一、丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活基因的克隆化研究（论文文献综述）
赵静,韩铭,成军[1]（2018）在《丙型肝炎病毒非结构蛋白5A反式激活蛋白9与信号转导通路研究进展》文中提出丙型肝炎病毒非结构蛋白5A反式激活蛋白9（hepatitis C virus nonstructural protein 5A tranactivator 9,NS5ATP9）参与多条信号转导通路,其可调控肝纤维化、细胞周期、肿瘤、DNA损伤修复、自噬、软骨形成和造血干祖细胞发育等生理过程。本文将对NS5ATP9基因的结构、功能以及与信号转导通路的关系进行总结,为后期对其作用机制和其他功能的深入探究奠定基础。
陈立冬,成军,洪源,张连峰,韩莉,郭江[2]（2010）在《丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活基因4剪切体Ns5atp4a基因原核表达载体的构建和表达》文中提出目的构建丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活基因4剪切体（NS5ATP4A）的原核表达载体并进行表达。方法用PCR扩增NS5ATP4A基因,克隆入pET32a（+）质粒,构建pET32a（+）-NS5ATP4A表达重组体,转化DH5α和BL21菌,经IPTG诱导。SDS-PAGE分析,Western Blot验证蛋白带。结果成功构建大肠杆菌原核表达载体。经IPTG诱导,得到了目的蛋白分子量为35kD,用Western Blot证实其具有良好的抗原性。结论构建原核表达载体pET32a（+）-NS5ATP4A,为抗原的制备及临床检测奠定了基础。
闫记[3]（2008）在《HCV NS5A反式激活基因NS5ATP9对肝癌细胞生长的影响》文中进行了进一步梳理丙型肝炎病毒（HCV）为单股正链RNA病毒,基因组大小约9.4kb。HCV感染后引起慢性肝炎,甚至肝硬化、肝癌。HCV基因组仅有一个开放阅读框,编码一个由3010到3033个氨基酸组成的多聚蛋白,通过细胞和病毒的蛋白酶切割,形成结构蛋白和非结构蛋白。其中非结构蛋白NS5A在HCV的致病过程中发挥重要作用。NS5A基因位于6258—7601 nt之间,编码分子量为56 kD的NS5A蛋白,位于细胞浆内。NS5A蛋白具有多种生物学功能,参与HCV多聚蛋白的成熟和RNA的复制过程;作为转录激活因子,影响细胞信号转导途径,激活多种病毒及细胞的启动子,调控细胞、病毒基因表达,调节细胞生长、凋亡以及免疫等,与感染HCV的细胞发生恶性转化过程密切相关。NS5ATP9是HCV NS5A反式激活的靶蛋白,它与细胞的凋亡、增殖及肝纤维化发生发展密切相关。为探讨HCV NS5A对细胞内NS5ATP9表达的影响,以及外源性NS5ATP9表达对肝细胞增殖和细胞周期的影响,本研究应用分子生物学技术,分别将重组质粒pcDNA3.1、pcDNA3.1-NS5A和pcDNA3.1-NS5ATP9转染HuH-7和HepG2细胞,经G418筛选,获得稳定转染的细胞克隆。采用实时定量PCR检测NS5ATP9 mRNA表达,结果表明,与对照组比较,转染pcDNA3.1-NS5A的肝细胞,NS5ATP9 mRNA表达水平显着提高;发现转染pcDNA3.1-NS5ATP9的肝细胞,通过流式细胞术检测细胞周期发现S期细胞数量显着增加,通过活细胞发光法发现显着促进肝细胞增殖。研究结果为进一步研究NS5A和NS5ATP9的相互作用及其对肝细胞细胞生物学的影响奠定基础。
王建军,赵平,靳雪源,成军,卿松,丁宁[4]（2008）在《丙型肝炎病毒非结构蛋白5A反式激活蛋白6的亚细胞定位研究》文中提出目的研究非结构蛋白5A反式激活蛋白6（NS5ATP6）基因在细胞内的表达及表达蛋白的亚细胞定位。方法构建HBeAg TP基因的绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-C1-NS5ATP6,pEGFP-C1-NS5ATP6转染HepG2细胞,24h后荧光显微镜下观察蛋白表达的亚细胞定位。结果成功构建出NS5ATP6基因绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-C1-NS5ATP6,其表达的蛋白亚细胞定位于细胞质。结论NS5ATP6基因可表达蛋白,其表达蛋白亚细胞定位于细胞质。
