相互作用 |
| 3.3 Glu~(2.53(90))-Lys~(3.32(121))-Asp~(2.61(98))的三联体 |
| 3.4 ECL II 的作用 |
| 4 GnRH 受体活化及其介导的信号传导 |
| 4.1 GnRH 受体活化的完整模式 |
| 4.2 肽-受体介导的信号传导和细胞内信号传导的新概念 |
| 第二章 牙鲆促性腺激素释放激素的免疫组织化学研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果与分析 |
| 3 结论与讨论 |
| 第三章 牙鲆促性腺激素释放激素基因的克隆与表达特征分析 |
| 第一节 牙鲆脑促性腺激素释放激素cGnRH-II 基因克隆和特征分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果与分析 |
| 第二节 牙鲆促性腺激素释放激素sbGnRH 基因的分子克隆与特征分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果与分析 |
| 第三节 牙鲆促性腺激素释放激素sGnRH 基因片段的克隆与系统进化分析- |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果与分析 |
| 第四节 本章结论和讨论 |
| 第四章 牙鲆促性腺激素释放激素受体（GnRH-R）基因的克隆与组织表达分析 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 牙鲆GnRH 受体全长cDNA 的克隆 |
| 2.2 牙鲆GnRH 受体cDNA 的获得和结构特征分析 |
| 2.3 牙鲆GnRH 受体蛋白功能域和活性位点查找 |
| 2.4 牙鲆GnRH-R 多序列比对与系统进化分析 |
| 2.5 GnRH 受体在牙鲆中的组织分布 |
| 3 结论与讨论 |
| 3.1 牙鲆GnRH 受体属于type I GnRH-R |
| 3.2 牙鲆GnRH 受体保守的结构特征 |
| 3.3 牙鲆GnRH 受体可能参与到信号传导的分子特征 |
| 3.4 GnRH 受体与GnRH 共表达的意义 |
| 第五章 GnRH 类似物对牙鲆脑垂体 GnRH-R、GtH 和 GH 转录水平的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果与分析 |
| 3 结论与讨论 |
| 第六章 GnRH 类似物对牙鲆 IL-2 分泌及非特异性免疫功能的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果与分析 |
| 3 结论与讨论 |
| 参考文献 |
| 博士在读期间发表的文章 |
| 致谢 |
（8）大鼠肠道L细胞的表达及GnRH对其功能的影响（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 实验一 |
| 实验二 |
| 实验三 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（10）大鼠胃平滑肌细胞、壁细胞GnRH及其受体的研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 文献回顾 |
| 第一部分 GnRH及其受体的研究进展 |
| 第二部分 GnRH受体的信号转导机制 |
| 前言 |
| 实验研究 |
| 第一部分 培养的大鼠胃平滑肌细胞GnRH受体的免疫组化及原位杂交研究 |
| 第二部分 GnRH类似物对培养的大鼠胃平滑肌细胞蛋白激酶C活性及胞内钙离子浓度的影响 |
| 第三部分 GnRH类似物对培养的大鼠胃平滑肌细胞增殖的影响 |
| 第四部分 培养的大鼠胃粘膜壁细胞GnRH的定位、克隆及序列分析 |
| 第五部分 培养的大鼠胃粘膜壁细胞GnRH受体的定位、GnRH类似物对胃酸分泌及对壁细胞内钙离子浓度的影响 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
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| 致谢 |
四、大鼠颌下腺GnRH受体基因的体外扩增及基因序列分析（论文参考文献）
- [1]池蝶蚌表皮生长因子受体底物15（Eps15）基因的分子特征及表达分析[D]. 刘国凤. 南昌大学, 2015(02)
- [2]INHA、GnRHR基因多态性与母猪部分繁殖性状的关联性研究[D]. 丁朝阳. 湖南农业大学, 2009(S1)
- [3]进食和去势对大鼠空肠、胰腺促性腺激素释放激素及其受体表达影响的研究[D]. 曹宏伟. 第四军医大学, 2008(04)
- [4]促性腺激素释放激素及其受体在糖尿病大鼠肠道、胰腺中表达的研究[D]. 陈榕. 第四军医大学, 2008(04)
- [5]能量代谢相关因子对奶牛肝糖异生的调控作用[D]. 陈承祯. 吉林大学, 2007(03)
- [6]牙鲆促性腺激素释放激素及其免疫影响的研究[D]. 房保海. 中国海洋大学, 2006(02)
- [7]大鼠下颌下腺卵泡刺激素、黄体生成素的分布及与促性腺激素释放激素受体的共定位研究[J]. 付建芳,黄威权,王世鄂,初晨宇. 解剖学报, 2004(06)
- [8]大鼠肠道L细胞的表达及GnRH对其功能的影响[D]. 高彬. 第四军医大学, 2004(04)
- [9]培养的大鼠胃壁细胞促性腺激素释放激素的定位、克隆及序列分析[J]. 陈蕾,孙绪德,赵晶,杨安钢,黄威权. 解剖学报, 2003(03)
- [10]大鼠胃平滑肌细胞、壁细胞GnRH及其受体的研究[D]. 陈蕾. 第四军医大学, 2002(02)