张连峰,李继昌,韩莉,成军,陈立东[5]（2007）在《丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活基因NS5ATP1的反式调节基因筛选》文中研究说明目的:应用抑制性消减杂交（SSH）技术构建丙型肝炎病毒（HCV）非结构蛋白NS5A反式激活基因NS5ATP1反式激活的相关基因,从分子生物学的角度研究HCV致病机制。方法:以NS5ATP1表达质粒pcDNA3.1（-）-NS5ATP1转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1（-）转染的HepG2细胞为对照组,从中分别提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaⅠ酶切后将实验组cDNA分成2组,分别与2种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行2次消减杂交及2次抑制性聚合酶链反应（PCR）扩增,将产物与pGEM-Teasy载体连接,构建cDNA消减文库,并转化大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆经PCR扩增后进行测序及生物信息学分析。结果:成功构建NS5ATP1反式激活基因差异表达的cDNA消减文库。文库扩增后将阳性克隆经菌落PCR分析,得到90个200～1000bp的插入片断。挑选含插入片段的30个克隆进行测序,通过生物信息学分析得到3种已知序列的基因（Ras癌基因家族成员RAN、DNA依赖的RNA聚合酶Ⅱ多肽C、核糖体蛋白L2）和1个未知功能的序列（推测为新基因）。结论:筛选得到的cDNA基因全长序列包括一些与细胞基因表达及恶性转化相关的蛋白质编码基因,为HCVNS5A可能存在的调控机制提供新的线索。
陈立冬[6]（2007）在《丙肝病毒非结构基因NS5A的克隆表达及其缺失突变体的基因表达谱芯片分析》文中研究指明背景和目的丙型肝炎病毒（HCV）属黄病毒科，主要经血传播的肝炎病毒。可引起慢性肝炎、肝硬化及肝癌，对人类健康危害极大。目前世界上有1.7亿人感染。病毒主要感染肝细胞，然而有研究表明丙型肝炎病毒也可能感染其他类型的细胞，比如B细胞，单核巨噬细胞，和树突状细胞，从而导致免疫功能异常。了解HCV作用于肝细胞和肝外细胞的分子生物学基础对揭示丙肝的发病和慢性化机制非常关键。HCV基因组转录翻译为一条多肽前体，在信号肽酶和蛋白酶的作用下裂解为10个蛋白，包括Core、E1、E2、P7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B。NS5A是非结构蛋白的一种（HCV-1b型有447个氨基酸残基），C-末端丝氨酸被磷酸化后形成基础磷酸化的NS5A蛋白。在NS4A蛋白依赖的模式下，NS5A蛋白中央的丝氨酸被磷酸化，形成高度磷酸化的NS5A蛋白。NS4A蛋白结合并支配NS5A蛋白的高度磷酸化。尽管NS5A在病毒复制中的作用还未搞清，然而却发现NS5A上的一段区域（氨基酸2209到2248）与干扰素治疗的敏感性有关。此区已命名为干扰素（IFN，interferon）敏感决定区（ISDR）。对判断干扰素的疗效很有帮助。另一方面，NS5A蛋白可和PKR催化结构域直接相互作用，抑制其活性。在体内，NS5A蛋白可破坏双链RNA激活的蛋白激酶（double-stranded RNA-activated protein kinase PKR）的二级结构。抑制PKR介导的eIFalpha磷酸化。但NS5A蛋白是否参与了感染细胞抵抗IFN的抗病毒效应仍未明了。研究表明，缺失N-末段129-146氨基酸残基的NS5A蛋白有较强的反式激活作用。NSSA的转录激活区域包括两个酸性氨基酸区（2 143-2 184 2 220-2 273氨基酸残基）和一个脯氨酸富集区（2 282-2 327氨基酸残基），这些区域被认为是NS5A的转录活性区域。对NS5A进行研究，找出NS5A在肝细胞中的表达对肝细胞基因表达谱产生的影响，并进一步弄清具体作用机制、作用效应及连带影响，对明确HCV的致病机制，寻找有效防治方法具有重要意义。方法1．根据文献[6]及NCBI的Genbank上公布的HCV-1b型基因序列，设计PCR产物片段包含NS5A的特异性引物，以从病人血清中提取的以HCV-1b型RNA为模板，，利用RT-PCR方法扩增出1632bp片段，连接至pGEM-T载体并送测序，根据测序结果设计PCR产物为NS5A的特异性引物，以上述连接至pGEM-T载体1632bp片段为模板扩增出1341bp片段，连接至pGEM-T载体并送测序。2．将上述引入酶切位点EcoRV和HindⅢ的pGEM-T-NS5A和pET32a（+）空质粒经EcoRV和HindⅢ双酶切，酶切片段回收后连接，测序正确后转化BL21宿主菌，0.5mM／ml IPTG、30℃诱导5hr，3．根据1的测序结果设计NS5A缺失突变型1特异性引物，引入酶切位点KpnⅠ和HindⅢ，以pGEM-T-NS5A质粒为模板，PCR扩增出591bp片段，插入至真核表达载体pcDNA3。1（-）／myc中，测序完全正确，表明NS5A缺失突变型1真核表达载体的构建成功。4．用3构建的pcDNA3。1／myc-His（-）A-NS5ADM1真核表达重组质粒，与空质粒分别转染HepG2细胞并获得表达，两者互为平行对照，提取转染后的细胞总RNA，应用基因表达谱芯片技术检测HepG2在NS5A缺失突变体转染后差异表达的基因谱的变化。结果1．NS5A测序结果和NCBI上NS5A序列比对后，有91.4％的同源性，表明NS5A已克隆成功。2．Western blotting检测结果显示我们获得了带有组氨酸标签的重组融合蛋白的优化表达。3．NS5A缺失突变型测序结果表明NS5A已克隆成功。4．筛选获得了3条已知的反式上调基因，10条已知的反式下调基因。结论1．成功克隆了NS5A基因，NS5A成功表达为今后单抗和多抗的制备奠定了基础。2．NS5A缺失突变体上调基因为①．细胞质膜钙离子转运ATP酶2；②．引发酶多肽；③．环指蛋白185。下调基因包括①Hbrm基因；②SCL／TAL1阻断基因座；③核糖核苷二磷酸还原酶M2链相似蛋白；④锌指蛋白253；⑤白介素2增强结合因子（ILF2）；⑥U2相关SR40蛋白；⑦神经母细胞瘤扩增蛋白；⑧酸性钙通道；⑨大电导钙激活钾通道；⑩ralA结合蛋白1（RALBP1）等。结果提示NS5Adm1与DNA和RNA复制合成过程、离子通道蛋白，肿瘤细胞的形成和细胞凋亡有关。3．上述研究为进一步开展NS5A的生物学活性研究奠定了物质基础，以及为研究其在体内存在的调控机制提供了线索和依据。
白桂芹,张树林,成军,杨倩,蔺淑梅,刘妍,黄燕萍[7]（2005）在《基因表达谱芯片筛选NS5ATP2剪切体NS5ATP2-512转染细胞差异表达基因》文中研究说明目的应用基因芯片技术检测丙型肝炎病毒（HCV）非结构蛋白5A（NS5A）反式激活基因NS5ATP2剪切体512的表达对肝母细胞瘤细胞HepG2基因表达谱的影响,进一步阐明NS5ATP2剪切体512蛋白可能的分子生物学功能。方法设计并合成NS5ATP2基因序列特异性的引物,应用聚合酶链反应（PCR）技术扩增NS5ATP2蛋白编码基因片段,以常规的分子生物学技术将获得的NS5ATP2编码基因片段克隆到TA载体中进行核苷酸序列的测定,在此过程中发现其剪切体NS5ATP2512并构建真核表达载体pcDNA3.1（-）NS5ATP2512。以脂质体转染肝母细胞瘤细胞系HepG2,提取mRNA,逆转录为cDNA,与转染空白表达载体pcDNA3.1（-）的HepG2细胞进行cDNA芯片分析。结果构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定,证实准确无误。提取高质量的mRNA,逆转录为cDNA,进行DNA芯片技术分析。在1152个基因表达谱的筛选中,发现有14个基因表达水平显着上调,15个基因表达水平显着下调。结论应用基因表达谱芯片技术成功筛选了NS5ATP2剪切体NS5ATP2512转染细胞后差异表达基因,为进一步阐明NS5ATP2512蛋白可能的生物学功能提供依据。
刘妍[8]（2005）在《丙型肝炎病毒非结构蛋白4A、4B与肝细胞相互作用的机制研究》文中指出丙型肝炎病毒（hepatitis C virus, HCV）感染不仅引起急、慢性病毒性肝炎,而且与肝纤维化和肝细胞癌的发生发展进程密切相关。病毒感染肝细胞后,病毒的核酸、蛋白与肝细胞的核酸、蛋白等生物大分子之间的相互作用是病毒致病的主要分子机制之一。HCV基因组长约9.6kb,含有一个长的开放阅读框架（ORF）,编码一个约3010～3033个氨基酸残基（aa）的多蛋白前体,经宿主细胞信号肽酶和病毒蛋白酶加工成至少十种结构蛋白和非结构蛋白,C、E1、E2、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B。目前还发现核心蛋白C的编码基因通过移框从而编码一种新的17kD的F蛋白,这些蛋白在病毒的复制和繁殖中各有不同的功能,但某些具体机制尚不清楚。本研究以两个非结构蛋白NS4A、NS4B为研究对象,旨在探讨HCV NS4A和NS4B蛋白对肝细胞基因表达谱的调节及与肝细胞蛋白之间的相互作用,对于了解HCV NS4A、NS4B蛋白的致病机制及寻找有效防治HCV的方法具有重要意义。 为研究NS4A、NS4B蛋白的反式激活功能,我们构建了NS4A、NS4B的真核表达载体pcDNA3.1（-）-NS4A和pcDNA3.1（-）-NS4B,分别将其与氯霉素乙酰转移酶报告基因表达质粒pCAT3-Promoter（含有SV40早期启动子）共转染人肝癌细胞系HepG2,用酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞中氯霉素乙酰转移酶（CAT）基因的表达活性;以表达质粒pcDNA3.1（-）-NS4A和pcDNA3.1（-）-NS4B转染HepG2细胞,空载体pcDNA3.1（-）为平行对照,制备转染后的细胞裂解液,应用抑制性消减杂交技术（suppression subtractive hybridization, SSH）,构建HCV NS4A、NS4B反式激活相关基因差异表达的cDNA消减文库,对筛选的克隆进行测序及同源性分析。结果发现,NS4A、NS4B能够反式激活SV40启动子的转录活性,进而促使其调控的下游CAT基因表达增强,NS4B的反式激活作用强于NS4A。消减杂交分析显示,NS4A、NS4B能够上调肝细胞中多种基因的表达,包括与细胞生长调节、细胞内信号转导、蛋白质翻译合成、肿瘤发生及物质代谢密切相关的蛋白编码基因;此外,我们还筛选到两个新基因,分别命名为NS4A反式激活
杨瑗,杨倩,成军,蔺淑梅,黄燕萍,赵英仁[9]（2005）在《基因表达谱芯片技术筛选NS5ATP2 （615）蛋白反式调节基因》文中提出目的 :对新基因NS5ATP2 （615 ）转染肝癌细胞的基因表达谱进行分析 ,探索该基因表达对肝细胞基因表达的调节机制及其生物学功能。方法 :应用生物信息学 （bioinformatics）技术 ,分析我们研究组通过抑制消减杂交（SSH）技术筛选得到的新基因NS5ATP2 （615 ）的全长编码序列 ,构建NS5ATP2的真核表达载体 pcDNA3 1（-） NS5ATP2 （615 ）。应用基因表达谱芯片技术对重组表达质粒pcDNA3 1（-） NS5ATP2 （615 ）和 pcDNA3 1（-）空载体分别转染的HepG2细胞的mRNA的差异性表达进行检测。 结果 :确定基因NS5ATP2 （615 ）由 615nt组成 ,编码 2 0 4aa的蛋白。基因表达谱芯片所检测的 115 2条目的基因均为GenBank中登录的基因 ,NS5ATP2 （615 ）表达质粒转染的细胞有 40条差异表达基因 ,其中 18条基因表达增强 ,2 2条基因表达降低。这些差异表达的基因与细胞信号转导、凋亡、肿瘤的发生密切相关。结论 :基因表达谱芯片技术对于初步探索新基因的功能提供重要的资料。本实验结果为进一步阐明NS5ATP2 （615 ）生物学功能及HCVNS5A的致病机制提供了理论依据。
成军,杨倩,刘妍,王建军,纪冬[10]（2004）在《小鼠和大鼠NS5ATP4同源基因序列的生物信息学分析》文中进行了进一步梳理目的:克隆、鉴定、分析小鼠和大鼠NS5ATP4基因序列, 确定编码产物序列,并对于其与人的NSSATP4基因及其编码产物的序列的同源性进行分析. 方法:利用基因芯片技术获得了人NS5ATP4的cDNA序列,利用生物信息学技术确定小鼠、大鼠的NS5ATP4的基因及其编码产物的序列,并对于其同源性进行生物信息学分析. 结果:利用生物信息学技术确定了小鼠和大鼠的NS5ATP4 的基因及其编码产物的序列,小鼠和大鼠的NS5ATP4编码基因区分别由762和756个核苷酸（nt）组成.编码产物分别由263和261个氨基酸残基（aa）组成.与人NS5ATP4基因和蛋白质一级结构序列的同源性分别为90.29%,84.25%和95.65%,86.96%. 结论:应用生物信息学技术确定了小鼠和大鼠的NS5ATP4 的基因及编码产物的序列.
二、丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活基因的克隆化研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活基因的克隆化研究（论文提纲范文）
（1）丙型肝炎病毒非结构蛋白5A反式激活蛋白9与信号转导通路研究进展（论文提纲范文）
| 1 NS5ATP9基因概述 |
| 1.1 NS5ATP9基因的发现与命名 |
| 1.2 NS5ATP9基因的定位与结构 |
| 1.3 NS5ATP9基因的功能 |
| 2 NS5ATP9与信号转导通路 |
| 2.1 NS5ATP9与Wnt/β-catenin信号转导通路 |
| 2.2 NS5ATP9与MAPK信号转导通路 |
| 2.3 NS5ATP9与TGF-β/Smad3信号转导通路 |
| 2.4 NS5ATP9与NF-κB信号转导通路 |
| 2.5 NS5ATP9与CDK-RB-E2F信号转导通路 |
| 2.6 NS5ATP9与p53-p21信号转导通路 |
| 3 总结与展望 |
（2）丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活基因4剪切体Ns5atp4a基因原核表达载体的构建和表达（论文提纲范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 NS5ATP4A基因的扩增 |
| 1.2.2 pET32a (+) -NS5ATP4A重组质粒的构建 |
| 1.2.3 重组蛋白的表达 |
| 1.2.4 目的蛋白的检测 |
| 1.2.5 重组蛋白的抗原性检测 |
| 2 结果 |
| 2.1 pET32a-HCV FTP2质粒酶切鉴定 |
| 2.2 表达产物的SDS-PAGE和Western免疫印迹分析 |
| 3 讨论 |
（3）HCV NS5A反式激活基因NS5ATP9对肝癌细胞生长的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 主要仪器设备 |
| 英文缩略词 |
| 目录 |
| 文献综述 |
| 第一章 HCV病原学和流行病学研究进展 |
| 1.1 HCV特点 |
| 1.2 HCV流行病学研究进展 |
| 1.2.1 HCV感染的分布特征 |
| 1.2.2 HCV感染的传染源HCV |
| 1.2.3 HCV感染的传播途径 |
| 1.2.4 HCV的易感人群 |
| 1.2.5 HCV感染的预防 |
| 第二章 NS5A和它的反式激活基因NS5ATP9的研究进展 |
| 2.1 丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A的功能 |
| 2.1.1 HCV NS5A基因的基因定位及结构 |
| 2.1.2 HCV NS5A与病毒复制 |
| 2.1.3 HCV NS5A对细胞周期的调节 |
| 2.1.4 HCV NS5A在信号转导中的作用 |
| 2.1.5 HCV NS5A对转录的激活 |
| 2.1.6 HCV NS5A调节宿主细胞内的钙水平 |
| 2.2 丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活基因的克隆化研究 |
| 2.3 NS5ATP9基因的最新研究进展 |
| 实验研究 |
| 第三章 实时荧光定量RT-PCR方法验证NS5A表达对NS5ATP9基因表达的影响 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 主要材料 |
| 3.2.2 主要试剂 |
| 3.2.3 转化 |
| 3.2.4 提取细菌质粒(碱裂解法) |
| 3.2.5 酶切鉴定 |
| 3.2.6 PCR鉴定 |
| 3.2.7 磁珠法小量提取质粒 |
| 3.2.8 细胞复苏 |
| 3.2.9 传代培养 |
| 3.2.10 细胞稳定转染 |
| 3.2.11 设计实时荧光定量RT-PCR引物 |
| 3.2.12 总RNA提取 |
| 3.2.13 实时荧光定量RT-PCR反应 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 重组质粒的鉴定 |
| 3.3.1.1 双酶切鉴定 |
| 3.3.1.2 PCR扩增鉴定 |
| 3.3.2 两种细胞的总RNA的完整性鉴定 |
| 3.3.3 实时荧光定量RT-PCR结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 外源性NS5ATP9基因对HuH-7和HepG2细胞生长的影响 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 材料 |
| 4.2.2 方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 外源性NS5ATP9基因对细胞周期的影响 |
| 4.3.2 外源性NS5ATP9基因对细胞增值的影响 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 总结及下一步研究课题 |
| 参考文献 |
| 已发表及待发表的综述及论文 |
| 致谢 |
（6）丙肝病毒非结构基因NS5A的克隆表达及其缺失突变体的基因表达谱芯片分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一章 NS5A的克隆化与原核表达 |
| 第一节 NS5A基因的克隆化 |
| 引言 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 第二节 NS5A的原核表达与Western bolt鉴定 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 第二章 NS5A缺失突变型1真核表达载体的构建与表达谱芯片分析 |
| 引言 |
| 第一节 NSSA缺失突变型1真核表达载体的构建 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 第二节 NS5A缺失突变型1表达谱芯片分析 |
| 一、材料和方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述部分 |
| NS5A的研究进展 |
| 参考文献 |
| 英文缩略词 |
| 致谢 |
（8）丙型肝炎病毒非结构蛋白4A、4B与肝细胞相互作用的机制研究（论文提纲范文）
| 英文缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 主要仪器设备 |
| 第一部分 HCV NS4A、NS4B蛋白反式调节肝细胞基因表达谱的研究 |
| 第一节 HCV NS4A、NS4B真核表达载体的构建及其反式激活SV40即刻早期启动子的研究 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 第二节 抑制性消减杂交技术筛选HCV NS4A、NS4B蛋白反式调节基因 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 HCV NS4A、NS4B蛋白与肝细胞蛋白之间相互作用的研究 |
| 第一节 HCV NS4A、NS4B酵母“饵”载体的构建及在酵母细胞中表达的研究 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 第二节 酵母双杂交实验筛选HCV NS4A、NS4B蛋白的肝细胞结合蛋白 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 第三部分 HCV NS4A蛋白反式激活新基因的克隆化及在细胞内表达的研究 |
| 第一节 HCV NS4A反式激活蛋白NS4ATP1和NS4ATP2的基因克隆化及生物信息学分析 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 第二节 NS4ATP1和NS4ATP2在原核大肠杆菌和真核酵母细胞中表达的研究 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论及展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 文献综述 |
| 附录 在读期间发表和撰写的论文 |
（10）小鼠和大鼠NS5ATP4同源基因序列的生物信息学分析（论文提纲范文）
| 0 引言 |
| 1 材料和方法 |
| 2结果 |
| 3讨论 |
四、丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活基因的克隆化研究（论文参考文献）
- [1]丙型肝炎病毒非结构蛋白5A反式激活蛋白9与信号转导通路研究进展[J]. 赵静,韩铭,成军. 中国肝脏病杂志(电子版), 2018(04)
- [2]丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活基因4剪切体Ns5atp4a基因原核表达载体的构建和表达[J]. 陈立冬,成军,洪源,张连峰,韩莉,郭江. 临床肝胆病杂志, 2010(04)
- [3]HCV NS5A反式激活基因NS5ATP9对肝癌细胞生长的影响[D]. 闫记. 广西大学, 2008(01)
- [4]丙型肝炎病毒非结构蛋白5A反式激活蛋白6的亚细胞定位研究[J]. 王建军,赵平,靳雪源,成军,卿松,丁宁. 中华实验和临床病毒学杂志, 2008(01)
- [5]丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活基因NS5ATP1的反式调节基因筛选[J]. 张连峰,李继昌,韩莉,成军,陈立东. 郑州大学学报(医学版), 2007(04)
- [6]丙肝病毒非结构基因NS5A的克隆表达及其缺失突变体的基因表达谱芯片分析[D]. 陈立冬. 郑州大学, 2007(05)
- [7]基因表达谱芯片筛选NS5ATP2剪切体NS5ATP2-512转染细胞差异表达基因[J]. 白桂芹,张树林,成军,杨倩,蔺淑梅,刘妍,黄燕萍. 胃肠病学和肝病学杂志, 2005(04)
- [8]丙型肝炎病毒非结构蛋白4A、4B与肝细胞相互作用的机制研究[D]. 刘妍. 中国人民解放军军事医学科学院, 2005(06)
- [9]基因表达谱芯片技术筛选NS5ATP2 （615）蛋白反式调节基因[J]. 杨瑗,杨倩,成军,蔺淑梅,黄燕萍,赵英仁. 中西医结合肝病杂志, 2005(01)
- [10]小鼠和大鼠NS5ATP4同源基因序列的生物信息学分析[J]. 成军,杨倩,刘妍,王建军,纪冬. 世界华人消化杂志, 2004(07)